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基于CRISPR/Cas12a的生物传感平台的机制研究及应用

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生物技术通报 2024年第7期40卷 90-98页

作者：陈墨岩祝诚天津大学生命科学学院天津300072

CRISPR/Cas12a系统能够由可编程的RNA引导,准确识别特异的单链DNA或含有PAM序列的双链DNA,而后在目标底物进行切割的同时完成对非特异性单链DNA的迅速切割,该特性使其在生物传感应用中显示出巨大前景。近年来,CRISPR/Cas12a系统被广泛... 详细信息

CRISPR/Cas12a系统能够由可编程的RNA引导,准确识别特异的单链DNA或含有PAM序列的双链DNA,而后在目标底物进行切割的同时完成对非特异性单链DNA的迅速切割,该特性使其在生物传感应用中显示出巨大前景。近年来,CRISPR/Cas12a系统被广泛应用于生物标志物的辅助检测,其生物标志物传感平台已在可视化细胞途径、体内活体诊断等生物分子传感器的构建方面得到应用。本文基于CRISPR/Cas12a生物传感平台的构建原理,对不同应用情景下CRISPR/Cas12a系统的变体进行了总结,并对基于该系统的体外、体内传感平台的应用进行了重点介绍和归纳,进一步讨论了不同传感平台的特点。最后对目前应用的优点和局限性做出总结和展望,以期为该领域的研究与应用提供一定参考。

关键词： CRISPR/Cas12a 体外生物传感体内生物传感准确识别

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基于体积变化的珊瑚砂砾破碎率研究

岩土力学 2024年第7期45卷 1967-1975页

作者：王步雪岩孟庆山钱建固同济大学地下建筑与工程系上海200092 中国科学院武汉岩土力学研究所岩土力学与工程国家重点实验室湖北武汉430071 桂林理工大学土木与建筑工程学院广西桂林541004

颗粒材料的破碎行为广泛地存在于各个领域内,且对散粒体材料的力学性能有较大影响。对颗粒破碎行为的大量研究皆建立在合理可靠的破碎率计算方法上。针对现有方法不能准确评估不规则形貌颗粒(以珊瑚砂砾为典型代表)破碎率的现状,提出了... 详细信息

颗粒材料的破碎行为广泛地存在于各个领域内,且对散粒体材料的力学性能有较大影响。对颗粒破碎行为的大量研究皆建立在合理可靠的破碎率计算方法上。针对现有方法不能准确评估不规则形貌颗粒(以珊瑚砂砾为典型代表)破碎率的现状,提出了以颗粒体积作为基础参数的颗粒破碎率计算方法,对原有的基于颗粒粒径的Hardin破碎率计算公式进行了改进,可以更好地评估不规则颗粒破碎率。通过不同形状珊瑚砂砾的颗粒破碎试验,对上述理论公式进行了可靠性验证,进而分析了传统方法产生误差的原因。通过试验得出了不同形状颗粒在不同压力下、不同算法下的破碎率值。结合试验过程中的应力、变形和影像观测,获得了片状、块状、棒状3种不同形状珊瑚砂砾的颗粒破碎阈值,揭示了不同形貌颗粒随压力变化过程表现出的破碎模式演化特性。

关键词：颗粒破碎破碎率珊瑚砂砾

C2C闲置物品交易中的消费者权益保护问题与对策研究

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C2C闲置物品交易中的消费者权益保护问题与对策研究

作者：轩岩青海师范大学

学位级别：硕士

C2C闲置物品交易平台,因其满足用户处理闲置物品需求,具有操作简便和价格低廉的优势被越来越多的消费者选择并使用。然而闲置交易本身的复杂性与网络环境的多变性导致C2C闲置交易成为消费者权益侵害问题的高发地带,且闲置交易物品具有... 详细信息

C2C闲置物品交易平台,因其满足用户处理闲置物品需求,具有操作简便和价格低廉的优势被越来越多的消费者选择并使用。然而闲置交易本身的复杂性与网络环境的多变性导致C2C闲置交易成为消费者权益侵害问题的高发地带,且闲置交易物品具有一定的先天瑕疵性,纠纷所涉金额较低,如何在保障消费者权益的基础上推动纠纷处理达到质效平衡,是本文论述的重点。第一部分主要是研究国内与国外闲置物品交易市场的发展历程,探讨闲置交易中存在的历史遗留性短板问题与可发挥的交易特色优势。C2C闲置物品网络交易建立在C2C型电子商务和闲置物品交易的双重市场理论基础之上。总结以上两类交易市场的运营模式,有助于发现C2C闲置交易原生特点下的固有问题,理解针对这类交易中消费者权益进行保护的必要性。第二部分通过分析典型案例,列举C2C闲置交易中突出存在的消费者权益侵害问题并对问题产生的原因展开探讨,因闲置交易物品质量引发的各类问题是闲置交易原始性的难题。C2C闲置交易平台存在权利义务不对等的问题,平台享有较多数据资源管控的隐性福利,却只承担较少的监管义务。同时平台过度依赖智能客服,导致用户向平台反馈问题出现沟通低效的情况,而用户通过平台以外的渠道寻求救济更是困难重重。第三部分以实务中现存的问题为导向,对交易主要参与主体进行身份的认定和权利责任的划分。认定身份是适用相关法律的前提,C2C闲置交易所涉及的主体较多,本文重点论述交易参与方与交易平台经营方,明确各参与方在C2C闲置交易中的法律地位。依据其在交易中的交易能力、实际作用和行为方式,对其权利和义务设定合理边界。第四部分主要是为完善C2C闲置交易中的消费者权益保护问题提出对策性建议,通过立法的方式明确规范新型交易主体地位。重视行政监管的实质作用而非形式作用。在司法领域推广多元化的线上纠纷调解机制,实现C2C闲置交易纠纷高效解决。建议C2C闲置交易平台通过设置准入门槛、规范交易市场以及完善网络信用体系等方式,更好地维护C2C闲置交易中的消费者权益。

关键词： C2C闲置物品交易消费者权益平台管理义务 ODR机制

肺血管靶向性细胞外囊泡的构建及其在急性肺损伤治疗中的作用研究

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肺血管靶向性细胞外囊泡的构建及其在急性肺损伤治疗中的作用研究

作者：顾铮岩中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景及目的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)是一种常见的临床综合征,患者主要表现为肺顺应性降低、严重的低氧血症和进行性呼吸衰竭。机械通气和类固醇药物是临床常用的治疗手段。虽然上述疗法在一定程度上缓解ALI症状,但病... 详细信息

一、研究背景及目的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)是一种常见的临床综合征,患者主要表现为肺顺应性降低、严重的低氧血症和进行性呼吸衰竭。机械通气和类固醇药物是临床常用的治疗手段。虽然上述疗法在一定程度上缓解ALI症状,但病死率仍居高不下。因此,寻找一种高效、低毒的治疗药物成为当前的研究热点。细胞外囊泡(Extracellular vesicles,EVs)是一类由细胞分泌具有脂质双层结构的小囊泡。大量研究表明,多种天然细胞来源的EVs在ALI中发挥显著的疗效。然而,天然EVs存在组织靶向性差、活性物质含量低等缺陷,使其在临床转化中受限。为了克服上述问题,本课题设计了一种工程化EVs,即LET-EVs-miRNA-125b。利用内皮细胞来源的EVs作为修饰母体,通过基因工程手段将一段肺微血管内皮靶向肽(Lung microvascular endothelial cell targeting peptides,LET)修饰于EVs表面,提高肺组织靶向性。采用化学转染试剂将一段具有抗炎和血管修复作用的miRNA-125b(hasmiRNA-125b-5p)负载其中以提高生物活性。为了探究LET-EVs-miRNA-125b在ALI治疗中的可行性,分别在ALI动物模型和内皮细胞损伤模型进行LET-EVs-miRNA-125b靶向性和药效学评价。二、研究方法构建LAMP-2B-LET慢病毒载体转染内皮细胞,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)验证细胞转染效率;采用尺寸排阻法分离获得LET-EVs,采用纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle tracking analysis,NTA)、透射电镜(Transmission electron microscope,TEM)和WB对其进行表征;采用化学转染试剂将miRNA-125b负载于LET-EVs,通过q RT-PCR验证miRNA-125b的负载效率。LET-EVs与肺微血管内皮细胞(Human Pulmonary Microvascular Endothelial Cells,HPMVECs)共孵育评价LET-EVs的体外靶向性;利用小动物成像系统和组织免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色评价LET-EVs的肺组织靶向性;利用LPS构建ALI小鼠模型,通过给ALI小鼠静脉注射LET-EVs-miRNA-125b,检测肺组织病理变化、肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中炎性细胞及炎性因子数量、肺湿/干重比(Wet weight/dry weight,W/D)、BALF蛋白浓度等指标,探究LETEVs-miRNA-125b对ALI的治疗作用。为探究LET-EVs-miRNA-125b对ALI中内皮屏障的修复作用,对小鼠肺组织进行TUNEL、Ki67、内皮细胞连接蛋白IF染色,在动物水平上评价LET-EVs-miRNA-125b对内皮屏障的修复作用。在细胞水平上利用TNF-α构建内皮屏障损伤细胞模型,通过测定细胞跨膜电阻值(Trans-epithelial electrical resistance,TEER)、细胞活力、细胞凋亡、细胞增殖、细胞间连接蛋白等指标,进一步验证LET-EVs-miRNA-125b对内皮屏障的修复作用。为探究LET-EVsmiRNA-125b修复内皮屏障的作用机制,对小鼠肺组织进行了转录组测序分析,筛选出差异基因及关键信号通路。利用WB验证关键基因及相关通路的在蛋白水平的表达。通过生物信息学分析和双荧光素酶报告验证实验寻找miRNA-125b与关键基因的作用关系。三、研究结果1、成功构建LET-EVs-miRNA-125b。转染的内皮细胞表达绿色荧光标签蛋白且LAMP-2B在m RNA和蛋白水平表达上调,表明成功构建LET细胞株。分离获得的LET-EVs呈现杯状结构,直径在130 nm范围,表达EVs标志分子,符合国际EVs的鉴定标准。q RT-PCR实验表明,LET-EVs-miRNA-125b成功包载了miRNA-125b且包封效率为41.65%。细胞摄取、小动物成像和组织IF实验提示,LET-EVs具有优越的肺组织靶向性且可以直接作用于损伤的内皮细胞。2、LET-EVs-miRNA-125b能有效地减轻ALI。我们利用LPS成功构建了ALI小鼠模型。在ALI小鼠模型中,静脉注射LET-EVs-miRNA-125b后,小鼠肺组织中肺泡数增多、肺泡壁厚度降低、平均线性截距减少,表明LET-EVs-miRNA-125b可以改善肺损伤;BAL

关键词：急性肺损伤细胞外囊泡工程化细胞外囊泡肺微血管内皮屏障 miRNA-125b

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小型多级热电制冷除湿装置的研制及性能研究

小型多级热电制冷除湿装置的研制及性能研究

作者：刘辰岩哈尔滨商业大学

学位级别：硕士

随着我国人民对生活水平要求的提高,除湿已经成为工业生产和人民正常生活经常遇到的问题。湿度的高低不仅影响人体的舒适程度,也会影响工业材料参数和精密仪器的性能。由于当前人们对除湿的重视,湿度逐渐成为一个重要指标。传统的冷却... 详细信息

随着我国人民对生活水平要求的提高,除湿已经成为工业生产和人民正常生活经常遇到的问题。湿度的高低不仅影响人体的舒适程度,也会影响工业材料参数和精密仪器的性能。由于当前人们对除湿的重视,湿度逐渐成为一个重要指标。传统的冷却除湿技术虽然应用广泛,但是其采用的制冷剂加重了对环境的负担,不符合未来环保发展的要求。热电制冷除湿是一种新型除湿技术,其使用了对环境友好的热电制冷片替代制冷剂,因具有对环境无污染的特点,在除湿技术领域中具有潜在的重要价值。本文设计并研制出一种多级热电制冷除湿装置,该装置工作时无噪音,且除湿效果稳定可靠,适用于电气柜、控制柜、PLC柜、变频柜、药品储存箱等小型空间的除湿需求。此装置的研制对未来新型除湿技术的研究具有重要的借鉴意义。首先,进行热电制冷片的理论与实验研究。为了确定热电制冷片的级数及其热端散热方式,本文在对国内外热电制冷技术研究现状进行综合分析的基础上,先进行热电制冷片级数的确定实验,根据热电制冷片级数和热端导热量对其制冷性能影响的实验结果确定了热电制冷片级数;然后对多级热电制冷片的一般工况、最大制冷量工况、最大制冷系数工况和最优工况进行了理论研究,经过计算得到多级热电制冷片的最佳工作电流值;最后进行多级热电制冷片热端散热的实验研究,通过调节多级热电制冷片的输入电压并测量制冷片的冷热端温度来选择合适的热端散热方式。其次,进行小型多级热电制冷除湿装置的初始研制。主要包括:多级热电制冷除湿装置的制冷系统进行初始设计和理论计算。先进行多级热电制冷除湿装置和实验箱体的结构设计,得到小型多级热电制冷除湿装置的整体设计图;然后通过实验箱体的参数计算箱体外表面对流换热系数、内表面对流换热系数、壁面传热系数、壁面传热量、空间漏热量、对环境的辐射换热量和照明负荷,从而计算出空间热负荷;最后依据空间总负荷的大小计算多级热电制冷片的个数,完成小型多级热电制冷除湿装置的初始研制。然后,进行多级热电制冷除湿装置初始性能实验及数值模拟。一方面将初始性能实验测出的五种电流值分别为6A、7A、8A、9A、10A下的实验数据在相同温度、湿度和工作时间下分析,绘制箱内湿度随时间的变化曲线,以及装置除湿能力与单位输入功率除湿量随输入电流值的变化曲线,从而确定多级热电制冷除湿装置的最佳工作电流值并得到初始除湿装置的性能参数。另一方面对初始设计方案进行数值模拟,将初始实验数据与数值模拟的结果相比较,验证数值模拟的准确性,为后期进行多种方案数值模拟提供基础。最后,进行多种方案设计的除湿性能数值模拟和改进后小型多级热电制冷除湿装置的性能实验。为了得到优于初始设计装置的性能参数和更好地提高装置的除湿效率,本文先通过改变多级热电制冷除湿装置在空间的位置进行了多种方案的设计:由于不能对多种方案同时进行性能实验研究,需要进行多种方案的数值模拟实验,根据数值模拟实验的结果,选定了改进的最佳方案;根据改进的最佳方案进行除湿性能实验,将测量得到箱内湿度随时间变化的数据、除湿能力与单位输入功率除湿量随输入电流值的变化的数据绘制成曲线图在相同温度、湿度和工作时间下进行分析,得到改进后多级热电制冷除湿装置的性能参数,结果证明改进后除湿装置性能优于初始设计除湿装置的性能。

关键词：多级热电制冷除湿装置性能实验数值模拟

行动者网络理论视域下乡村园所幼儿安全教育的路径研究

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行动者网络理论视域下乡村园所幼儿安全教育的路径研究

作者：夏泽岩贵州师范大学

学位级别：硕士

乡村园所幼儿的安全与城市相比存在较多的风险和挑战。随着社会对幼儿安全问题的日益关注,幼儿安全教育已成为学前教育领域的重要议题。特别是乡村幼儿园,由于地理位置偏远、教育资源有限等因素,幼儿安全教育面临着诸多挑战。对于乡村... 详细信息

乡村园所幼儿的安全与城市相比存在较多的风险和挑战。随着社会对幼儿安全问题的日益关注,幼儿安全教育已成为学前教育领域的重要议题。特别是乡村幼儿园,由于地理位置偏远、教育资源有限等因素,幼儿安全教育面临着诸多挑战。对于乡村园所教师、家长和幼儿来说,开展安全教育不仅能帮助幼儿养成良好的安全意识和行为习惯,还能促进家长和社会各界的参与,形成全社会共同关注幼儿安全的良好氛围。本研究利用行动者网络理论对乡村园所幼儿安全教育的优化路径进行深入探讨,以期为相关实践提供有益的借鉴。首先,本研究从乡村园所幼儿安全教育的问题提出、研究意义、文献综述、核心概念、理论基础和研究设计进行分析。参照行动者网络理论的原理设计访谈和问卷提纲。其次,从乡村园所幼儿安全教育的政策背景、现实需求和价值所在阐述实践背景。然后通过调查问卷和访谈了解乡村园所幼儿安全教育开展的现实状态,依据行动者网络理论的研究框架,从识别行动者、确定核心行动者、锁定强制通行点,以及对人类行动者和非人类行动者的剖析等四大方面进行分析。其中分析了组织、教师、家长和幼儿等人类行动者的现状;还分析了安全教育的资源、内容、方式、频次、时机和效果六个非人类行动者的现状。研究发现,行动者网络理论视域下的乡村园所幼儿安全教育存在多因素导致行动者识别不全面、权责不明导致核心行动者未定、核心未定导致强制通行点未锁定,以及多元因素不凝聚导致行动者的障碍,其中存在的障碍主要有人类行动者中的乡村园所幼儿安全教育组织行动者参与度低、教师专业素养不高、乡村家长重视度不够、幼儿安全意识和自我保护能力较差,还有非人类行动者中的安全教育资源利用不充分、内容不全面、教育的方式单一、教育时机较局限、教育效果不明显等问题。最后,针对乡村园所幼儿安全教育存在的障碍和问题,笔者提出了优化路径。一方面要明确核心,确定教师作为核心行动者及其作用、锁定通行点,协调行动者利益与障碍。另一方面是提出方案,制定安全教育的行动者方案,协调各行动者的利益与障碍,形成利益联盟。包括提高乡村教师的安全教育素养、增强家长对幼儿安全教育的意识、挖掘幼儿园内外的安全教育资源、丰富乡村园所幼儿安全教育的内容、优化乡村园所幼儿安全教育的方式、把握乡村园所幼儿安全教育的时机、提升乡村园所幼儿安全教育的效果。通过行动者网络的建构,促进各方的合作与协调,形成多方参与、共同推动的安全教育模式,为乡村幼儿园的幼儿提供更加全面和有效的安全教育。

关键词：行动者网络理论乡村园所幼儿安全教育

街景精细尺度下城市经济发展预测及有效性评估

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地理学报 2024年第8期79卷 1978-1993页

作者：柳林张振岩项子诚郭靖雯山东科技大学测绘与空间信息学院青岛266590

随着城市化进程加快,传统大尺度遥感影像数据和经济统计方法无法从精细尺度刻画城市经济发展动态。街景影像可以反映城市建成环境物质空间特征,基于此可以在更精细尺度上对经济发展指标预测。本文提出一种改进的Deeplabv3_MEP街景影像... 详细信息

随着城市化进程加快,传统大尺度遥感影像数据和经济统计方法无法从精细尺度刻画城市经济发展动态。街景影像可以反映城市建成环境物质空间特征,基于此可以在更精细尺度上对经济发展指标预测。本文提出一种改进的Deeplabv3_MEP街景影像语义分割模型,提取街景要素占比,采用图神经网络与卷积神经网络分别以街景要素指标和街景影像作为输入,预测经济指标;并利用XGBoost模型分析经济指标驱动因素,计算碳汇并构建Lasso回归模型评估行政区绿色经济发展有效性。结果发现:①在市级区划尺度上,济南市经济指标呈现向市中心高度集中、向外围逐渐降低趋势;②在区级区划尺度上,历下区经济发展水平最高,东部零星地区发展水平极高,其余地区较低;③在街道级区划尺度上,越靠近区或县中心街道,居民平均收入水平越高,越靠近市中心街道,居民平均收入水平更高;④驱动因素方面,围墙、天空、道路、建筑与汽车等要素对经济发展指标贡献较大,电线杆、摩托车等要素对经济发展贡献较小,公交车要素最低;⑤济南市存在绿色经济发展指数与经济发展水平不匹配现象。本文的研究方法不仅为精细尺度城市经济发展预测提供了研究框架的借鉴,也为理解城市绿色经济发展效能提供了新视角,有助于城市规划和可持续发展政策的制定。

关键词：街景影像 DeepLabv3_MEP模型 GCN模型 CNN模型经济发展指标预测济南市

基于弱磁检测法的309不锈钢应力损伤机理研究

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基于弱磁检测法的309不锈钢应力损伤机理研究

作者：夏睿岩南昌航空大学

学位级别：硕士

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互联网背景下化工企业智慧消防体系构建研究

日用化学工业（中英文） 2024年第3期54卷 I0010-I0011页

作者：白雪岩承德应用技术职业学院

行业转型发展的背景下,国内化工企业所面临的经营发展环境发生了显著变化,为企业的日常运营管理带来了全新的挑战。化工企业的特殊性在于行业关联度较高,具体的经营发展状态必然会产生一系列连锁反应,而这也从侧面说明了依托互联网、智... 详细信息

行业转型发展的背景下,国内化工企业所面临的经营发展环境发生了显著变化,为企业的日常运营管理带来了全新的挑战。化工企业的特殊性在于行业关联度较高,具体的经营发展状态必然会产生一系列连锁反应,而这也从侧面说明了依托互联网、智能化技术搭建内部消防监管体系的重要性。积极推进这一环节的改革实践,既能够为化工企业内部员工的生命安全保驾护航,又可以解放化工企业的经营发展潜力,继而推动国内化工行业的转型发展。

关键词：行业转型化工企业转型发展消防监管连锁反应企业内部员工智能化技术智慧消防