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现代预防医学 2008年第15期35卷 2942-2944+2949页

作者：葛淑敏金宁一尹革芬长春理工大学生命科学技术学院军事医学科学院军事兽医研究所

[目的]建立针对O型与Asial型FMDV的二联RT-PCR检测方法。[方法]在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测O型与Asia1型FMDV二联PCR引物。[结果]本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了... 详细信息

[目的]建立针对O型与Asial型FMDV的二联RT-PCR检测方法。[方法]在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测O型与Asia1型FMDV二联PCR引物。[结果]本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了二联RT-PCR反应体系和反应条件,建立了有效、特异、敏感的检测O型FMDV与Asia1型FMDV的二联RT-PCR方法。[结论]本试验为口蹄疫的诊断、防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 O型 Asia1型 RT-PCR

鹌鹑减蛋综合征病毒单克隆抗体的制备及生物学特性

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中国兽医科技 2003年第7期33卷 14-18页

作者：尹革芬俞乃胜李文贵王旭东云南农业大学动物科技学院云南昆明650201

以鹌鹑减蛋综合征QAV C94病毒为抗原免疫BALB/c小鼠 ,制备单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。获得 5株分泌单克隆抗体的细胞株 (命名为H1、H3、H4、H6和H8)。这 5株杂交瘤细胞可长期稳定地分泌单克隆抗体 ,分泌的单克隆抗体为IgG2a亚... 详细信息

以鹌鹑减蛋综合征QAV C94病毒为抗原免疫BALB/c小鼠 ,制备单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。获得 5株分泌单克隆抗体的细胞株 (命名为H1、H3、H4、H6和H8)。这 5株杂交瘤细胞可长期稳定地分泌单克隆抗体 ,分泌的单克隆抗体为IgG2a亚类 ,具有高度的特异性 ,只特异地作用于鹌鹑减蛋综合征病毒 ;微量血凝抑制试验显示H4有血凝抑制活性 ,腹水效价为 1∶2 6 ;这 5株单克隆抗体都没有沉淀活性 ,也不与CELO抗原发生沉淀反应 ;它们的亲和力以H4最大 ,相对亲和力依次为H4 >H6 >H1 >H8>H3。

关键词：鹌鹑减蛋综合征病毒单克隆抗体制备生物学特性鉴定

猪白细胞介素18成熟蛋白基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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中国兽医学报 2003年第5期23卷 430-432页

作者：郑敏金宁一张洪勇李昌尹革芬解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062

通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆... 详细信息

通过 RT- PCR方法从用 PHA和 L PS刺激的猪脾脏细胞中扩增出猪白细胞介素 18(p IL - 18)成熟蛋白基因的c DNA,克隆到 T载体 p UCm- T后 ,序列测定表明 ,p IL- 18成熟蛋白基因核苷酸长度为 4 74 bp,编码 15 7个氨基酸。将该基因片段克隆到大肠杆菌表达载体 p ET- 2 8a构建重组质粒 p ETIL 18m,转化大肠杆菌 BL 2 1(DE3) ,并用 IPTG诱导。重组菌菌体裂解物 SDS- PAGE可检测到相对分子质量为 190 0 0的重组蛋白 ,免疫印迹法证实该重组蛋白可以与人 IL-

关键词：猪白细胞介素18 成熟蛋白基因克隆原核表达 RT-PCR 大肠杆菌免疫佐剂免疫调节剂

口蹄疫病毒(FMDV)多重RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医杂志 2008年第2期44卷 3-5页

作者：葛淑敏金宁一尹革芬郑敏长春理工大学生命科学技术学院吉林长春130022 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测FMDV通用型引物及FMDVAsiaI型、O型口蹄疫病毒不同基因型即:中国型(Cathay)与泛亚株(PanAsia)的多重PCR引物。本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立... 详细信息

在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测FMDV通用型引物及FMDVAsiaI型、O型口蹄疫病毒不同基因型即:中国型(Cathay)与泛亚株(PanAsia)的多重PCR引物。本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了多重RT-PCR反应体系和反应条件,并进行了相关病毒检测试验。结果表明,本试验建立了有效、特异、敏感的检测FMDVAsiaI型及O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的多重RT-PCR检测方法,为口蹄疫的诊断防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 Asia Ⅰ型中国型泛亚株 RT-PCR

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口蹄疫病毒O型Cathay毒株的分离鉴定

安徽农业科学 2008年第35期36卷 15489-15490页

作者：葛淑敏金宁一尹革芬长春理工大学生命科学技术学院吉林长春130022 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

[目的]研究FMD疑似组织病料,为口蹄疫相关研究工作提供试验参考。[方法]应用细胞培养、电镜观察、反向间接血凝试验、RT-PCR及测序技术对FMD疑似组织病料进行分离鉴定,确定其血清型及基因型。[结果]结果显示,分离鉴定的FMD疑似组织病料... 详细信息

[目的]研究FMD疑似组织病料,为口蹄疫相关研究工作提供试验参考。[方法]应用细胞培养、电镜观察、反向间接血凝试验、RT-PCR及测序技术对FMD疑似组织病料进行分离鉴定,确定其血清型及基因型。[结果]结果显示,分离鉴定的FMD疑似组织病料为O型Cathay口蹄疫病毒株。[结论]为口蹄疫的诊断、防治、流行病学调查及疫苗的研究使用奠定了基础。

关键词：口蹄疫病毒 O型 Cathay 鉴定

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猪Mx1基因真核表达载体的构建及表达

中国兽医学报 2011年第12期31卷 1773-1776页

作者：毕峻龙沈学文李文贵舒相华杨贵树尹革芬云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201

根据GenBank中猪Mx1基因序列设计并合成引物,对Mx1基因ORF区全长1 992个碱基进行扩增。将扩增片段与pVax1载体连接,构建pVa-Mx1-ORF真核表达载体。将构建的表达载体导入BHK-21和HEK-293细胞进行表达,用RT-PCR和间接免疫荧光对表达产物... 详细信息

根据GenBank中猪Mx1基因序列设计并合成引物,对Mx1基因ORF区全长1 992个碱基进行扩增。将扩增片段与pVax1载体连接,构建pVa-Mx1-ORF真核表达载体。将构建的表达载体导入BHK-21和HEK-293细胞进行表达,用RT-PCR和间接免疫荧光对表达产物进行鉴定。结果表明,所构建的pVa-Mx1-ORF表达载体在BHK-21和HEK-293细胞中成功表达。

关键词： Mx1蛋白表达载体构建猪

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云南省猪戊型肝炎血清流行病学调查

云南农业大学学报（自然科学版） 2009年第6期24卷 917-919页

作者：李文贵李精华杨贵树舒萍尹革芬云南农业大学动物科学技术学院云南昆明650201 西双版纳州勐腊县兽医站云南西双版纳666300

为了解云南省猪群戊型肝炎流行情况,从各地养猪场、屠宰场共采集270份血清,应用双抗夹心酶联免疫测定法(DS-ELISA)进行血清学调查。检测结果174份样品呈HEV-IgG抗体阳性,总阳性率64.4%,其中养殖场血清抗体阳性率为55.6%,屠宰厂为68.9%... 详细信息

为了解云南省猪群戊型肝炎流行情况,从各地养猪场、屠宰场共采集270份血清,应用双抗夹心酶联免疫测定法(DS-ELISA)进行血清学调查。检测结果174份样品呈HEV-IgG抗体阳性,总阳性率64.4%,其中养殖场血清抗体阳性率为55.6%,屠宰厂为68.9%。比较养殖场的各年龄阶段猪群显示,母猪群血清抗体阳性率最高,为71.4%。本研究表明猪戊型肝炎在云南省也有存在,并呈一定的流行趋势,感染率随年龄增长而升高。

关键词：猪戊型肝炎血清流行病学

猪瘟病毒云南毒株E2基因片段序列测定及分析

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中国预防兽医学报 2001年第3期23卷 167-169页

作者：尹革芬朱建波姚俊高华峰信爱国张念祖云南农业大学动物科学技术学院昆明650201 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与... 详细信息

用RT_nPCR方法 ,选择猪瘟病毒 2 0 0 0年云南部分地方流行毒株E2基因主要保护性抗原决定簇编码区片段进行扩增和cDNA序列分析 ,并与中国标准强毒石门株进行比较。结果显示 ,云南地方毒株之间核苷酸及氨基酸序列同源性均大于90 % ;但与中国标准强毒石门株差异较大 ,其核苷酸及氨基酸同源性均小于 80 %。

关键词：猪瘟病毒 E2基因序列分析

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油菜花期东方蜜蜂及西方蜜蜂蜜囊细菌多样性

应用昆虫学报 2014年第6期51卷 1567-1575页

作者：王淼徐鸿尹革芬赵文正和绍禹云南农业大学植物保护学院昆明650201 云南农业大学东方蜜蜂研究所昆明650201 云南农业大学动物科学学院昆明650201

【目的】本研究对油菜花期的东方蜜蜂Apis cerana、西方蜜蜂Apis mellifera蜜囊细菌进行分离培养及分子鉴定,通过序列比对及系统发育树分析彼此间的多样性差异和来源,为蜂群饲养管理过程中细菌的控制和应用提供理论依据。【方法】对东... 详细信息

【目的】本研究对油菜花期的东方蜜蜂Apis cerana、西方蜜蜂Apis mellifera蜜囊细菌进行分离培养及分子鉴定,通过序列比对及系统发育树分析彼此间的多样性差异和来源,为蜂群饲养管理过程中细菌的控制和应用提供理论依据。【方法】对东、西方蜜蜂蜜囊细菌进行分离、纯化培养;并对分离菌株的16S r DNA基因片段进行扩增和测序,序列比对后进行系统发育分析。【结果】蜜囊中解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens占总菌数的百分比为69.81%-95.97%,P值在0.007-0.009之间,显著高于其它细菌占总菌数百分比（4.03%-30.19%）,是优势菌;275株培养特征和表现型不同的菌株共有9种不同的单倍型菌株,通过比对其相似度〉99%;其中16株细菌16S r DNA基因序列已提交Gen Bank数据库,登录号：kf710012-kf710033;东方蜜蜂蜜囊细菌包括2个属中的5个种,西方蜜蜂蜜囊细菌包括5个属中的7个种,花蜜中细菌包括2个属中的2个种;系统发育树分析表明,簇Ⅰ和簇Ⅱ分别与参考菌株EF565944、EF565939和EF565936属同一种;未分离到参考簇Ⅴ;簇Ⅲ、簇Ⅳ、簇Ⅵ、簇Ⅶ这4个属的蜜囊细菌是首次报道并提交Gen Bank。【结论】东、西方蜜蜂蜜囊细菌除了共有的优势菌解淀粉芽孢杆菌,细菌多样性有明显的差异;与国外蜜蜂蜜囊研究存在地理差异;解淀粉芽孢杆菌可以作为蜂粮的添加剂,提高蜜蜂抗病性。

关键词：东方蜜蜂西方蜜蜂蜜囊 16S r DNA 细菌多样性