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去透明带小鼠早期胚胎的体外培养

去透明带小鼠早期胚胎的体外培养

作者：山灵西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究以昆白小鼠为实验对象,对早期胚胎体外培养液进行筛选和培养条件的优化。在此基础上,通过比较WOW法和琼脂包埋法对无透明带胚胎培养的影响,从中选择更有利于去透明带胚胎培养的方法。目的是建立一种在本实验室环境下利于去透明带... 详细信息

本研究以昆白小鼠为实验对象,对早期胚胎体外培养液进行筛选和培养条件的优化。在此基础上,通过比较WOW法和琼脂包埋法对无透明带胚胎培养的影响,从中选择更有利于去透明带胚胎培养的方法。目的是建立一种在本实验室环境下利于去透明带小鼠早期胚胎体外培养的方式,为最终降低小鼠核移植操作难度并提高其效率完成基础性的工作。实验主要结果如下: 1.用4种组成成分不同的常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养,观察到4种培养液中从2-细胞发育到4-细胞的胚胎率为30.5%～43.5%,差异不显著。KSOM组囊胚率为40.9%,显著高于其它各组(27.9%～30.0%)。 2.分别采用KSOM和KSOMFBS两种培养液,对小鼠早期胚胎与输卵管上皮细胞(MOEC)或卵丘细胞(CC)进行共培养,观察从2-细胞发育到4-细胞的胚胎数和囊胚数的变化。结果显示:共培养对克服小鼠2-细胞发育阻滞作用明显,输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。添加胎牛血清组效果明显好于不添加组效果。 3.用WOW (The well of the well)培养法和琼脂包埋培养法对去透明带小鼠原核胚进行培养,统计去透明带原核胚的囊胚发育率、囊胚回收率和囊胚细胞数。用WOW法培养去透明带小鼠原核胚,其囊胚发育率(29.6%)与琼脂包埋培养法(34.7%)相比差异不显著,但前者的囊胚回收率(80.3%)和囊胚细胞数(36)显著低于后者(90.5%,46)。结果表明:琼脂包埋培养是去透明带小鼠早期胚胎体外培养的较好方法。 4.采用琼脂包埋无透明带原核胚,直接培养(非共培养)或与输卵管上皮细胞共培养。非共培养的2-细胞胚胎比率(86.4%)与琼脂包埋培养的2-细胞胚胎比率(88.7%)相比差异不显著;但是突破2-细胞发育阻滞的胚胎率,共培养组(46.9%)高于非共培养组(37.2%),差异显著;囊胚的发育率,共培养组(44.3%)显著高于非共培养组(34.7%)。结果表明:琼脂包埋培养法结合共培养可以提高去透明带小鼠早期胚胎体外培养的发育率。

关键词：小鼠体外共培养无透明带早期胚胎

结直肠癌患者KRAS、BRAF及PIK3CA基因突变检测分析

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中华病理学杂志 2012年第9期41卷 590-594页

作者：凌云应建明邱田山灵郭蕾吕宁中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院病理科 100021

目的研究结直肠癌KRAS、BRAF、PIK3CA等基因突变情况，分析KRAS基因及其他影响靶向治疗效果的基因突变在结直肠癌中的分布。方法收集结直肠癌标本311例，所有标本均通过石蜡包埋、切片，HE染色后确定肿瘤细胞含量，必要时切割富集肿瘤... 详细信息

目的研究结直肠癌KRAS、BRAF、PIK3CA等基因突变情况，分析KRAS基因及其他影响靶向治疗效果的基因突变在结直肠癌中的分布。方法收集结直肠癌标本311例，所有标本均通过石蜡包埋、切片，HE染色后确定肿瘤细胞含量，必要时切割富集肿瘤细胞后采用聚合酶链反应-直接测序法检测KRAS基因第2号外显子的第12和13位密码子、BRAF基因的第11和15号外显子、PIK3CA基因的第9和20号外显子、表皮生长因子受体（EGFR）基因的第18至21号外显子。结果KRAS、BRAF、PIK3CA和EGFR等基因在结直肠癌的突变率分别为44．1％（137／311）、5．8％（9／156）、2．6％（4／156）和1．3％（2／156）。KRAS基因突变阳性标本中第12位密码子的突变占81．0％（111／137），其中p．G12D发生率最高，占总突变的45．3％（62／137）；第13位密码子的突变占19．0％（26／137），以c．38G〉A为主（17．5％，24／137）。结论结直肠癌中KRAS基因突变的发生率较高；结直肠癌患者联合检测KRAS、BRAF、PIK3CA等基因突变可获得额外靶向治疗的预测信息。

关键词：结直肠肿瘤 DNA突变分析聚合酶链反应序列分析

荧光PCR-优化寡核苷酸探针法与Sanger测序法检测肺癌、结直肠癌患者KRAS基因突变的对比分析

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中华病理学杂志 2012年第9期41卷 599-602页

作者：邱田凌云陈钊山灵郭蕾吕宁应建明中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院病理科 100021 清华大学生命科学学院

目的对荧光PCR-优化寡核苷酸探针法与Sanger测序法检测肺癌、结直肠癌患者KRAS基因突变阳性率、符合率进行对比分析，探讨荧光PCR-优化寡核苷酸探针法检测KRAS基因突变的临床应用特点。方法收集221例肺腺癌、131例结直肠癌标本。所有标... 详细信息

目的对荧光PCR-优化寡核苷酸探针法与Sanger测序法检测肺癌、结直肠癌患者KRAS基因突变阳性率、符合率进行对比分析，探讨荧光PCR-优化寡核苷酸探针法检测KRAS基因突变的临床应用特点。方法收集221例肺腺癌、131例结直肠癌标本。所有标本均经4％中性甲醛固定、石蜡包埋、组织切片后评估肿瘤细胞含量，必要时行刮取富集肿瘤细胞后提取基因组DNA，采用荧光PCR-优化寡核苷酸探针法及Sanger测序法检测标本中KRAS基因突变。统计两种方法检测突变阳性率、突变类型、与患者特征相关性及符合率等。结果221例肺癌标本中通过荧光PCR-优化寡核苷酸探针法及Sanger测序法检卅KRAS基因突变阳性率分别为6．3％（14／221）、4．5％（10／221）；131例结直肠癌标本中检出KRAS基因突变阳性率分别为41．2％（54／131）、40．5％（53／131）。不论何种方法检测KRAS基因突变阳性率均与患者性别、年龄无关（P〉0．05）。两种方法检测KRAS基因突变的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。结直肠癌KRAS基因突变率显著高于肺癌（P〈0．01）。KRAS基因第12位密码子突变比例显著高于第13位密码子（P〈0．05）。两种方法检测结果总体符合率为97．4％。结论荧光PCR-优化寡核苷酸探针法检测肺癌、结直肠癌患者KRAS基因突变检出率与Sanger测序法相当，可作为Sanger测序法之外的基因突变检测的备选方法。

关键词：结直肠肿瘤肺肿瘤 DNA突变分析聚合酶链反应序列分析

全自动免疫组织化学法检测肺腺癌组织中间变性淋巴瘤激酶融合基因表达情况

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中华病理学杂志 2014年第2期43卷 95-98页

作者：郭蕾刘秀云邱田凌云山灵谢永强中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所病理科 100021

目的了解全自动免疫组织化学法检测肺腺癌组织中的间变性淋巴瘤激酶（ALK）蛋白表达的敏感度和特异度,探讨用免疫组织染色方法对肺腺癌患者进行ALK基因异常初筛的可能性.方法收集2012年2月至12月共计404例肺腺癌手术标本,选肿瘤蜡块... 详细信息

目的了解全自动免疫组织化学法检测肺腺癌组织中的间变性淋巴瘤激酶（ALK）蛋白表达的敏感度和特异度,探讨用免疫组织染色方法对肺腺癌患者进行ALK基因异常初筛的可能性.方法收集2012年2月至12月共计404例肺腺癌手术标本,选肿瘤蜡块制备成组织芯片后,在全自动免疫组织化学染色仪上,采用Ventana抗ALK兔单克隆抗体（D5F3）和超敏检测系统进行染色,检测ALK蛋白表达情况,同时进行荧光原位杂交（FISH）法确认ALK融合基因阳性率.结果 404例肺腺癌标本中,375例ALK蛋白表达阴性,29例ALK蛋白表达阳性,阳性率为7.2％.29例ALK蛋白表达阳性的病例FISH检测均存在ALK融合基因,而375例ALK蛋白表达阴性的病例FISH检测均无ALK融合基因,灵敏度和特异度均为100％.结论全自动免疫组织化学方法检测ALK蛋白可以作为肺腺癌患者抗ALK靶向治疗前一个经济、简单实用的筛选诊断方法,尚需临床上进一步验证.

关键词：肺肿瘤腺癌基因融合

全媒体时代高校思想政治理论课教学的价值、挑战及应对

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创新教育研究 2021年第5期9卷 1263-1267页

作者：山灵河南科技大学河南洛阳

在全媒体时代,思政课教学必须着力解决好高校“培养什么人、怎么培养人、为谁培养人”的问题。信息传播样式多样化、信息传播内容海量化、信息传播范围扩大化等现实对高校思政课教学带来较大压力和挑战。对此,必须加强党对高校思政课教... 详细信息

在全媒体时代,思政课教学必须着力解决好高校“培养什么人、怎么培养人、为谁培养人”的问题。信息传播样式多样化、信息传播内容海量化、信息传播范围扩大化等现实对高校思政课教学带来较大压力和挑战。对此,必须加强党对高校思政课教学的领导,加强思政课教师对大学生的经常性引导,积极学习运用最新的网络信息技术,方能有效提升全媒体时代高校思政课教学实效。

关键词：全媒体思想政治理论课挑战应对

新时代高校党外知识分子思想政治引领中文化认同路径探析

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社会科学前沿 2021年第12期10卷 3415-3419页

作者：山灵河南科技大学河南洛阳

新时代做好党外知识分子工作是统一战线工作的重要组成部分,而做好党外知识分子思想政治工作又是党外知识分子工作的核心,如何做好党外知识分子思想政治引领,其中文化认同具有不可估量的作用。该研究旨在探索新时代背景下引导高校党外... 详细信息

新时代做好党外知识分子工作是统一战线工作的重要组成部分,而做好党外知识分子思想政治工作又是党外知识分子工作的核心,如何做好党外知识分子思想政治引领,其中文化认同具有不可估量的作用。该研究旨在探索新时代背景下引导高校党外知识分子增进对中国特色社会主义文化认同的构成要素和实现途径,从而为实现党外知识分子对当前国家体制政治认同、思想认同、理论认同和情感认同提供参考。

关键词：新时代高校党外知识分子思想政治引领文化认同

山禾药业黄氏响声丸启动品牌复兴第二步 008

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医药经济报

作者：山灵

本报讯 11月28日，山禾药业黄氏响声丸“聚首山禾，成就辉煌”经销商峰会在江苏无锡隆重召开。　　据山禾药业相关负责人介绍，此次峰会对于山禾药业具有非常重要的意义，它不但是2005年黄氏响声丸“品牌复兴工程”第一阶段的庆功会，...

本报讯 11月28日，山禾药业黄氏响声丸“聚首山禾，成就辉煌”经销商峰会在江苏无锡隆重召开。　　据山禾药业相关负责人介绍，此次峰会对于山禾药业具有非常重要的意义，它不但是2005年黄氏响声丸“品牌复兴工程”第一阶段的庆功会，也是黄氏响声丸2006年强势发力的誓师会?

关键词：

来源： cnki报纸评论

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昆明白小鼠卵母细胞去核研究

河北农业大学学报 2006年第5期29卷 91-93,97页

作者：丛银峰王勇胜山灵刘军张涌西北农林科技大学生物工程研究所陕西杨凌712100

为了提高昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,该研究在不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01、0.02、0.03 g/mL的M2-液微滴中,在体式显微镜下观察显核效果以确定最佳浓度;将有... 详细信息

为了提高昆明白小鼠MⅡ期卵母细胞的去核效率及质量,该研究在不同条件下,比较了小鼠卵母细胞的去核效果:将小鼠MⅡ期卵母细胞放入含蔗糖浓度分别为0.01、0.02、0.03 g/mL的M2-液微滴中,在体式显微镜下观察显核效果以确定最佳浓度;将有清晰可见细胞核的卵母细胞放入含细胞松弛素B(Cytocha-lasin-B,CB)浓度分别为5、7.5、10μg/mL操作液中去核,显微镜下确定去核率。结果表明:操作液中加入蔗糖浓度为0.02g/mL时显核效果最好;去核时操作液中细胞松弛素B浓度为10μg/mL时去核死亡率最低。

关键词：昆明白小鼠 MⅡ期卵母细胞蔗糖细胞松弛素B 去核

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加强成教学籍管理信息化保障毕业生电子注册

中国科技信息 2011年第2期 119-121页

作者：马磊代顺道山灵河南科技大学继续教育学院

随着我国成人高等教育的迅速发展,加强学籍管理促进教学质量的提高显得尤其重要。本文通过对河南科技大学继续教育学院成人高等教育学籍管理实践活动的总结,提出了加强成人高等教育学籍管理信息化建设,从而为认真做好毕业生电子注册工... 详细信息

随着我国成人高等教育的迅速发展,加强学籍管理促进教学质量的提高显得尤其重要。本文通过对河南科技大学继续教育学院成人高等教育学籍管理实践活动的总结,提出了加强成人高等教育学籍管理信息化建设,从而为认真做好毕业生电子注册工作打好坚实的基础。

关键词：成人教育学籍管理信息化电子注册