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1991年

作者：黄山谷书

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杂交三倍体泥鳅早期性腺发育的分子阻抑机制

杂交三倍体泥鳅早期性腺发育的分子阻抑机制

引用

作者：山谷大连海洋大学

学位级别：硕士

泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)具有高生长速度、强繁殖力、强适应力、杂食性等特点,是我国重要的特色养殖对象。泥鳅存在天然多倍体现象,我国除二倍体外,还存在天然三倍体、四倍体和六倍体。通过天然四倍体与二倍体杂交产生的三倍... 详细信息

泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)具有高生长速度、强繁殖力、强适应力、杂食性等特点,是我国重要的特色养殖对象。泥鳅存在天然多倍体现象,我国除二倍体外,还存在天然三倍体、四倍体和六倍体。通过天然四倍体与二倍体杂交产生的三倍体泥鳅,具有生长速度快、肉质细腻口感好、抗病力强等优势,已成为我国养殖行业的潜力产品。杂交三倍体泥鳅少数可形成成熟性腺,且产生成熟配子,但配子活力较低。目前对杂交三倍体泥鳅与正常二倍体泥鳅早期性腺发育差异及性腺发育的分子阻抑机制尚不清楚。本研究通过杂交法利用天然四倍体泥鳅(4n=100)(♀)和二倍体泥鳅(2n=50)(♂)制备三倍体泥鳅(3n=75),通过石蜡组织切片法对4dph(Days post hatching)、15dph、22dph和50dph四个时期共120尾杂交三倍体泥鳅及对照组120尾二倍体泥鳅进行性腺组织学观察,同时利用第二代高通量测序方法对杂交三倍体泥鳅早期性腺基因组进行转录组学分析,采用荧光定量PCR法对筛选出的6个基因进行了表达量分析。结果显示:(1)通过对杂交三倍体泥鳅和二倍体泥鳅早期性腺发育不同时期的性腺组织学观察发现4dph、15dph、22dph和50dph分别有33%、33%、36%和20%的杂交三倍体泥鳅能够观察到早期性腺和原始生殖细胞。4dph可观察到原始生殖细胞已由脏壁中胚层中迁移至身体两侧肾管下方的腹膜上;15dph可观察到原始生殖细胞位于两侧肾管下方的腹膜上皮,被体腔内褶皱突出形成的生殖脊包围,共同构成最原始的性腺;22dph可观察到原始生殖性腺相较于15dph已有较明显生长,原始性腺开始脱离腹腔上皮,仅仅依靠组织系膜连接于腹膜上皮;50dph可观察到原始性腺呈扁平状,依靠腹膜组织分布于体腔两侧。(2)对四个时期杂交三倍体泥鳅与正常二倍体泥鳅共72个样品进行转录组测序,经比较分析,与二倍体泥鳅相比,杂交三倍体泥鳅在4dph中获得1579个上调基因和1399个下调基因。差异基因富集在DNA代谢、发育相关等GO功能条目上,经KEGG信号通路分析发现差异基因主要被注释在能量代谢、氨基酸代谢等通路上;在15dph中获得2122个上调基因,2372个下调基因。差异基因富集在肽生物合成、蛋白质代谢等GO功能条目上,KEGG富集在免疫相关、视黄醇代谢等通路上;在22dph中获得1914个上调基因,1334个下调基因。差异基因主要富集在肽代谢、DNA整合等GO功能条目上,KEGG富集在免疫相关、脂质代谢等信号通路上;在50dph中获得1512个上调基因,1680个下调基因。差异基因主要富集在体液调节、发育相关等GO功能条目上,KEGG富集在能量代谢、类固醇生物合成、雌激素合成等通路上。(3)通过对四个时期GO及KEGG分析,筛选出11个性腺发育相关差异基因(AMH、AUB、Hormad1、Rec8、H2B、PLVAP、ZP3、H2A、DAX1、VASA和ESR2)及两条性腺发育相关通路(雌激素和类固醇生物合成),其中ZP3、H2B、VASA和ESR2在两条通路上均呈上调表达趋势,推测它们可能与三倍体泥鳅卵细胞成熟及原始生殖细胞成活存在密切联系。结合差异基因在六大数据库的功能注释,在4dph筛选出AMH与性腺发育相关,50dph筛选出AUB、Hormad1、Rec8、PLVAP、H2A、DAX1。其中大部分参与三倍体泥鳅性腺发育和配子形成的差异基因主要被富集在50dph的雌激素通路和类固醇生物合成两条信号通路上,而4dph、15dph和22dph的差异基因大多富集在与生命活动所必须的基本代谢通路,并没有与生殖活动相关的。(4)通过qRT-PCR对6个转录组分析筛选的差异基因PTCD2、B2M、CRP、DAX1、ENO、AMH进行了表达量分析,q RT-PCR的检测结果与转录组测序结果表达量趋势一致,验证了RNA-Seq测序结果的可靠和准确性,可以为以后的实验提供依据。综上所述,通过对杂交三倍体泥鳅早期性腺发育不同时期的性腺组织学观察发现,约有31%的杂交三倍体泥鳅能够产生原始生殖细胞及发育成原始性腺,与二倍体泥鳅原始生殖细胞和原始性腺无明显差别。约69%的三倍体个体未观察到原始生殖细胞及原始性腺。通过转录组学分析,筛选出11个性腺发育相关差异基因(AMH、AUB、Hormad1、Rec8、H2B、PLVAP、ZP3、H2A、DAX1、VASA和ESR2)及两条性腺发育相关通路(雌激素和类固醇生物合成)。推测这些基因在三倍体泥鳅的性腺发育、配子形成、性别分化、原始生殖细胞形成中具有重要作用,可能是导致杂交三倍体早期性腺发育迟缓、畸形导致最终不育或育性低于正常二倍体泥鳅的原因之一。本研究结果为杂交三倍体泥鳅早期性腺发育研究提供了参考,为进一步探究杂交三倍体泥鳅早

关键词：杂交三倍体泥鳅早期性腺组织学观察转录组测序

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顾绍培:一壶了却千般累,月白风清万里同

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中华手工 2022年第6期 14-23页

作者：山谷顾绍培(图) 不详

“做紫砂,线条很重要。这个线条有看得见的线,也有看不见的线,还有生命线。看得见的线多种多样,例如水平线是看不见的。什么是生命线?生命线就是隐藏在造型里的那份灵气、韵味。真正意义上的生命线是体现生命力的东西。有生命的东西就... 详细信息

“做紫砂,线条很重要。这个线条有看得见的线,也有看不见的线,还有生命线。看得见的线多种多样,例如水平线是看不见的。什么是生命线?生命线就是隐藏在造型里的那份灵气、韵味。真正意义上的生命线是体现生命力的东西。有生命的东西就是美的,例如树叶,只要是新鲜的,都很美;如果缺水或有病虫害,就难以让人产生美感。如果没有生命力,就缺乏力量,其形态肯定是不美的。例如,猫懒洋洋地睡在地上,像一条僵硬的直线,这种形态就不美;如果它的背弓起来,或者尾巴翘起来,就有曲线弧度,有动作有造型,这时就呈现出一种美的形态。同样,我喜欢看军事频道,主要关心兵器造型。现代的飞机造型美得不得了,如果把它的美态运用到创作上,运用得好,创作出来的东西,可能就会完全不一样。所以,只有被赋予生机的时候,它才能体现自然的美态,才能表现力量。这个很关键,也是美学的一个出发点。”

关键词：美的形态生命线背弓水平线

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