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《对外关系法》中的国际条约规则评述——兼论国际条约在我国的适用方式

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中国法律评论 2024年第1期 212-224页

作者：何其生北京大学法学院

《对外关系法》重述了《宪法》《缔结条约程序法》关于条约缔结的规定,创新规定了善意履约原则、宪法至上原则、采取适当措施适用条约原则和公共秩序原则。善意履约的规定能够体现负责任大国的形象与担当,有助于条约在国内的实施和适用... 详细信息

《对外关系法》重述了《宪法》《缔结条约程序法》关于条约缔结的规定,创新规定了善意履约原则、宪法至上原则、采取适当措施适用条约原则和公共秩序原则。善意履约的规定能够体现负责任大国的形象与担当,有助于条约在国内的实施和适用。然而,条约与国内法律之间的关系有待厘清,条约的适用则需要具体规则来实施。条约在我国有间接适用、直接适用和混合适用三种方式。从规避条约适用的风险角度,间接适用最为稳妥,但全部间接适用既不现实也不必要。直接适用虽包含四种模式,即条约直接适用模式、条约优先适用模式、条约与国内法选择适用模式、条约与国内法重叠适用模式,但核心依旧是条约直接适用模式。为化解条约直接适用风险,落实《对外关系法》关于“采取适当措施实施和适用条约和协定”的规定,中国应加强已签署公约的全流程管理,在低风险领域尤其民商事条约上规定条约直接适用模式;在高风险领域采取“一事一议”制度,同时建立案例库。

关键词：《对外关系法》条约善意履约条约优先适用模式

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高等教育建立课程思政评价体系的必要性解析

人生与伴侣 2022年第39期 26-28页

作者：左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院

2018年习近平总书记在北京大学师生座谈会上明确指出中国社会主义教育的主要目的就是培养社会主义建设者和接班人。中国的高等教育需坚持“立德树人”原则，培养具有中国特色主义价值观的新时代“四有”青年。自此，课程思政理念应运而...

2018年习近平总书记在北京大学师生座谈会上明确指出中国社会主义教育的主要目的就是培养社会主义建设者和接班人。中国的高等教育需坚持“立德树人”原则，培养具有中国特色主义价值观的新时代“四有”青年。自此，课程思政理念应运而生。经过多年的建设，目前中国课程思政体系已经日益完善，研究成果斐然，但是课程思政体系的成效却很难评估，

关键词：

《动物遗传学》实验课程分层次教学模式探究——以鸡的性别鉴定为例

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中国家禽 2022年第9期44卷 122-124页

作者：张亚妮左其生孙红艳牛英杰李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009

为实现《动物遗传学》课程在专业学习和素质教育中的目标任务,文章通过实施理论教学—示范教学—项目教学的递进式教学体系,以鸡的性别鉴定为例,重点探究在《动物遗传学》实验课程中开展分层次教学的必要性和有效性,为切实提高学生的综... 详细信息

为实现《动物遗传学》课程在专业学习和素质教育中的目标任务,文章通过实施理论教学—示范教学—项目教学的递进式教学体系,以鸡的性别鉴定为例,重点探究在《动物遗传学》实验课程中开展分层次教学的必要性和有效性,为切实提高学生的综合素养奠定基础。

关键词：《动物遗传学》分层次教学创新实践性别鉴定

基于酵母双杂交文库鉴定鸡PGCs形成过程中的关键泛素化修饰酶

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中国家禽 2023年

作者：姚泽令常梓翊龚威宋彤彤王志秀张亚妮李碧春左其生扬州大学动物科学与技术学院中国教育部国际农业与农产品安全研究联合实验室

试验拟筛选与C2EIP互作的蛋白，构建调节PGCs形成过程的泛素化E3连接酶复合体。通过逆转录和同源重组等方法构建鸡PGCs酵母文库；将C2EIP连入诱饵空载体pGBKT7中，并转化酵母感受态细胞进行诱饵载体(C2EIP-pGBKT7)的毒性和自激活检测；... 详细信息

试验拟筛选与C2EIP互作的蛋白，构建调节PGCs形成过程的泛素化E3连接酶复合体。通过逆转录和同源重组等方法构建鸡PGCs酵母文库；将C2EIP连入诱饵空载体pGBKT7中，并转化酵母感受态细胞进行诱饵载体(C2EIP-pGBKT7)的毒性和自激活检测；将酵母文库与诱饵载体菌液共培养后，通过涂板筛选阳性克隆并进行测序和生物信息学分析筛选互作蛋白。结果显示：成功构建了鸡PGCs酵母文库，其滴度为3.0×106cfu/mL，总库容为1.5×107cfu，且重组率为100%，符合筛库要求。成功构建无毒性和不能自激活的C2EIP-pGBKT7诱饵载体，能够用于后续的文库筛选。C2EIP-pGBKT7诱饵载体菌液与酵母文库共培养后，通过PCR测序与蛋白序列分析后共筛选了36个C2EIP的互作蛋白，其中RCJMBM04和CCDC174蛋白功能域分析发现分别具有典型的RING功能域和PPXY基序，进行的生物信息学分析发现WWP1和WWP2具有典型的WW功能域，能够与CCDC174结合。综上，试验成功鉴定了C2EIP/RCJMB04/CCDC174/WWP泛素化E3连接酶复合体，为后续研究泛素化修饰调控鸡PGCs形成机制奠定理论基础。

关键词：鸡原始生殖细胞泛素化修饰 C2EIP 酵母双杂交文库

LncRNA PGCT8正向调控鸡原始生殖细胞形成

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中国家禽 2023年第1期45卷 16-22页

作者：刘广政丁颖邹艺琛高嘉晨徐显帅左其生李碧春扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009 扬州大学农业与农产品安全教育部联合国际研究实验室江苏扬州225009

研究旨在对前期测序筛选到的关键LncPGCT8对鸡原始生殖细胞(PGCs)形成的影响进行深入探究。试验通过qRT-PCR和组织表达谱分析LncPGCT8在鸡PGCs和生殖嵴中的表达量。在体内外过表达/干扰LncPGCT8,通过qRT-PCR、流式细胞术、间接免疫荧光... 详细信息

研究旨在对前期测序筛选到的关键LncPGCT8对鸡原始生殖细胞(PGCs)形成的影响进行深入探究。试验通过qRT-PCR和组织表达谱分析LncPGCT8在鸡PGCs和生殖嵴中的表达量。在体内外过表达/干扰LncPGCT8,通过qRT-PCR、流式细胞术、间接免疫荧光和免疫组织化学染色检测体内外PGC形成效率。结果显示:LncPGCT8在鸡PGCs和性腺中均显著高表达(P<0.05),过表达LncPGCT8组PGCs形成效率显著高于对照组(P<0.05),干扰LncPGCT8则会显著降低PGCs形成数量(P<0.05)。结果表明LncPGCT8在体内/外均促进鸡PGCs形成,为提高体外诱导PGCs效率奠定理论基础。

关键词：鸡 LncPGCT8 原始生殖细胞

鸡gga-miR-31-5p启动子真核表达载体的构建及其转录因子结合位点预测

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浙江农业学报 2022年第4期34卷 713-719页

作者：邓哲宇王乙婷王颖洁胡菜吴宇慧赵宗仪左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。... 详细信息

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性。利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点。结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体。体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点。研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡 gga-miR-31-5p 启动子转录因子

鸡CCDC174基因生物信息学分析及其相关载体构建

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东北农业大学学报 2022年第5期53卷 42-50,79页

作者：周静夏钱孙国兴靳锴牛英杰孙红艳左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

CCDC174被发现是鸡原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)关键调控基因C2EIP的互作基因,在PGCs起源、发育和分化中发挥重要作用。试验克隆CCDC174基因全长并对其进行生物信息学分析,构建过表达和干扰载体进行检测。结果表明,CCDC17... 详细信息

CCDC174被发现是鸡原始生殖细胞(Primordial germ cells,PGCs)关键调控基因C2EIP的互作基因,在PGCs起源、发育和分化中发挥重要作用。试验克隆CCDC174基因全长并对其进行生物信息学分析,构建过表达和干扰载体进行检测。结果表明,CCDC174主要定位于细胞核中,有DUF4078、PTZ00121和PABP 3个功能域,存在磷酸化修饰位点且该基因在鸟类中保守性较高;酶切结果表明CCDC174载体构建成功,q RT-PCR和Western blot结果进一步表明构建的载体可有效干扰和过表达CCDC174,为后期对CCDC174功能验证和机制探究提供参考依据和技术手段。

关键词：鸡生物信息学分析 CCDC174基因原始生殖细胞(PGCs)

鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测

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中国家禽 2023年第10期45卷 12-18页

作者：武嵘峰陈欣雨胡菜耿晴晴程富富席一凡左其生张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。

关键词： TBX6 过表达载体干扰载体

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基因组编辑技术的研究进展

畜牧与兽医 2015年第7期47卷 124-129页

作者：李东左其生张亚妮李碧春扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

随着人类测序技术的发展与成熟,以锌指核酸酶(ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)以及成簇的规律间隔的短回文重复序列及相关基因(CRISPR/Cas)为主的基因组编辑技术,在生物、农业、环境及医学等各个领域中发挥着独特的作用。基因... 详细信息

随着人类测序技术的发展与成熟,以锌指核酸酶(ZFN)、类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)以及成簇的规律间隔的短回文重复序列及相关基因(CRISPR/Cas)为主的基因组编辑技术,在生物、农业、环境及医学等各个领域中发挥着独特的作用。基因编辑技术主要是通过在外源DNA靶位点上产生双链切口,从而诱导出同源重组修复或非同源末端连接,进而实现基因组的编辑。目前ZFN和TALEN技术被广泛运用,虽然在一定程度上获得明显的效果,但因设计复杂,成本较高,使其运用有所局限。CRISPR/Cas技术近年来凭借其高效、精确的编辑成为最新一代的基因编辑技术。本文就以上3种基因打靶技术的作用原理、应用及优缺点作简单概述,为基因编辑的实践应用提供理论基础。

关键词：基因组编辑 ZFN TALEN CRISPR/Cas