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宁波地区耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌的分子生物学特征研究

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中国人兽共患病学报 2022年第9期38卷 796-801页

作者：高晖屠艳烨吴巧萍李情操杨烨裘雪丹宁波市医疗中心李惠利医院宁波315000

目的研究宁波地区耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae,CR-hvKP)分子流行特征,为宁波地区CR-hvKP院内防控及临床治疗提供理论依据。方法从宁波地区3家医院收集150株耐碳青霉烯类... 详细信息

目的研究宁波地区耐碳青霉烯类高毒力肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant hypervirulent Klebsiella pneumoniae,CR-hvKP)分子流行特征,为宁波地区CR-hvKP院内防控及临床治疗提供理论依据。方法从宁波地区3家医院收集150株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,用PCR筛选出CR-hvKP;再用PCR检测其耐药基因和毒力基因。结果150株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中检出14株CR-hvKP,占比为9.33%;主要标本类型为血流感染6株和痰液5株;临床科室分布以ICU(5株)为主,其次为呼吸科(3株)和血液科(3株)。14株CR-hvKP拉丝试验阳性,荚膜血清型以K2为主,整合子均为intI1型;碳青霉烯类耐药基因以KPC-2为主,且发现3株同时携带KPC-2和NDM-1耐药基因;14株CR-hvKP均携带rmpA、kpn、entB、wabG、ureA、fimH毒力基因,其中2株aerobactin基因阳性。结论宁波地区出现的CR-hvKP以K2荚膜型为主,耐药情况严重,且同时携带耐药及毒力基因,提示临床须合理使用抗生素,加强耐药监测及院感防控,以减少CR-hvKP的传播。

关键词： CR-hvKP 高黏液表型耐药基因毒力基因

胆汁来源ESBLs-KP分离株整合子携带与毒力基因和耐药机制关系

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中华医院感染学杂志 2023年第16期33卷 2468-2472页

作者：屠艳烨高晖王峰汪萌茹雯哲赵荣青宁波市医疗中心李惠利医院检验科浙江宁波315040

目的研究医院胆汁来源产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBLs-KP)整合子携带情况与其毒力基因和耐药机制的相关性,为医院院感防控及临床治疗提供参考依据。方法收集2019年1月-2022年6月宁波市医疗中心李惠利医院肝胆外科胆汁培养阳... 详细信息

目的研究医院胆汁来源产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBLs-KP)整合子携带情况与其毒力基因和耐药机制的相关性,为医院院感防控及临床治疗提供参考依据。方法收集2019年1月-2022年6月宁波市医疗中心李惠利医院肝胆外科胆汁培养阳性肺炎克雷伯菌,筛选出ESBLs-KP;聚合酶链式反应(PCR)检测其整合子、毒力基因和耐药基因。结果 254例中ESBLs-KP 78株,占比30.71%;仅携带整合子IntI1;以K57荚膜基因为主;整合子阳性组与整合子阴性组,除脂多糖相关基因wabG和耐药基因blaCTX-M-3、blaCTX-M-9、blaCTX-M-14存在统计学差异外,其余均无差异;抗菌药物除厄他培南和阿米卡星外,前者耐药率均高于后者;且发现3株整合子阳性高毒力侵袭性ESBLs-hvKP以及20株pLVPK-like毒力质粒阳性肺炎克雷伯菌。结论医院胆汁来源ESBLs-KP主要携带整合子IntI1;且整合子阳性抗菌药物耐药率均高于整合子阴性;医院整合子、毒力质粒、耐药基因三者的共同传播较为严重,提示医院亟需加强耐药监测及院感防控。

关键词：超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌整合子耐药基因毒力基因

rVvhA作用于THP-1细胞NF-κB信号通路的研究

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中国细胞生物学学报 2012年第2期34卷 154-161页

作者：屠艳烨刘艳飞陈建林楼永良温州医学院检验医学院温州325035

研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对人单核细胞系(THP-1)NF-κB信号通路的影响。应用CCK-8法检测rVvhA对THP-1细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察rVvhA作用后细胞的形态学变化和细胞内NF-κB p65的核转移情况;应用流... 详细信息

研究重组创伤弧菌溶细胞素(rVvhA)对人单核细胞系(THP-1)NF-κB信号通路的影响。应用CCK-8法检测rVvhA对THP-1细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜和激光共聚焦显微镜观察rVvhA作用后细胞的形态学变化和细胞内NF-κB p65的核转移情况;应用流式细胞仪和Westernblot检测rVvhA作用后细胞浆内和细胞核内NF-κB p65的表达情况;ELISA检测rVvhA作用于细胞后TNF-α、IL-6表达含量的变化。试验结果显示:rVvhA能够呈时间–剂量依赖性地抑制THP-1细胞的生长,且镜下可见明显的细胞形态学变化。激光共聚焦显示0.4 HU/mL rVvhA作用6 h后,THP-1细胞内NF-κB p65的核转移现象最明显;流式细胞仪结果显示0.6 HU/mL rVvhA作用2 h后,细胞内总的NF-κB p65表达量达到高峰;Western blot检测显示0.6 HU/mL rVvhA作用4 h时细胞核内NF-κBp65蛋白含量最高;ELISA显示TNF-α的表达在rVvhA作用的适当范围内呈时间–剂量依赖性变化;IL-6在0.6 HU/mL rVvhA作用时表达量最高,随后随着浓度的增加反而下降;NF-κB抑制剂能使IL-6表达量下调。实验证明rVvhA作用于THP-1细胞后能激活NF-κB信号通路,上调TNF-α、IL-6的表达,而NF-κB抑制剂能够下调IL-6的表达。

关键词：创伤弧菌溶细胞素 THP-1细胞 NF-κBp65 TNF-α IL-6

高毒力侵袭性耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌筛查及其毒力特征的研究

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中国卫生检验杂志 2023年第6期33卷 661-664页

作者：屠艳烨高晖吴巧萍王峰裘莉佩赵荣青宁波市医疗中心李惠利医院浙江315000

目的筛查高毒力侵袭性耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CR-hv KP)及研究其毒力特征,为院感防控及临床用药提供参考。方法收集2021年本院区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌94株,用PCR方法检测其毒力基因及耐药基因;并用全基因测序方法结合生物信息工... 详细信息

目的筛查高毒力侵袭性耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CR-hv KP)及研究其毒力特征,为院感防控及临床用药提供参考。方法收集2021年本院区耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌94株,用PCR方法检测其毒力基因及耐药基因;并用全基因测序方法结合生物信息工程技术分析其毒力特征。结果94株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中分离出1株CR-hv KP,分离率为1.06%;PCR结果显示其携带毒力基因rmpA、aerobactin、kpn、kfu、entB、uge、wabG、ureA、fimH,产B类碳青霉烯酶NDM-1;全基因测序结果显示其为血清荚膜K1型,此外还包含如超广谱β-内酰胺酶TEM-1、CTX-M-15及喹诺酮类耐药基因QnrS1等其他耐药基因;药敏结果显示除呋喃妥因敏感、头孢吡肟中介外其他均耐药。结论宁波地区已出现高毒力侵袭性耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,需更加合理使用抗菌药物,减少耐药现象发生的同时更需加强院感防控,减少此类CR-hv KP的传播。

关键词：高毒力侵袭性耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌毒力基因耐药基因全基因测序

通过生物信息学分析筛选弥漫性大B细胞淋巴瘤的关键miRNA和治疗靶点

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中国卫生检验杂志 2023年第17期33卷 2118-2121页

作者：赵荣青郭菲张威屠艳烨李情操吴巧萍宁波市医疗中心李惠利医院检验科浙江315040 宁波市医疗中心李惠利医院医工融合创新研究院

目的基于生物信息学分析的方法寻找影响弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)的关键miRNA和治疗靶点。方法对GEO数据库中的基因芯片数据进行检索筛选,获取DLBCL相关的非编码RNA(miRNA)表达芯片GSE173080,利用... 详细信息

目的基于生物信息学分析的方法寻找影响弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma, DLBCL)的关键miRNA和治疗靶点。方法对GEO数据库中的基因芯片数据进行检索筛选,获取DLBCL相关的非编码RNA(miRNA)表达芯片GSE173080,利用在线分析工具GE02R对芯片数据进行分析,筛选差异表达的miRNA。通过miRWALK软件预测靶基因,并进行miRNA和靶基因的负相关分析。利用DAVID软件对靶基因进行基因本体论(gene ontology, GO)和KEGG通路富集分析。通过STRING软件建立蛋白相互作用网络,并进行聚类分析。此外,通过GEPIA数据库进行靶基因的表达验证。结果共筛选出34个差异表达的miRNA,包括28个表达上调的miRNA和6个下调的miRNA。结论 hsa-miR-193a-3p、hsa-miR-212-3p和hsa-miR-28-5p是影响DLBCL的关键的肿瘤抑制miRNA,其对应的靶基因为将来DLBCL的临床诊断和靶向治疗提供了相关依据。

关键词：弥漫性大B细胞淋巴瘤生物信息学小分子核糖核酸靶基因

创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对小鼠单核巨噬细胞产NO及其合酶的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第10期30卷 887-891页

作者：杜李梅郭雅君屠艳烨胡蝶楼永良严杰温州医学院检验医学院浙江省医学遗传学重点实验室325035 浙江大学医学院病原生物学教研室

目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVvhA）对小鼠单核-巨噬细胞（J774A.1）产生一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响.方法应用MTT法检测rVvhA对J774A.1增殖的抑制作用;Griess法检测NO含量;RT-PCR和免疫荧光法检测... 详细信息

目的研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白（rVvhA）对小鼠单核-巨噬细胞（J774A.1）产生一氧化氮（NO）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达的影响.方法应用MTT法检测rVvhA对J774A.1增殖的抑制作用;Griess法检测NO含量;RT-PCR和免疫荧光法检测iNOS mRNA和蛋白表达水平.结果 0.8 HU/ml及以上浓度rVvhA可显著抑制J774A.1的增殖;在IFN-γ的辅助作用下,0.4 HU/ml的rVvhA即可诱导J774A.1产生大量NO,显著增加细胞内活性以及iNOS mRNA和蛋白表达水平.结论 rVvhA可诱导巨噬细胞产生NO和iNOS表达,在创伤弧菌的致病机制中具有重要意义.

关键词：创伤弧菌溶细胞素 J774A.1 一氧化氮诱导型一氧化氮合酶

整合子的临床分布及其与细菌耐药表型相关性分析

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中华医院感染学杂志 2020年第13期30卷 1970-1975页

作者：李情操吴巧萍屠艳烨卢雯君袁舒颖浙江省宁波市医疗中心李惠利医院东部院区检验科浙江宁波315040

目的了解整合子阳性菌株在临床分离的常见病原菌中的分布情况,及其与细菌耐药表型的相关性,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,对宁波市李惠利医院2018年临床分离的400株常见病原菌进行第1... 详细信息

目的了解整合子阳性菌株在临床分离的常见病原菌中的分布情况,及其与细菌耐药表型的相关性,为控制医院感染提供依据。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,对宁波市李惠利医院2018年临床分离的400株常见病原菌进行第1、2和3类整合子筛查,并对整合子阳性和阴性菌株的耐药表型进行对比分析。结果 400株临床菌株中整合子阳性菌株为112例,阳性率为28%。其中第1、2类及同时阳性菌株分别为17.50%、4.75%和5.75%,没有筛选到第3类整合子;112株阳性菌株主要分布于大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌;可变区测序结果显示,大肠埃希菌携带耐药基因主要为aadA5和aacA4,肺炎克雷伯菌携带耐药基因主要为aadA2、blaOXA-30和dfrA17,铜绿假单胞菌携带基因主要为aadA5和aacA8;鲍氏不动杆菌主要携带基因为afrA12;37株整合子阳性肺炎克雷伯菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、庆大霉素、左氧氟沙星、妥布霉素的耐药性均高于整合子阴性菌株(P<0.05),16株整合子阳性的铜绿假单胞菌对妥布霉素的耐药性高于整合子阴性菌株(P<0.05),10株整合子阳性的鲍氏不动杆菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药性高于整合子阴性菌株(P<0.05)。结论本地区临床菌株中整合子分离率较高,其中以第1和2类为主,主要分布于革兰阴性菌中,来源于呼吸和重症监护室(ICU)等院感易发科室,整合子的携带与宿主菌的耐药表型有着密切联系。

关键词：整合子临床分布耐药表型相关性

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奇异变形菌中整合子分布及耐药性分析

中国抗生素杂志 2020年第11期45卷 1148-1152页

作者：陈科达李情操吴巧萍屠艳烨高丽宁波大学医学院宁波315211 宁波市医疗中心李惠利医院宁波315040

目的了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床... 详细信息

目的了解院内奇异变形菌中各类整合子的携带分布情况、阳性菌株可变区基因盒类型以及其与宿主菌耐药表型的相关性,从而为临床治疗和院内感染控制提供参考。方法采用PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳等方法,将本院2016年1月—2018年12月份从临床标本中分离得到的150株奇异变形菌进行第1、2和3类整合子的筛选,并对整合子阳性菌株可变区进行测序分析以及宿主菌的耐药性进行相关性分析。结果 150株奇异变形菌中携带整合子的菌株共有91株,阳性率为60.7%,其中第1类整合子阳性菌株有30株,占20.0%;第2类整合子阳性菌株22株,占14.7%;同时携带第1和2类菌株39株,占26.0%;未筛出第3类整合子;在91株整合子阳性菌株中,86株可变区出现扩增产物条带,其余5株可变区未见扩增产物;第1类整合子阳性菌株可变区携带的耐药基因盒主要为AadA2、DfrA32,第2类整合子阳性菌株可变区携带耐药基因盒主要为DfrA1;可变区携带AadA2的菌株对庆大霉素和妥布霉素的耐药率显著高于整合子阴性菌株(P<0.01),可变区携带DfrA1或DfrA32的菌株对复方磺胺甲噁唑(即甲氧苄啶/磺胺甲噁唑)的耐药率也明显高于整合子阴性菌株(P<0.01);91株整合子阳性菌株对氨苄西林/舒巴坦、复方磺胺甲噁唑、环丙沙星、庆大霉素、头孢曲松、妥布霉素和左氧氟沙星的耐药率均显著高于整合子阴性菌株(P<0.01)。结论临床分离的奇异变形菌携带整合子的比例较高,其可变区所携带的耐药基因主要为编码氨基糖苷类和甲氧苄氨嘧啶类抗菌药物的基因,整合子的携带与宿主菌产生的耐药性呈高度相关。

关键词：奇异变形菌整合子可变区耐药性

耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌第1类整合子可变区启动子检测及同源性分析

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中华医院感染学杂志 2017年第12期27卷 2641-2644,2648页

作者：李情操吴巧萍屠艳烨赵玉杰魏取好宁波市医疗中心李惠利东部医院检验中心浙江宁波315040 浙江省人民医院检验科浙江杭州310014

目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CR-PA)中第1类整合子可变区启动子的种类和排列方式,分析其与介导的耐药基因表达之间的关系;并明确整合子阳性菌株的同源性情况。方法运用聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳以及测序的方法,以201... 详细信息

目的了解医院耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(CR-PA)中第1类整合子可变区启动子的种类和排列方式,分析其与介导的耐药基因表达之间的关系;并明确整合子阳性菌株的同源性情况。方法运用聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳以及测序的方法,以2012-2014年医院临床分离42株第1类整合子阳性CR-PA为对象,检测其可变区启动子和同源性。结果 42株实验菌株中强启动子PcS为2株、弱启动子PcW为2株,剩余38例皆为杂合1型启动子PcH1;位于Pc下游的P2启动子42例皆为-35到-10区间隔有14个碱基序列的无活性型的启动子;42株CR-PA经肠杆菌基因间重复共有序列PCR(ERIC-PCR)基因分型,主要分为A、B、C、D、E 5型,其中A1型32株,A2型6株,B、C、D和E型各为1株,A型菌株主要是来源于ICU及神经外科。结论本地区临床分离CR-PA中第1类整合子可变区的启动子主要以杂合1型启动子PcH1为主,P2启动子全为无活性型;整合子阳性菌株的基因分型间呈现高度的同源性,可能存在着医院的克隆传播。

关键词：铜绿假单胞菌整合子启动子同源性