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一种肝癌细胞特异性抗体的靶抗原鉴定及该抗原在肝癌组织中的表达研究

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一种肝癌细胞特异性抗体的靶抗原鉴定及该抗原在肝癌组织中的表达...

作者：崔华清中国人民解放军军事医学科学院

学位级别：硕士

采用各种展示文库筛选肿瘤细胞特异性抗体在二十世纪八、九十年代就已经开始。但是，针对肿瘤细胞筛选到的这些抗体的抗原鉴定则较困难。虽然筛选到了一些肿瘤细胞特异性抗体，但是只有少部分抗体所识别的抗原被鉴定出来。其主要原因是... 详细信息

采用各种展示文库筛选肿瘤细胞特异性抗体在二十世纪八、九十年代就已经开始。但是，针对肿瘤细胞筛选到的这些抗体的抗原鉴定则较困难。虽然筛选到了一些肿瘤细胞特异性抗体，但是只有少部分抗体所识别的抗原被鉴定出来。其主要原因是蛋白质微量鉴定技术发展滞后。蛋白质组学的出现催生了许多新技术，其中质谱技术的发展使得其在蛋白质的分析和鉴定中发挥着不可替代的作用。PMF或者LC-MS／MS是目前最常用的蛋白质质谱鉴定技术。 scFv N14抗体是我们针对HepG2细胞筛选得到的一株单链抗体。该抗体能特异识别HepG2肝癌细胞，而对正常肝细胞株L02细胞反应较弱。本研究的目的是利用蛋白质组学相关技术，鉴定scFv N14抗体所识别的抗原，分析该抗原与肝癌发生、发展之间的关系。首先，利用pET-scFv N14原核表达载体转化大肠杆菌*** BL 21(DE3)LysS细胞，实现了scFv N14抗体的高表达。表达的scFv N14以包涵体形式存在。包涵体经裂解后，采用金属离子螯合柱辅助复性技术实现了scFv N14抗体的有效复性。利用纯化的抗体，通过Western blot实验证明，scFv N14抗原在HepG2肝癌细胞中的表达量要高于正常肝细胞株L02细胞中的表达量;采用免疫细胞化学技术分析了scFv N14抗原的亚细胞定位，结果显示，scFv N14抗原主要定位于细胞核。由于scFv N14抗原的细胞核定位，我们选取HepG2肝癌细胞的细胞核蛋白作为scFv N14抗原鉴定的起始材料。通过一维电泳和Western blot(1D／WB)实验发现，scFv N14能够特异地识别HepG2细胞核蛋白组份中分子量约37kD和35kD的两个蛋白条带。通过Q-TOF对这两个蛋白条带中的蛋白进行了鉴定，其中37kD条带中的蛋白可能是annexin A2 isoform 2、glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase、hnRNP protein A2和mutant beta-actin(beta′-actin);35kD条带中的蛋白则可能是hnRNP A2、unnamed protein product和transformation upregulated nuclear protein。由于两条带中包含的蛋白均有hnRNPA2，而编码hnRNP A2的基因能够通过不同的mRNA剪切方式编码hnRNP A2和hnRNP B1两种蛋白，hnRNP B1比hnRNP A2的N末端多12个氨基酸。所以，很可能37kD条带中的蛋白是hnRNP B1，35kD条带中的蛋白是hnRNPA2，而scFv N14抗体能够同时识别hnRNP A2和hnRNP B1。为了确证这一推测，我

关键词： hnRNP A2/B1 肝细胞癌肿瘤相关蛋白蛋白质组学 scFv

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动物资产会计核算问题探析

财务与会计 2021年第17期 43-46页

作者：何敬崔华清北京国家会计学院

动物资产作为生物资源或自然资源的一部分,其会计处理法规在国内外都尚处于探索阶段。动物资产的特殊性使其难以采用现有会计准则进行核算,影响了对动物资产的保护和利用。本文借鉴国外会计准则,结合我国具体情况,探讨制定有关动物资产... 详细信息

动物资产作为生物资源或自然资源的一部分,其会计处理法规在国内外都尚处于探索阶段。动物资产的特殊性使其难以采用现有会计准则进行核算,影响了对动物资产的保护和利用。本文借鉴国外会计准则,结合我国具体情况,探讨制定有关动物资产核算的会计规定。

关键词：动物资产会计准则动物园

Txnip与京尼平苷调节胰腺β细胞内质网应激的相关性研究

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Txnip与京尼平苷调节胰腺β细胞内质网应激的相关性研究

作者：崔华清重庆理工大学

学位级别：硕士

非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)是细胞适应环境变化、对抗内质网应激的自身保护机制,有利于细胞内环境的稳定。大量的结果表明,胰腺β细胞内质网应激诱导的UPR对2型糖尿病的形成和发展有重要的影响。课题组前期研究发现... 详细信息

非折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)是细胞适应环境变化、对抗内质网应激的自身保护机制,有利于细胞内环境的稳定。大量的结果表明,胰腺β细胞内质网应激诱导的UPR对2型糖尿病的形成和发展有重要的影响。课题组前期研究发现,在胰腺β细胞中,京尼平苷可通过调节细胞氧化还原关键蛋白Txnip降解影响胰腺β细胞氧化还原状态,调节胰腺β细胞功能,拮抗高糖诱导的胰腺β细胞凋亡,但是相关作用机制还有待于进一步深入研究。本文中,我们利用高糖诱导胰腺β细胞内质网应激,研究京尼平苷对高糖诱导的UPR关键分子的调节作用,以及它们与京尼平苷调节Txnip降解的相关性。实验结果证实,京尼平苷可显著上调高糖诱导的PERK/eIF2α和IRE1α磷酸化,影响高糖诱导的Txnip降解,而且,PERK抑制剂GSK2656157和IRE1α抑制剂STF-083010能明显抑制京尼对胰腺β细胞中Txnip降解的调节作用。为进一步明确这些UPR分子与京尼平苷调节Txnip降解的相关性,我们还用RNA干扰的方法,在PERK和IRE1α基因干扰的胰腺β细胞中考察了京尼平苷对Txnip降解的影响。实验发现,PERK和IRE1α基因干扰可明显影响京尼平苷对Txnip的调节作用。上述实验结果表明,京尼平苷可能通过调节UPR关键分子PERK和IRE1α的磷酸化,直接影响高糖诱导胰腺β细胞中的Txnip降解,提高细胞对内质网应激的适应能力,增强胰腺β细胞功能。为进一步探讨Txnip在京尼平苷调节胰腺β细胞功能障碍中的作用,我们运用RNA干扰的方法部分敲除胰腺β细胞中的Txnip基因,并利用高糖高脂(16.7 mM葡萄糖+0.2 mM棕榈酸)诱导内质网应激,比较了Txnip干扰对京尼平苷调节胰腺β细胞抗凋亡蛋白表达的影响。实验发现,Txnip干扰后,细胞中抗凋亡蛋白HO-1、Bcl-2表达水平明显升高,促凋亡相关蛋白Bax和Caspase-3水平明显降低,而且京尼平苷能进一步促进抗凋亡蛋白的表达,降低促凋亡蛋白的水平;与此同时,我们还用高糖高脂喂养的Txnip-/-小鼠,诱导整体的内质网应激模型,并在实验动物的胰腺组织中分析了上述凋亡相关蛋白的表达水平。实验结果证实,尽管Txnip敲除对小鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白表达水平无明显的影响,但在高糖高脂实验组,京尼平苷能显著提高HO-1、Bcl-2等抗凋亡蛋白表达,降低促凋亡蛋白Bax和Caspase-3蛋白水平。上述研究结果表明,尽管京尼平苷能够通过调节UPR影响Txnip降解,但是在Txnip基因干扰或敲除后,京尼平苷仍然能够细胞对内质网应激的适应能力,说明京尼平苷调节Txnip降解并不是其拮抗内质网应激的唯一途径。本文的研究结果初步明确:(1)京尼平苷可通过调节UPR信号影响Txnip降解;(2)京尼平苷调节Txnip降解并不是其调节内质网应激的唯一途径。

关键词： 2型糖尿病内质网应激京尼平苷硫氧还相互作用蛋白非折叠蛋白反应

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基于重链抗体构建的单域抗体研究进展

生物工程学报 2005年第3期21卷 497-501页

作者：崔华清王清明军事医学科学院放射医学研究所基因组学与蛋白质组学研究室北京100850

在骆驼血清中存在天然的缺失轻链的重链抗体(heavy chainantibody ,HCAb) ,克隆重链抗体的可变区构建的只由一个重链可变区组成的单域抗体称为VHH抗体(variabledomainofheavychainofheavy chainantibody ,VHH)。研究发现,VHH抗体具有易... 详细信息

在骆驼血清中存在天然的缺失轻链的重链抗体(heavy chainantibody ,HCAb) ,克隆重链抗体的可变区构建的只由一个重链可变区组成的单域抗体称为VHH抗体(variabledomainofheavychainofheavy chainantibody ,VHH)。研究发现,VHH抗体具有易表达、可溶性好、稳定性强等优点。另外,骆驼的重链抗体与人VH3家族抗体同源,对人VH3家族抗体的重链可变区进行类似VHH的特征性改造,可以使这些抗体在保持亲和力、特异性不变或者变化很小的情况下,优化抗体的其它性质。已有的研究表明VHH抗体作为一种小型化的基因工程抗体在基础研究、药物开发等领域有广阔的应用前景。

关键词：单域抗体,VHH抗体,重链抗体,骆驼

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关于保险合同负债计量的几个问题

会计研究 2010年第1期 51-56页

作者：李荣林崔华清孟林上海财经大学会计与财务研究院 200433 财政部会计司 100820 中国石油抚顺石化公司 113008

同一家保险公司按照不同国家和地区的会计准则,损益结果差异较大,对于欲统一全球会计准则的国际会计准则理事会(IASB)而言,这是无法容忍的。随着IASB关于保险合同第二阶段会计准则的推进以及中国资本市场的快速发展,我国现行的保险合同... 详细信息

同一家保险公司按照不同国家和地区的会计准则,损益结果差异较大,对于欲统一全球会计准则的国际会计准则理事会(IASB)而言,这是无法容忍的。随着IASB关于保险合同第二阶段会计准则的推进以及中国资本市场的快速发展,我国现行的保险合同会计实务已经无法满足会计信息使用者的决策需求,对保险合同负债计量方法的一场革命已经迫在眉睫。本文先分析我国保险合同负债计量的现状,在此基础上全面分析和研究保险合同负债计量的理论基础、发展趋势,进而提出政策建议。

关键词：三因素 IAS37模型现行履约价值

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现金产出单元减值问题的思考

中国农业会计 2004年第10期 26-27页

作者：崔华清赵添翼中国人民大学商学院山东大学经济学院

随着我国市场经济深入发展和会计制度改革步伐的加快,上市公司会计信息质量日益受到关注。为夯实上市公司资产质量,提高上市公司会计信息的有用性,我国政府分别采取了一些措施,如财政部要求股份有限公司计提资产减值准备,中国证券监督... 详细信息

随着我国市场经济深入发展和会计制度改革步伐的加快,上市公司会计信息质量日益受到关注。为夯实上市公司资产质量,提高上市公司会计信息的有用性,我国政府分别采取了一些措施,如财政部要求股份有限公司计提资产减值准备,中国证券监督管理委员会首席会计师办公室发布《关于进一步提高上市公司财务信息披露质量的通知》等。但是,这些措施解决的都是单项资产减值损失的确认、计量和披露问题,没有考虑到企业资产通常是组合在一起提供经济利益这一客观现实。因此,研究资产组合(本文称“现金产出单元”)减值损失的会计核算,系统揭示其确认、计量、转回等相关问题,不仅具有一定的理论研究意义,也具有深远的实践意义,日益受到企业内外部利害关系人的广泛关注。

关键词：上市公司会计信息质量现金产出单元计提资产减值准备财务信息披露会计师会计制度改革步伐要求中国

农业文化遗产如何推进农村一二三产业融合发展?——基于共生系统说的贵州从江占里侗寨案例探索

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广西民族研究 2023年第3期 164-172页

作者：王超崔华清蒋彬贵州财经大学工商管理学院贵州贵阳550025 西南民族大学西南民族研究院四川成都610041

农村地区一二三产业融合发展是持续推进乡村振兴、坚持农业农村优先发展的关键性举措之一。农业文化遗产是我国农耕文明的活化载体,对推进农村一二三产业融合发展具有促进作用。农村产业融合发展主要聚焦于产业生命说和社会治理说,前者... 详细信息

农村地区一二三产业融合发展是持续推进乡村振兴、坚持农业农村优先发展的关键性举措之一。农业文化遗产是我国农耕文明的活化载体,对推进农村一二三产业融合发展具有促进作用。农村产业融合发展主要聚焦于产业生命说和社会治理说,前者注重产业生态化治理实现与自然系统的和谐共处;后者提倡多主体、多部门协作实现经济有序发展。本文综合以上两大学说的优势与不足,提出共生系统说,结合共生理论构建本文理论分析框架,选取贵州从江占里侗寨进行案例验证,共同促进了农业文化遗产的创造性转化与创新性发展,为充分盘活农村闲置资源、推动一二三产业融合提供了内生发展动力。

关键词：农业文化遗产一二三产业融合民族村寨共生理论乡村振兴

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KRAS抑制剂的研究进展

药学学报 2021年第6期56卷 1562-1570页

作者：许俨钊文辉崔华清中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所活性物质发现与适药化研究北京市重点实验室北京100050

RAS(rat sarcoma)基因是一种重要的致癌基因,其突变存在于约30%的人类肿瘤中。KRAS(kirsten rat sarcoma viral oncogene)是RAS的三个亚型之一,且相比于其他两种RAS亚型更易出现突变。近年来,研究的不断深入为靶向KRAS治疗肿瘤提供了新... 详细信息

RAS(rat sarcoma)基因是一种重要的致癌基因,其突变存在于约30%的人类肿瘤中。KRAS(kirsten rat sarcoma viral oncogene)是RAS的三个亚型之一,且相比于其他两种RAS亚型更易出现突变。近年来,研究的不断深入为靶向KRAS治疗肿瘤提供了新的可能性,KRAS抑制剂的研发也因此取得了显著的进展。本文根据各类抑制剂的作用模式,将KRAS抑制剂分为直接靶向于KRAS的抑制剂和间接作用于KRAS的抑制剂两类,并由此综述介绍了具有代表性的KRAS抑制剂。

关键词： RAS KRAS 作用模式小分子抑制剂抗肿瘤

吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)抑制剂的研究进展

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药学学报 2021年第3期56卷 723-733页

作者：王婷文辉崔华清尹大力中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所活性物质发现与适药化研究北京市重点实验室北京100050

吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)是代谢色氨酸转化为犬尿氨酸的限速酶。其在肿瘤组织中过表达,造成肿瘤微环境中的色氨酸耗竭,从而抑制T细胞功能,介导肿瘤的免疫逃逸,是潜在的肿瘤免疫治疗靶点。目前,多个IDO... 详细信息

吲哚胺2,3-双加氧酶1(indoleamine 2,3-dioxygenase 1,IDO1)是代谢色氨酸转化为犬尿氨酸的限速酶。其在肿瘤组织中过表达,造成肿瘤微环境中的色氨酸耗竭,从而抑制T细胞功能,介导肿瘤的免疫逃逸,是潜在的肿瘤免疫治疗靶点。目前,多个IDO1抑制剂处于临床研究阶段。本文主要介绍IDO1介导肿瘤免疫逃逸的机制,并根据已报道IDO1抑制剂的结构类型进行分类总结和构效关系简析。

关键词：吲哚胺2 3-双加氧酶1 色氨酸肿瘤免疫逃逸 IDO1抑制剂