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金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡及其信号通路的研究

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金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡及其信号通路的研究

作者：崔新洁内蒙古大学

学位级别：硕士

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染造成持续性奶牛乳房炎的发病机制复杂,目前仍未彻底阐明。牛乳腺上皮细胞是病原菌穿越乳导管进入牛乳腺后首先接触的细胞,其与病原微生物的相互作用对于疾病的发展进程和转归有非常重要的意... 详细信息

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染造成持续性奶牛乳房炎的发病机制复杂,目前仍未彻底阐明。牛乳腺上皮细胞是病原菌穿越乳导管进入牛乳腺后首先接触的细胞,其与病原微生物的相互作用对于疾病的发展进程和转归有非常重要的意义。许多病原微生物能够诱导宿主细胞凋亡,并以此影响疾病的发生发展进程。金黄色葡萄球菌可以诱导单核细胞及内皮细胞等多种细胞发生凋亡,从而逃避免疫监视,加重机体感染。金黄色葡萄球菌感染造成奶牛持续性乳房炎是否与其诱导牛乳腺上皮细胞凋亡有关,目前未见相关报道。本研究以3株金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞为模型,观察不同金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡情况,检测金黄色葡萄球菌毒力因子与其诱导牛乳腺细胞凋亡的相关性,并在此基础上,探索金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的信号传导机制,以期为金黄色葡萄球菌持续性牛乳房炎发病机理解析、抗细菌药物设计和疫苗研制提供理论依据。首先,采用乳汁分离法和胶原酶消化法分离培养牛乳腺上皮细胞,并通过细胞免疫荧光染色法、RT-PCR及核型分析鉴定牛乳腺上皮细胞;其次,用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜、扫描和透射电子显微镜、细胞核染色法观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化,并通过流式细胞术(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;再次,通过对试验所用3株金黄色葡萄球菌的抗药性、生长特性、溶血性、粘附和侵袭性能进行检测,探索其与牛乳腺上皮细胞凋亡的相关性;最后,通过ELISA检测感染前后细胞凋亡相关蛋白caspase1/3/8/9的活性变化,并用Real-time PCR检测感染前后牛乳腺上皮细胞死亡受体Fas及其下游FADD的表达情况,死亡配体TRAIL、Apo3L及LTα的表达情况,IL-1βp及TNF-a的表达情况,探讨金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的信号传导机制。得出如下结果：1)建立了从牛乳汁及乳腺组织中分离培养牛乳腺上皮细胞的方法。乳汁分离法相对组织培养法而言,取材便捷并可有效缩减成本,亦可获得纯净的牛乳腺上皮细胞;2)证明金黄色葡萄球菌可以诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡;3)证明金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的凋亡诱导能力与菌株的个体差异有关,其溶血性与侵染性可能与牛乳腺上皮细胞凋亡有一定的相关性;4)初步证明金黄色葡萄球菌可能通过Fas-FADD-caspase8-caspase3凋亡传导途径诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,而线粒体细胞色素C-caspase9与caspase1-IL1β途径可能不参与此凋亡诱导过程。为解释金黄色葡萄球菌持续性牛乳房炎的发病机制提供了有益的试验依据。

关键词：牛乳腺上皮细胞金黄色葡萄球菌持续性牛乳房炎细胞凋亡信号通路

核酸疫苗初免-蛋白疫苗加强的免疫策略提高日本血吸虫核酸疫苗免疫效果

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生物工程学报 2013年第6期29卷 814-822页

作者：刘秉春崔新洁罗新松王潇内蒙古大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010021 湖南省血吸虫病防治研究所湖南岳阳414000

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸... 详细信息

为研制抗血吸虫疫苗提供实验依据,探讨了抗血吸虫SjGST-32核酸疫苗与蛋白疫苗联合免疫的免疫增强效应及免疫应答特征。将日本血吸虫DNA疫苗VR1012-SjGST-32与重组蛋白疫苗rSjGST-32分别在第0、2和4周免疫小鼠,在第6周攻击感染日本血吸虫尾蚴,攻击感染45 d后剖杀小鼠,计算减虫率、检卵率以及检测肝脏病理变化,观察免疫保护效果;检测小鼠血清中特异性IgG抗体滴度,T细胞增殖反应和抗原特异性CD4+IFN-γ+、CD4+IL-4+和CD4+IL-10+的数量,探讨免疫应答特征。结果显示,DNA初免-蛋白加强的联合免疫组的保护作用优于单独免疫组,显著提高了减虫率(42.3%)和减卵率(59.6%),并且能够显著减轻血吸虫虫卵对肝脏的病理损害;进一步发现,DNA疫苗和蛋白疫苗联合应用增强了机体T淋巴细胞增殖反应、抗体IgG滴度以及抗原特异性CD4+IFN-γ+的产生。这些研究为新型血吸虫疫苗的优化设计和合理应用提供了依据。

关键词：核酸疫苗蛋白疫苗血吸虫免疫效果

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牛奶中乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定

生物技术通报 2013年第3期29卷 107-113页

作者：崔新洁王婷刘秉春陶林王潇内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010010

旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定... 详细信息

旨在建立简便、经济、纯净的牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,并对所培养细胞进行鉴定。以新鲜牛奶为材料,离心收集细胞进行原代培养并传代,通过测定生长曲线、乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白8和18、β-酪蛋白、核型等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为乳腺上皮细胞。离心收集到的细胞原代培养3 d后形成多个单克隆,细胞呈典型的铺路石状,同时伴随少量的吞噬细胞,继续培养至单克隆汇合时,细胞表层产生大小不等的乳滴,吞噬细胞大多转移到乳滴中,传代后,得到纯净的乳腺上皮细胞,吞噬细胞随传代而消失;细胞生长曲线呈"S"型,RT-PCR法扩增到了乳腺上皮细胞的骨架蛋白8、18以及β-酪蛋白,细胞免疫组化检测到了细胞角蛋白8,核型为29对端着丝粒常染色体,1对近端着丝粒性染色体。通过以上试验证明,乳汁分离法可以培养纯净的、具有正常分裂增生能力的牛乳腺上皮细胞,建立了乳腺上皮细胞的体外培养模型。

关键词：乳汁牛乳腺上皮细胞细胞骨架蛋白泌乳

中学生心理学形象与专业性心理求助态度的关系:城乡来源的调节作用

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社会科学前沿 2024年第7期13卷 377-386页

作者：张增彤孙晓洁崔新媛河南师范大学教育学部河南新乡河南轻工职业学院财经管理系河南郑州

探讨中学生心理学形象与其专业性心理求助态度以及城乡来源的调节作用,为乡村和城镇心理健康教育提供理论依据。方法采用问卷法对185名在校中学生进行调查,所回收数据利用SPSS25.0进行统计分析,得出:(1) 较低年级、家庭收入较高、与心... 详细信息

探讨中学生心理学形象与其专业性心理求助态度以及城乡来源的调节作用,为乡村和城镇心理健康教育提供理论依据。方法采用问卷法对185名在校中学生进行调查,所回收数据利用SPSS25.0进行统计分析,得出:(1) 较低年级、家庭收入较高、与心理学接触较多的中学生对心理学形象有较高评价;(2) 城乡来源对于中学生心理学形象与其专业性心理求助态度关系的调节作用显著。对来源于乡村的中学生而言,专业性心理求助态度随着心理学形象评价的升高而显著提升;对来源于城镇的中学生而言,心理学形象的评价并不能显著预测专业性心理求助态度。结果揭示了心理学形象对于其专业性心理求助态度的正面影响,提示了在响应国家政府对心理健康建设的号召时,注重提升乡村(尤其是偏远地区)中学生心理健康的同时,也要加强城镇中学生心理健康的有效建设,特别是青春期是中学生身心发育、性格培养的关键时期,影响其专业性心理求助态度的障碍更应该得到关注。

关键词：中学生心理学形象专业性心理求助态度城乡来源

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数字经济发展能否缓解工业用地要素错配

中国土地科学 2024年第7期38卷 74-84页

作者：崔新蕾段珂内蒙古大学经济管理学院内蒙古呼和浩特010021

研究目的:探究数字经济发展对工业用地要素错配的影响效应及机制,为深化工业用地要素市场化配置改革,助推工业经济高质量发展提供决策参考。研究方法:双向固定效应模型、中介效应模型回归分析。研究结果:(1)数字经济发展抑制了工业用地... 详细信息

研究目的:探究数字经济发展对工业用地要素错配的影响效应及机制,为深化工业用地要素市场化配置改革,助推工业经济高质量发展提供决策参考。研究方法:双向固定效应模型、中介效应模型回归分析。研究结果:(1)数字经济发展抑制了工业用地要素错配,一系列稳健性检验后结论依然成立;(2)数字经济能通过提升绿色全要素生产率和工业结构高级化两条渠道抑制工业用地要素错配;(3)对市场化程度较低、互联网发展规模较大、过度错配城市以及非资源城市的抑制作用更显著;(4)抑制作用随着错配程度的降低而逐渐减弱,并能推动土地出让结构向增加商住用地方向调整。研究结论:应加强数字经济基础设施建设,强化数字经济赋能效应,统筹兼顾全国数字产业空间布局,充分发挥数字化技术对工业用地要素错配的矫正作用。

关键词：数字经济工业用地要素错配土地出让结构

中国降碳-减污-扩绿-增长协同发展空间关联网络特征及影响因素研究

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环境科学研究 2024年第7期37卷 1446-1457页

作者：崔新蕾王冉冉内蒙古大学经济管理学院内蒙古呼和浩特010021

协同推进降碳-减污-扩绿-增长已成为我国经济社会发展全面绿色转型的必然选择。基于我国30个省份面板数据(不包含港澳台地区以及西藏自治区数据),运用熵值法、耦合协调度模型和社会网络分析方法,分析各省份间降碳-减污-扩绿-增长协同演... 详细信息

协同推进降碳-减污-扩绿-增长已成为我国经济社会发展全面绿色转型的必然选择。基于我国30个省份面板数据(不包含港澳台地区以及西藏自治区数据),运用熵值法、耦合协调度模型和社会网络分析方法,分析各省份间降碳-减污-扩绿-增长协同演变趋势及空间关联网络特征。结果表明:①各省份降碳-减污-扩绿-增长协同效应的变化趋势基本一致,但在空间上呈现东部>东北>西部>中部的区域不均衡特征。②降碳-减污-扩绿-增长协同效应呈现以东部地区为核心的复杂空间网络结构,省际间空间关联性呈上升态势,但网络结构稳定性还有待提高。③北京市、天津市和上海市等地区凭借优越区位,在关联网络中处于主导地位,而宁夏回族自治区、黑龙江省和新疆维吾尔自治区等地区对其他地区的影响较小。④北京市、天津市和上海市等地区属于“主受益”板块,浙江省、广东省等地区属于“经纪人板块”,安徽省、江西省和湖北省等地区属于“净溢出”板块。⑤降碳-减污-扩绿-增长协同效应的空间关联网络受多种因素共同影响,人力资本水平、科技投入、市场化水平和数字经济发展均有利于空间关联关系的建立。研究显示,中国降碳-减污-扩绿-增长协同效应存在空间关联性,需进一步加强省份间的绿色合作与交流,共同推动降碳-减污-扩绿-增长协同发展。

关键词：降碳-减污-扩绿-增长协同效应熵值法耦合协调度模型社会网络分析

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24味中药对金黄色葡萄球菌生物膜作用的研究

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时珍国医国药 2017年第5期28卷 1079-1081页

作者：崔新洁夏瑾尤金彪浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 浙江省中山医院浙江杭州310000

目的从24味中药中筛选金黄色葡萄球菌生物膜的抑制剂。方法以微孔板置片法建立金黄色葡萄球菌生物膜体外模型;倍比稀释法测定24味中药水提液对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);微孔板法结合结晶紫染色法检测不同浓度提取液对金黄色... 详细信息

目的从24味中药中筛选金黄色葡萄球菌生物膜的抑制剂。方法以微孔板置片法建立金黄色葡萄球菌生物膜体外模型;倍比稀释法测定24味中药水提液对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);微孔板法结合结晶紫染色法检测不同浓度提取液对金黄色葡萄球菌生物膜的形成与清除作用。结果体外培养24h时形成成熟生物膜;五倍子MIC最低,为0.39 mg/ml,其次为苏木12.5 mg/ml,黄芩50 mg/ml,丹参100 mg/ml;黄芩、毛冬青、五倍子提取液在1/2 MIC时对生物膜形成具有明显抑制作用;五倍子、黄芩、蜂房、毛冬青、蒲公英在2MIC时对生物膜清除作用效果显著。结论五倍子和黄芩两味中药水提液对金黄色葡萄球菌生长具有明显抑制作用,且对其生物膜的形成与清除作用显著。

关键词：中药金黄色葡萄球菌生物膜

金黄色葡萄球菌诱导牛原代乳腺上皮细胞的凋亡

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中国农业科学 2013年第15期46卷 3212-3219页

作者：崔新洁胡庆亮李奕平陶琳修磊刘秉春陈媛王潇内蒙古大学生命科学学院

【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮... 详细信息

【目的】观察金黄色葡萄球菌能否诱导牛原代乳腺上皮细胞发生凋亡。【方法】先以新鲜牛奶为材料分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定,然后用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;RT-PCR检测细胞凋亡通路中关键蛋白caspase 3和caspase 8的变化情况。【结果】从乳汁中分离的细胞经原代培养后,细胞呈典型的铺路石状,细胞表层可产生大小不等的乳滴,RT-PCR法扩增出乳腺上皮细胞的骨架蛋白8特异性条带;免疫荧光细胞染色法结果显示分离培养的牛乳腺上皮细胞表达角蛋白8;金黄色葡萄球菌感染牛乳腺上皮细胞3 h后,可诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,表现为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型凋亡特征;Annexin V/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,差异极显著(P﹤0.01);与对照组相比,感染组细胞caspase3及caspase 8表达量明显增高。【结论】金黄色葡萄球菌可以诱导牛原代乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征和生化特性,凋亡通路可能涉及caspase 3和caspase 8参与的外源性凋亡途径。

关键词：金黄色葡萄球菌牛乳腺上皮细胞细胞凋亡

超广谱β内酰胺酶肠杆菌拮抗菌的鉴定及抑菌产物分析

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基因组学与应用生物学 2019年第6期38卷 2640-2646页

作者：崔新洁江夏薇夏瑾刘丽雯王晨婷浙江中医药大学

本研究对从土壤中筛选出的超广谱β内酰胺酶肠杆菌的拮抗菌进行鉴定,并对其发酵产物抑菌效果进行研究。以分离到的污水中的15株产超广谱β内酰胺酶肠杆菌为测试菌株,土壤中分离到的1株拮抗菌为试验菌株,通过点接种法、平板对峙法和发酵... 详细信息

本研究对从土壤中筛选出的超广谱β内酰胺酶肠杆菌的拮抗菌进行鉴定,并对其发酵产物抑菌效果进行研究。以分离到的污水中的15株产超广谱β内酰胺酶肠杆菌为测试菌株,土壤中分离到的1株拮抗菌为试验菌株,通过点接种法、平板对峙法和发酵产物抑菌试验测试试验菌株对测试菌住的拮抗作用;通过16S r DNA PCR产物测序及生理生化反应鉴定试验菌株种属;通过发酵产物氯仿粗提物薄层色谱分析试验,结合细菌次级代谢产物基因簇预测在线分析,初步研究试验菌株的抑菌成分。显示试验菌株鉴定为铜绿假单胞菌,对15株产超广谱β内酰胺酶肠杆菌均有拮抗作用,其发酵产物氯仿粗提物中组分之一具有明显抑菌作用,次级代谢产物基因簇在线软件分析推测该产物可能为Nrps、Bacteriocin、Phenazine、Siderophore、Hserlactone、Arylpolyene中的一种或几种。本研究提示铜绿假单胞菌含有多种已知或未知次级代谢产物,为开发利用铜绿假单胞菌资源提供研究资料。

关键词： ESBLs 铜绿假单胞菌拮抗作用