检索结果-南通市图书馆

作者：崔潞晴华中农业大学

学位级别：硕士

沙门菌是公认的世界上最常见的微生物病原体之一,该细菌编码成簇的规律间隔短回文重复序列(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat sequences,CRISPR)和CRISPR相关基因(CRISPR-associated genes,cas genes)组成的CRISPR-Cas系统,为抵御外来核酸入侵提供了适应性免疫。之前的研究表明,细菌可以利用自身编码的CRISPR-Cas系统靶向降解内源性基因,从而改变细菌自身毒力相关特征及其对宿主的毒力作用。然而,沙门菌中的CRISPR-Cas系统在细菌入侵宿主细胞过程中是否具有相似的功能尚不清楚。本研究通过检测沙门菌关键毒力基因的表达量,筛选出可能具有不同致病性的沙门菌进行毒力表型的检测,从而筛选出携带CRISPR-Cas系统的高致病性沙门菌进行后续研究。分析cas3基因缺失导致的毒力表型变化,并在转录组内筛选cas3相关基因。全面了解细菌CRISPR-Cas系统的核心基因cas3与毒力的相关性及其调控机制,为沙门菌感染宿主及其他细菌毒力表型的调控提供深入的认识,为沙门菌病的防治提供理论依据。通过PCR检测150株鸡沙门菌中CRISPR1和CRISPR2位点,并统计其检出情况。发现CRISPR1位点的检出率为78%,CRISPR2的检出率为80.67%,携带CRISPR位点的菌株占总数的比例为92.67%,仅有11株鸡沙门菌不携带该位点,可见CRISPR-Cas系统携带菌株为流行沙门菌,这可能是沙门菌长期进化选择的结果。以标准菌鼠伤寒沙门菌CVCC541为对照,通过q RT-PCR检测各菌株中23个关键毒力基因的相对表达量,包括:stn、spv R、spv B、spv C、prg H、hil A、avr A、ttr C、ssa Q、mgt C、sop B、rpo S、bcf C、mis L、fim A、flj B、lpf C、sod C1、rck、pef A、tra T、sop E1和pag C。结果发现鼠伤寒、肠炎和鸭沙门菌的毒力基因表达水平相对较高。建立RAW264.7细胞和IPEC-J2细胞感染模型,检测沙门菌对两种宿主细胞感染3 h时的粘附侵袭力。根据细菌血清型及细胞感染试验的测定结果,筛选出9株携带CRISPR位点的鸡沙门菌进行雏鸡感染试验,检测其对动物的致病性,从而筛选出携带CRISPR-Cas系统的高致病性沙门菌。这些细菌包括:对两种细胞的粘附侵袭力均较强的菌株211、172、64、92、94、76,中等粘附侵袭力菌株201、62及1株对巨噬细胞具有较强的粘附侵袭力但对肠上皮细胞无粘附侵袭力的206号菌株。其中肠炎沙门菌2株,鼠伤寒沙门菌4株,鸭沙门菌2株及印第安纳沙门菌1株。肌肉注射感染雏鸡后,鼠伤寒沙门菌172号菌株致死率为33.33%,其余菌株均为100%。经口感染及二次感染雏鸡后,9株沙门菌经两次感染雏鸡的致死率变异性较大,分别在0-16.67%之间和0-100%之间。其中201号菌株致死性最强,经口感染和二次感染的致死率分别是16.67%和100%,其次211号菌株两次感染的致死率分别是0和80%,考虑到211号菌株的细胞粘附侵袭力较强,因此我们选择211号菌株(以下统称cas3 WT)进行后续cas3基因相关功能和基因表达调控的研究。利用自杀质粒p LP12,通过两次同源重组构建肠炎沙门菌211的cas3基因缺失突变株Δcas3;利用无缝克隆构建cas3基因的p BAD33-CM重组表达质粒,将该质粒转入Δcas3得到cas3基因回补表达株Δcas3/p BAD33-CM-cas3(以下统称Δcas3/p-cas3)。通过测定cas3 WT,Δcas3和Δcas3/p-cas3的生长力、生物被膜形成情况、对细胞的粘附侵袭力,细胞致死率,动物致死性的差异,考察cas3基因对细菌毒力表型的影响。结果显示三株菌的生长曲线无显著差异,可以进行其他毒力表型的差异分析。后续研究发现,cas3基因的缺失突变导致沙门菌的其他毒力显著降低,如生物被膜形成能力显著降低,感染与侵入宿主细胞的细菌量显著降低,感染导致宿主细胞死亡比例显著降低。另外通过三株菌的雏鸡感染试验,计算得出三株菌的半数致死量(median lethal dose,LD),结果显示Δcas3的半数致死量极显著高于cas3 WT和Δcas3/p-cas3,即cas3基因的缺失导致沙门菌致病力显著减弱。以上结果说明cas3基因对沙门菌的毒力具有一定的影响。采用第二代测序(Next-Generation sequencing,NGS)技术,基于Illumination Hi Seq测序平台,对构建的文库进行双末端(Paired-end,PE)测序,筛选由于cas3基因敲除而差异表达的毒力基因,从而分析cas3基因与这些毒力基因的关系。RNA

关键词：沙门菌毒力 CRISPR-Cas cas3 群体感应沙门菌毒力岛 Ⅲ型分泌系统

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抗细菌耐药性策略:质粒消除

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国外医药（抗生素分册） 2023年第3期44卷 185-191页

作者：刘泉曹征征崔潞晴郭凯旋张凡戴梦红华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心武汉430070

细菌可以通过多种方式产生对抗菌药物的耐药性,其中最为常见的方式之一为获得携带有耐药基因的质粒。耐药质粒可以在菌株之间转移,导致耐药性的广泛传播,因此消除耐药质粒是缓解细菌耐药扩散的关键。本综述介绍了基于物理、化学以及生... 详细信息

细菌可以通过多种方式产生对抗菌药物的耐药性,其中最为常见的方式之一为获得携带有耐药基因的质粒。耐药质粒可以在菌株之间转移,导致耐药性的广泛传播,因此消除耐药质粒是缓解细菌耐药扩散的关键。本综述介绍了基于物理、化学以及生物学的细菌耐药质粒消除方法的研究进展,并阐述了质粒消除的机理,为今后探寻安全有效地消除耐药质粒的研究方法提供参考。

关键词：耐药性质粒质粒消除消除机制抗生素耐药基因

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核内不均一核糖核蛋白研究进展

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生理科学进展 2017年第6期48卷 453-458页

作者：邵羊阳陆启荣崔潞晴戴梦红袁宗辉华中农业大学动物医学院武汉430070 华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)农业部食品兽药残留检测重点实验室武汉430070

核内不均一核糖核蛋白(hnRNPs)是一类参与了多种重要生命过程的RNA结合蛋白。早期的研究发现hnRNPs主要参与新生前体mRNA(pre-mRNA)的包装过程,随着各方面研究的逐渐深入,越来越多的证据表明hnRNPs的功能不仅限于pre-mRNA的包装,还在转... 详细信息

核内不均一核糖核蛋白(hnRNPs)是一类参与了多种重要生命过程的RNA结合蛋白。早期的研究发现hnRNPs主要参与新生前体mRNA(pre-mRNA)的包装过程,随着各方面研究的逐渐深入,越来越多的证据表明hnRNPs的功能不仅限于pre-mRNA的包装,还在转录调节、可变剪接、核质运输、DNA修复等过程中发挥重要作用。本文将对hnRNPs的结构特征和生物学功能予以综述,旨在为后续关于hnRNPs的调控网络及功能分析等研究提供依据。

关键词：核内不均一核糖核蛋白结构特征生物学功能

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鸡产气荚膜梭菌耐药研究进展

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国外医药（抗生素分册） 2022年第1期43卷 30-36页

作者：冯家伟王湘如赵月崔潞晴房诗薇王玉莲程古月戴梦红华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心武汉430070 华中农业大学国家兽药残留基准实验室(HZAU)/农业部兽药残留检测重点实验室武汉430070

产气荚膜梭菌是一种食源性致病菌,可存在于外界环境和健康家禽等动物的肠道中,在家禽肠道中增殖后可引起坏死性肠炎等疾病,对全世界的肉鸡和火鸡产业造成严重损害。此外,产气荚膜梭菌还可引起人类食物中毒、伤口的气性坏疽等疾病,危害... 详细信息

产气荚膜梭菌是一种食源性致病菌,可存在于外界环境和健康家禽等动物的肠道中,在家禽肠道中增殖后可引起坏死性肠炎等疾病,对全世界的肉鸡和火鸡产业造成严重损害。此外,产气荚膜梭菌还可引起人类食物中毒、伤口的气性坏疽等疾病,危害人类健康。养殖业通常采用在饲料中添加抗生素的方法预防鸡坏死性肠炎,但自2017年开始的"减抗禁抗"政策的实施必然对临床细菌耐药性产生很大的影响,因此有必要了解当前鸡源产气荚膜梭菌的耐药情况。本文结合目前鸡产气荚膜梭菌的耐药现状、耐药基因检测和预防措施展开讨论,为养殖业合理用药控制其耐药性的产生和传播提供参考。

关键词：产气荚膜梭菌鸡坏死性肠炎耐药性

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I-E型CRISPR-Cas系统调控沙门菌内源性基因表达的研究

I-E型CRISPR-Cas系统调控沙门菌内源性基因表达的研究

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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十五次学术讨论会

作者：崔潞晴王湘如赵月冯家伟张凡戴梦红湖北省生猪健康养殖协同创新中心华中农业大学

[目的]CRISPR-Cas系统是细菌识别并降解特定外源物质的原核生物免疫系统,可分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型,共11个亚型。沙门氏菌中该系统含两个CRISPR位点,标志蛋白Cas3,为I-E型。近年来的研究表明CRISPR-Cas系统可通过调控病原菌内源性基因表达进而... 详细信息

[目的]CRISPR-Cas系统是细菌识别并降解特定外源物质的原核生物免疫系统,可分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ型,共11个亚型。沙门氏菌中该系统含两个CRISPR位点,标志蛋白Cas3,为I-E型。近年来的研究表明CRISPR-Cas系统可通过调控病原菌内源性基因表达进而调节细菌毒力。本研究旨在分析沙门菌中I-E型CRISPR-Cas系统调控其内源性基因表达情况,并研究其对细菌毒力及耐药性的调控作用。[方法]肠炎沙门菌SE211为野生型cas3基因携带株,构建cas3基因缺失突变株和回补表达株,通过检测其生物被膜形成能力、细菌对宿主细胞及动物的感染进而分析其毒力和耐药表型差异,通过RNA-Seq技术筛选与Cas3表达相关的差异基因。[结果]毒力表型的研究结果表明:cas3基因缺失对沙门菌的生长无影响,能显著降低沙门菌的生物被膜形成能力,导致沙门菌侵入宿主细胞(巨噬细胞及肠上皮细胞)能力显著降低,且cas3基因缺失株感染的巨噬细胞的存活率显著提高;cas3基因缺失导致沙门菌感染动物的致死率显著降低;cas3基因缺失株的耐药性并无显著变化,仅降低了沙门菌对红霉素的耐药性。RNA-Seq的结果表明:cas3基因缺失导致群体感应(QS)相关的Lsr操纵子编码的部分基因(lsrF,E,G,B)表达量上调,沙门菌毒力岛SPI-1操纵子编码基因如PrgJIKH和SpaMSQOKNPLR等及耐药相关基因表达量下调。[结论]细菌毒力和细菌耐药性均为目前微生物危害的关键因素,本研究阐明了CRISPR-Cas系统调控沙门菌毒力和耐药性的一个重要的机制。沙门菌中CRISPR-Cas系统可能通过调控内源性基因表达参与调控其生物被膜形成、对宿主细胞及动物的致病性和细菌耐药性。根据以上结果,可以设计和合成调节化合物,以阻断cas3基因的表达,进而降低细菌的毒力及耐药性。此外,本研究为了解CRISPR-Cas系统在沙门菌致病性和耐药性中的作用提供了一种新的途径,但其分子机制仍需探索。

关键词： CRISPR-Cas系统沙门菌毒力耐药性内源性基因

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喹赛多调控猪锌指蛋白SZNF表达的机制研究

喹赛多调控猪锌指蛋白SZNF表达的机制研究

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中国畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：戴梦红崔潞晴邢丹王旭彭大鹏刘振利袁宗辉国家兽药残留基准实验室农业部食品安全评价重点开放实验室华中农业大学

引言猪锌指蛋白SZNF(porcine zinc finger protein)是CCHC型锌指蛋白家族成员,主要通过与胞内RNA结合,在转录后水平调控细胞的增殖、分化、炎症反应等过程。喹赛多能显著提高SZNF的表达,可能与喹赛多对信号通路的调控有关。本试验旨在...

引言猪锌指蛋白SZNF(porcine zinc finger protein)是CCHC型锌指蛋白家族成员,主要通过与胞内RNA结合,在转录后水平调控细胞的增殖、分化、炎症反应等过程。喹赛多能显著提高SZNF的表达,可能与喹赛多对信号通路的调控有关。本试验旨在研究参与喹赛多调控SZNF表达的信号通路,阐明喹赛多调控SZNF表达的机制,为喹赛多抗菌促生长效应提供理论依据。材料与方法本试验用到的主要细胞有猪肾细胞PK-15和猪原代肝细胞。首先确定喹赛多诱导SZNF表达的时效量效关系,然后用喹赛多和信号通路特异性抑制剂共同孵育细胞,通过RT-qPCR和Western Blot检测SZNF表达及相关信号通路因子的表达、磷酸化水平,找到与喹赛多调控SZNF表达相关的主要信号通路,并确定这些信号通路的时空关系。

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转录因子MondoA在糖代谢中的作用

转录因子MondoA在糖代谢中的作用

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中国畜牧兽医学会2017年学术年会

作者：崔潞晴黄德玉陆启荣王旭袁宗辉戴梦红华中农业大学国家兽药残留基准实验室

MondoA蛋白也称为MLXIP (Mlx interacting protein),是Mlx家族的碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)转录调控因子,能够调控细胞内糖代谢基因的表达,从而参与机体葡萄糖代谢和能量平衡的维持。本文综述了MondoA的特征、Mondo...

MondoA蛋白也称为MLXIP (Mlx interacting protein),是Mlx家族的碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)转录调控因子,能够调控细胞内糖代谢基因的表达,从而参与机体葡萄糖代谢和能量平衡的维持。本文综述了MondoA的特征、MondoA对糖代谢的调控及其与癌症的关系,为细胞及机体代谢机制的研究、代谢性疾病的治疗提供依据。MondoA及其同系物MondoB蛋白的核酸序列具有高度保守性,揭示了其糖代谢功能的高度保守性。

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沙门氏菌和大肠埃希氏菌耐药基因qnrS研究进展

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动物医学进展 2021年第3期42卷 74-77页

作者：赵月王湘如彭忠崔潞晴冯家伟郭凯旋曹征征张凡戴梦红华中农业大学生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

qnrS是质粒介导的喹诺酮类药物的耐药基因,通过保护DNA回旋酶活性从而降低宿主菌对喹诺酮类药物的敏感性。这种保护作用依赖于qnrS基因的表达水平,同时,qnrS的表达主要受喹诺酮类药物浓度的影响,且σ-D调控因子(regulator of sigma D,R... 详细信息

qnrS是质粒介导的喹诺酮类药物的耐药基因,通过保护DNA回旋酶活性从而降低宿主菌对喹诺酮类药物的敏感性。这种保护作用依赖于qnrS基因的表达水平,同时,qnrS的表达主要受喹诺酮类药物浓度的影响,且σ-D调控因子(regulator of sigma D,Rsd)也参与该基因的表达调控。qnrS基因在沙门氏菌中高度流行,并且是大肠埃希氏菌中质粒介导的喹诺酮类耐药基因的优势基因。qnrS可以在细菌间进行传播,或与其他耐药基因共存于同一质粒上发生共转移,从而导致多重耐药的发生。论文对qnrS基因的发现、表达及其调控机制、在沙门氏菌和大肠埃希氏菌中的流行及传播的研究进展进行综述,以期为控制qnrS基因介导的耐药性提供参考。

关键词： qnrS基因表达调控沙门氏菌大肠埃希氏菌耐药性

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兽用非甾体抗炎药的应用现状

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动物医学进展 2020年第2期41卷 114-119页

作者：赵欢欢潘源虎王湘如崔潞晴赵月冯家伟程古月王旭袁宗辉戴梦红华中农业大学动物医学院湖北武汉430070 华中农业大学国家兽药残留基准实验室/农业部食品兽药残留检测重点实验室湖北武汉430070 湖北省生猪健康养殖协同创新中心湖北武汉430070

动物疼痛和炎症可影响其健康状况、养殖场经济效益等,预防和治疗动物疼痛、炎症具有重要意义。非甾体抗炎药可以减少动物疼痛和炎症的发生。近几年对非甾体抗炎药在动物中的应用研究越来越多,同时非甾体抗炎药的一些新功能被发现。论文... 详细信息

动物疼痛和炎症可影响其健康状况、养殖场经济效益等,预防和治疗动物疼痛、炎症具有重要意义。非甾体抗炎药可以减少动物疼痛和炎症的发生。近几年对非甾体抗炎药在动物中的应用研究越来越多,同时非甾体抗炎药的一些新功能被发现。论文对兽医常用非甾体抗炎药物的应用研究进展做一综述,以期为非甾体抗炎药在动物中的合理使用以及进一步研究提供参考。

关键词：非甾体抗炎药动物兽医应用

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转录因子MondoA在糖代谢中的研究进展

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动物医学进展 2018年第3期39卷 97-102页

作者：崔潞晴黄德玉陆启荣邵羊阳王旭程古月郝海红彭大鹏袁宗辉戴梦红华中农业大学国家兽药残留基准实验室HZAU/农业部食品兽药残留检测重点实验室湖北武汉430070

转录因子MondoA是细胞内葡萄糖代谢的关键调控因子,与Max-like蛋白x(Mlx)形成异源二聚体调控糖酵解相关基因的表达,介导细胞代谢反应,从而维持胞内外葡萄糖稳态。由于人类代谢性疾病和癌症通常伴随着葡萄糖代谢紊乱,因此更好地理解细胞... 详细信息

转录因子MondoA是细胞内葡萄糖代谢的关键调控因子,与Max-like蛋白x(Mlx)形成异源二聚体调控糖酵解相关基因的表达,介导细胞代谢反应,从而维持胞内外葡萄糖稳态。由于人类代谢性疾病和癌症通常伴随着葡萄糖代谢紊乱,因此更好地理解细胞的葡萄糖感应及代谢机制,将为治疗代谢性疾病和癌症提供新的方向。论文综述了细胞中MondoA的分子特征、葡萄糖对MondoA的激活、MondoA对糖代谢的调控及其与癌症的关系,并讨论了可能的研究方向,为细胞代谢机制的研究和代谢性疾病的治疗提供参考。

关键词：转录因子 MondoA 糖代谢代谢性疾病

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