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1，8-桉叶素改善急性痛风性关节炎小鼠模型疼痛和炎症作用的机制研究

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1，8-桉叶素改善急性痛风性关节炎小鼠模型疼痛和炎症作用的机制...

作者：尹诚语浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:成功制备急性痛风性关节炎小鼠模型,观察不同剂量1,8-桉叶素(1,8-cineole,Eucalyptol,以下简称Euca)对急性痛风关节炎小鼠抗炎、镇痛作用;在确定有效剂量后,从体内、体外角度分别探讨NLRP3炎性小体参与1,8-桉叶素治疗急性痛风性关... 详细信息

目的:成功制备急性痛风性关节炎小鼠模型,观察不同剂量1,8-桉叶素(1,8-cineole,Eucalyptol,以下简称Euca)对急性痛风关节炎小鼠抗炎、镇痛作用;在确定有效剂量后,从体内、体外角度分别探讨NLRP3炎性小体参与1,8-桉叶素治疗急性痛风性关节炎的机制。方法:第一部分:①健康SPF级Balb/c小鼠随机分为对照组(Veh组)、模型组(MSU组)。MSU组于小鼠右踝后侧沿跟腱内侧以30～40°方向穿刺关节腔,注射0.5 mg/20μl尿酸钠悬浊液;Veh组则以同样方式注射等量磷酸盐缓冲液;于造模前分别测定模型组与对照组小鼠的机械痛(50%PWT)阈值以及踝关节周径,并于造模后的2、6、24和48 h测其50%PWT和踝关节周长(即肿胀)。②健康清洁级Balb/c小鼠随机分为对照组(Veh组)、模型组(MSU组)。MSU组于小鼠右踝后侧沿跟腱内侧以30～40°方向穿刺关节腔,注射0.5 mg/20μ1尿酸钠;Veh组则以同样方式注射等量磷酸盐缓冲液。观察造模后24h踝关节滑膜组织病理学改变。第二部分:(一)体内实验:①将健康雄性小鼠随机分为 7 组:对照组(Control 组)、模型组(MSU+Veh 组)、MSU+Euca(600 mg/kg,300 mg/kg,100 mg/kg,30 mg/kg 剂量组),MSU+Indo 组(吲哚美欣,30 mg/kg),MSU+Euca组与MSU+Indo组,腹腔注射给药,分别于模前1 h、模后5 h、23 h和47 h给药,Control组与MSU组腹腔注射同等体积对照溶剂,于造模前与造模后的2、6、24和48 h进行行为学检测。②健康清洁级Balb/c小鼠随机分为4组:Control组、MSU+Veh组、MSU+Euca 组(300 mg/kg)和 MSU+Indo 组(10 mg/kg),分别于模前 1h、模后 5h 和23 h给药,于造模前与造模后的2、6和24 h进行行为学检测。随后分取踝关节组织进行H&E染色检测滑膜关节病变与炎性细胞的浸润,Western blot(WB)和荧光定量PCR(qPCR)检测NLRP3通路相关蛋白与基因表达,试剂盒检测局部组织中氧化应激水平,分取支配踝关节的背根神经节进行WB与免疫荧光染色,检测TRPV1通道蛋白变化。③健康清洁级Balb/c小鼠随机分为4组:Control组、MSU+Veh组、MSU+NAC组(200 mg/kg)和MSU+Tempol组(200 mg/kg),给药时间点与行为学检测如体内实验②一致,模后24 h取小鼠踝关节组织进行氧化应激水平检测与NLRP3通路相关分子与TRPV1蛋白的表达。(二)体外实验:①使用不同剂量MSU(0,0.1,0.5和1 mg/ml)处理Raw 264.7巨噬细胞系,孵育4 h,收集细胞检测Il-1β基因表达,确定体外模型建立成功。②分别以不同浓度MSU(0,0.1,0.5和1 mg/ml)刺激Raw 264.7巨噬细胞系,培养4h后进行ROS检测。③取对数生长期Raw 264.7接种于6孔板,提前20 min加入不同浓度Euca(0,0.1,1,5和10 μM),随后加入MSU(0.5 mg/ml)或Veh共同孵育4h后进行ROS检测。④取对数生长期Raw 264.7巨噬细胞,加入不同浓度Euca(0,0.1,1,5和10 μM)孵育4 h后进行细胞活性检测。结果:第一部分:①造模24 h后,与Veh相比,MSU组小鼠关节开始出现肿胀,MSU组小鼠踝关节肿胀可持续48h以上;造模2h后,MSU组小鼠50%PWT开始出现下降,一直持续到模型建立后的48 h(p<0.05),疼痛与肿胀均在24 h达到峰值(p<0.05)。②MSU组小鼠踝关节组织相比Veh组显示滑膜组织广泛炎性细胞浸润。第二部分:(一)体内实验:①与MSU+Veh组相比,MSU+Euca能够减少MSU诱导的踝关节肿胀及50%PWT,并呈现剂量依赖性,其中MSU+Euca(300 mg/kg与600 mg/kg)治疗效果与MSU+Indo组相似。②与Control组相比,MSU+Veh组小鼠踝关节肿胀明显,50%PWT下降,踝关节组织存在大量炎性细胞浸润,尤其是中性粒细胞,周围软组织水肿。局部组织中NLRP3、Caspase-1和IL-1β基因和蛋白表达均上调,促炎细胞因子Il-6、Tnf-α、Cxcl1 和Cxcl2的mRNA过表达,体内抗氧化能力受到抑制,氧化应激水平升高,踝关节组织和支配踝关节的背根感觉神经元上TRPV1蛋白表达增高。而与模型组相比,1,8-桉叶素缓解了小鼠的炎症反应与疼痛,关节及周围滑膜组织炎症和炎性细胞浸润(p<0.05),踝关节组织中NLRP3炎性小体相关分子(NLRP3、Caspas

关键词：急性痛风性关节炎行为学细胞因子氧化应激 TRP通道

CXCL12/CXCR4信号通路参与慢性痛机制的研究进展

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中国疼痛医学杂志 2019年第9期25卷 690-694页

作者：李园园胡奇妙台燕郑小莉尹诚语刘伯一方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病理学重点实验室杭州310053 浙江中医药大学中医药科学院电镜研究室杭州310053

CXC趋化因子配体12(chemokine C-X-C motif ligand 12,CXCL12)是一种能诱导细胞向损伤部位定向运动的小分子蛋白质。趋化因子CXCL12通过作用于其特异性受体趋化因子CXC基序受体4(chemokine C-X-C motif receptor 4,CXCR4),参与炎症反应... 详细信息

CXC趋化因子配体12(chemokine C-X-C motif ligand 12,CXCL12)是一种能诱导细胞向损伤部位定向运动的小分子蛋白质。趋化因子CXCL12通过作用于其特异性受体趋化因子CXC基序受体4(chemokine C-X-C motif receptor 4,CXCR4),参与炎症反应、肿瘤形成、免疫等疾病的发生。近年来越来越多的研究表明CXCL12/CXCR4信号通路在慢性痛发生机制方面起重要作用。因此本文拟就当前国内外有关CXCL12/CXCR4信号通路参与炎症痛、神经病理性疼痛、癌痛、阿片类药物诱导痛觉过敏等慢性痛发生机制方面的最新研究进展进行综述。

关键词：慢性痛 CXCL12 CXCR4

电针对复杂区域疼痛综合征Ⅰ型大鼠模型痛觉敏化及脊髓胶质细胞活化的影响

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中华中医药杂志 2019年第5期34卷 2112-2116页

作者：胡奇妙刘伯宇台燕尹诚语李园园郑小莉刘伯一方剑乔浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室杭州310053 浙江中医药大学中医药科学院杭州310053

目的:观察电针"足三里""昆仑"穴对复杂区域疼痛综合征Ⅰ型(CRPSⅠ)大鼠模型机械性刺激足反应阈值(MPWT)和热刺激缩足反应潜伏期(TPWL)及脊髓背角星形胶质细胞、小胶质细胞活化的干预作用。方法:SD大鼠40只,随机分为假模型组、CRPSⅠ模型... 详细信息

目的:观察电针"足三里""昆仑"穴对复杂区域疼痛综合征Ⅰ型(CRPSⅠ)大鼠模型机械性刺激足反应阈值(MPWT)和热刺激缩足反应潜伏期(TPWL)及脊髓背角星形胶质细胞、小胶质细胞活化的干预作用。方法:SD大鼠40只,随机分为假模型组、CRPSⅠ模型组(模型组)、2/100Hz电针治疗组(电针组)、假电针治疗组,每组10只。模型组采用O型橡胶圈下肢近脚踝处加压模型。电针组取双侧"足三里""昆仑"穴进行干预,1d/次,共14d。检测各组大鼠造模前、造模后1、3、5、7、10、14d患侧MPWT和TPWL。采用免疫荧光法分别检测患侧L4～6段脊髓背角星形胶质细胞和小胶质细胞活化。结果:①电针组大鼠MPWT和TPWL均高于模型组和假电针组(P<0.01)。②与模型组比较,电针组脊髓背角星形胶质细胞活化标记物GFAP和小角质细胞活化标记物OX42表达均显著降低(P<0.05)。结论:电针治疗可有效抑制CRPSⅠ大鼠模型表现的痛觉敏化,促使MPWT、TPWL升高,其镇痛机制可能与显著下调脊髓中的星形胶质细胞和小胶质细胞过度活化有关。

关键词：电针针刺镇痛星形胶质细胞小胶质细胞脊髓

电针对复杂性区域疼痛综合征Ⅰ型大鼠模型局部组织氧化应激反应的干预作用

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中国实验动物学报 2020年第5期28卷 593-601页

作者：李晓洁尹诚语郑小莉聂慧敏曾丹怡王洁陈瑞香刘伯宇台燕邵晓梅刘伯一浙江中医药大学第三临床医学院浙江省针灸神经病学研究重点实验室杭州310053 浙江中医药大学基础医学院杭州310053 浙江中医药大学中医药科学研究院杭州310053

目的观察电针"足三里"、"昆仑"穴对复杂性区域疼痛综合征Ⅰ型(CRPS-Ⅰ)大鼠模型机械痛过敏的治疗作用,并研究电针对CRPS-Ⅰ大鼠模型患侧足底组织中氧化应激反应的干预作用,探讨电针镇痛作用相关机制。方法采用O型橡胶圈加压套扎踝关节... 详细信息

目的观察电针"足三里"、"昆仑"穴对复杂性区域疼痛综合征Ⅰ型(CRPS-Ⅰ)大鼠模型机械痛过敏的治疗作用,并研究电针对CRPS-Ⅰ大鼠模型患侧足底组织中氧化应激反应的干预作用,探讨电针镇痛作用相关机制。方法采用O型橡胶圈加压套扎踝关节方式进行慢性缺血痛模型(chronic post ischemic pain,CPIP)制备,以模拟CRPS-Ⅰ。将健康雄性SD大鼠随机分为假模型组(Sham组)、CPIP模型组(CPIP组)、CPIP模型+电针组(CPIP+EA组)和CPIP模型+假电针组(CPIP+Sham EA组)。于模后1 d开始,每天进行电针治疗,电针干预30 min后,采用von Frey法测定大鼠患侧足底50%机械缩足反应阈值(PWTs);采用氧化分子检测试剂盒检测大鼠患侧足底组织氧化应激相关分子表达;采用免疫荧光法检测大鼠足底组织中细胞氧化损伤标记物8-OHG表达。结果与Sham组相比,CPIP组大鼠患侧足底50%PWTs明显降低(P<0.01),且一直持续到实验观察结束,提示模型建立成功;电针干预后,与CPIP+Sham EA组相比,CPIP+EA组大鼠患侧50%PWTs显著上升(P<0.01);与Sham组相比,CPIP组大鼠患侧足底组织中超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平均显著下降,过氧化氢(H2O2)和丙二醛(MDA)含量以及8-OHG表达均显著升高(P<0.05或P<0.01);电针治疗后,与CPIP+Sham EA组相比,CPIP+EA组大鼠患侧足底组织中SOD和GSH水平均显著提升,H2O2和MDA含量以及8-OHG表达均显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论电针可显著降低CPIP模型大鼠患侧足底组织氧化应激反应水平,这一机制很可能参与了其缓解CPIP模型大鼠机械痛过敏的作用。

关键词：电针氧化应激针刺镇痛复杂性区域疼痛综合征

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哺乳动物外泌体：分离纯化、临床应用与展望

中国生物工程杂志 2024年

作者：姜姗姗尹羽琪厉芊妤张靓语杨玫王永华云南大学生命科学学院云南大学生命科学研究中心

外泌体，作为细胞分泌的纳米级细胞外小囊泡，不仅在细胞间通讯中扮演重要角色，还携带多种生物活性物质，如核酸、蛋白质和脂质等，从而在机体的生理和病理过程中发挥关键作用。由于其内生性和生物相容性，外泌体在疾病诊断、生物标志... 详细信息

外泌体，作为细胞分泌的纳米级细胞外小囊泡，不仅在细胞间通讯中扮演重要角色，还携带多种生物活性物质，如核酸、蛋白质和脂质等，从而在机体的生理和病理过程中发挥关键作用。由于其内生性和生物相容性，外泌体在疾病诊断、生物标志物的发现以及治疗领域展现出独特的优势，尤其是与合成载体如脂质体和纳米颗粒相比。然而，外泌体的分离纯化效率低和靶向性弱等技术挑战限制了其在临床应用中的发展。本文综述了外泌体的起源、分类、以及现有的分离纯化技术，并对比了各种技术的优势和局限性。此外，本文还探讨了外泌体在疾病诊断和治疗中的应用，并展望了未来技术发展和临床应用的可能方向，旨在为外泌体的功能研究和临床应用提供新的视角和策略。

关键词：外泌体外泌体分离临床诊断靶向药物递送治疗

奥替普拉改善急性痛风性关节炎小鼠模型疼痛和炎症的效应及机制研究

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中国实验动物学报 2021年第5期29卷 585-592页

作者：曾丹怡尹诚语刘伯宇聂慧敏李晓洁陈瑞香王洁李园园徐若瑶位会娜台燕邵晓梅王萍刘伯一浙江中医药大学第三临床医学院浙江省针灸神经病学研究重点实验室杭州310053 浙江中医药大学基础医学院杭州310053 浙江中医药大学中医药科学研究院杭州310053

目的建立急性痛风性关节炎(AGA)小鼠模型,观察并研究奥替普拉(Oltipraz)能否改善模型小鼠出现的关节炎症和疼痛。方法把健康C57/BL6雄性小鼠随机分为对照组(Control)、模型+溶剂组(MSU+Veh)、模型+奥替普拉高剂量组(MSU+100 mg/kg Oltip... 详细信息

目的建立急性痛风性关节炎(AGA)小鼠模型,观察并研究奥替普拉(Oltipraz)能否改善模型小鼠出现的关节炎症和疼痛。方法把健康C57/BL6雄性小鼠随机分为对照组(Control)、模型+溶剂组(MSU+Veh)、模型+奥替普拉高剂量组(MSU+100 mg/kg Oltipraz)、模型+奥替普拉低剂量组(MSU+30 mg/kg Oltipraz)以及模型+吲哚美辛组(MSU+10 mg/kg Indo)。除对照组注射磷酸盐缓冲液以外,其余各组小鼠右踝关节注射尿酸钠(MSU),制备AGA小鼠模型。模型制备成功前后,模型+奥替普拉组小鼠腹腔注射奥替普拉,模型+吲哚美辛组同一时间点腹腔注射吲哚美辛,其余组腹腔注射等量溶剂。采用游标卡尺对五组小鼠造模前后踝关节肿胀程度进行测量;用von Frey丝检测小鼠50%机械缩足反应阈值(50%PWT);病理学分析踝关节滑膜组织切片;Digi Gait成像系统检测小鼠步态,并分析造模前后步态行为学变化;氧化分子检测试剂盒检测小鼠踝关节氧化应激反应;q PCR技术检测踝关节组织炎症因子表达。结果与对照组相比,模型组小鼠踝关节明显肿胀,50%PWT显著降低(P<0.01)。病理学显示模型组小鼠踝关节滑膜组织相较于对照组出现明显炎性细胞浸润(P<0.05)。步态分析显示模型组小鼠相较对照组小鼠步幅长度显著缩短,脚爪触地面积显著减小(P<0.01)。与模型+溶剂组相比,模型+100 mg/kg奥替普拉组小鼠患侧50%PWT显著上升(P<0.01);踝关节肿胀程度显著减轻;步态相关参数出现显著改善(P<0.05);踝关节组织中氧化应激水平出现显著下降(P<0.05);炎性因子IL-1β、TNF-α表达水平也显著下降(P<0.01),其效果和吲哚美辛类似,而30 mg/kg无明显效果。结论奥替普拉可缓解AGA模型小鼠踝关节肿胀和关节疼痛,这一治疗作用很可能与其降低AGA小鼠踝关节组织中氧化应激水平,增加抗氧化物质表达并减少炎症因子表达有关。

关键词：急性痛风性关节炎氧化应激疼痛奥替普拉步态

电针干预急性痛风性关节炎小鼠NLRP3表达及镇痛作用研究

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中国疼痛医学杂志 2023年第4期29卷 249-257页

作者：位会娜曾丹怡尹诚语刘伯宇李园园聂慧敏徐若瑶张韵文台燕胡奇妙邵晓梅方剑乔刘伯一浙江中医药大学第三临床医学院浙江省针灸神经病学研究重点实验室杭州310053 浙江中医药大学中医药科学研究院杭州310053

目的:观察电针(electroacupuncture,EA)对急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型小鼠机械痛超敏的干预作用,并研究电针对模型小鼠踝关节组织中炎性小体3(NLRP3)通路的影响,探讨电针缓解AGA疼痛的相关机制。方法:将SPF级C57B... 详细信息

目的:观察电针(electroacupuncture,EA)对急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型小鼠机械痛超敏的干预作用,并研究电针对模型小鼠踝关节组织中炎性小体3(NLRP3)通路的影响,探讨电针缓解AGA疼痛的相关机制。方法:将SPF级C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组(Control)、模型组(MSU)、模型+电针组(MSU+EA)、模型+电针+溶剂组(MSU+EA+Veh)、模型+电针+尼日利亚菌素组(MSU+EA+NG),每组5只。MSU+EA+NG组于电针前半小时右踝关节局部注射尼日利亚菌素。采用游标卡尺测量小鼠患侧踝关节肿胀程度;von Frey法测定小鼠患侧足底50%机械刺激缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT);HE染色观察炎性细胞浸润;免疫印迹观察NLRP3信号通路(NLRP3、caspase-1、IL-1β)的蛋白表达。结果:与Control组相比,MSU组小鼠患侧踝关节明显肿胀,机械痛阈显著降低,NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达显著增高,HE染色显示局部有广泛炎性细胞浸润;与MSU组相比,MSU+EA组小鼠患侧踝关节机械痛阈明显升高,NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达显著下降;与MSU+EA+Veh组相比,MSU+EA+NG组小鼠患侧踝关节机械痛阈明显降低,NLRP3、caspase-1、IL-1β蛋白表达显著上升。结论:电针干预可明显改善AGA模型小鼠痛觉超敏及踝关节肿胀,这一作用可能与抑制踝关节组织中NLRP3通路有关。研究结果提示电针可用做一种缓解AGA的“绿色替代疗法”。

关键词：急性痛风性关节炎疼痛炎症电针 NLRP3

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算法资本主义：智能时代的资本主义新形态

科学学研究 2024年

作者：刘天语王硕东京大学卡维里宇宙物理学与数学研究所清华大学社会科学学院清华大学人文学院

“算法资本主义”指的是以智能算法为控制中枢的当代资本主义形态，表征着数字资本主义在新一轮科技革命下的迭代升级。与此前的资本主义形态不同，算法资本主义遵循着智能化的运作逻辑，具有跨区域、全流程、自动化和隐性支配的全新特... 详细信息

“算法资本主义”指的是以智能算法为控制中枢的当代资本主义形态，表征着数字资本主义在新一轮科技革命下的迭代升级。与此前的资本主义形态不同，算法资本主义遵循着智能化的运作逻辑，具有跨区域、全流程、自动化和隐性支配的全新特征。从核心构架来看，算法资本主义遵循着“算法-平台-数据-资本”的四元构架，其中，算法是“动力”要素，平台是“形式”要素，数据是“质料”要素，资本是“目的”要素。算法资本主义具有进步性和局限性的双重意义，带来更多流动性与社会变革的同时，更是引发了严重的负面伦理效应。算法资本主义研究在当下具有重要的理论价值和现实意义。

关键词：算法资本主义数字资本主义平台智能时代

火针疗法干预神经性皮炎随机对照研究的Meta分析

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中国现代医生 2021年第4期59卷 126-130页

作者：刘伯宇聂慧敏尹诚语李晓洁陈瑞香金婷刘伯一浙江中医药大学第三临床医学院针灸神经生物学实验室浙江省针灸神经病学研究重点实验室浙江杭州310053 浙江中医药大学附属第三医院药剂科浙江杭州310005

目的运用循证医学方法系统评价火针疗法干预神经性皮炎的临床疗效。方法计算机检索PubMed、中国生物医学文献数据库、中国知网、重庆维普、万方数据库,检索所需的随机对照试验(RCT)文献进行Meta分析。结果共纳入8篇文献,合计神经性皮炎... 详细信息

目的运用循证医学方法系统评价火针疗法干预神经性皮炎的临床疗效。方法计算机检索PubMed、中国生物医学文献数据库、中国知网、重庆维普、万方数据库,检索所需的随机对照试验(RCT)文献进行Meta分析。结果共纳入8篇文献,合计神经性皮炎病例共550例。火针疗法治疗神经性皮炎能有效提高治疗有效率(95%CI:1.89~6.20,P<0.0001),不仅火针联合药物能够有效治疗神经性皮炎(P=0.0005),单纯火针治疗也能够提高治疗有效率(P=0.03);且火针疗法有效降低患者的瘙痒评分(95%CI:-0.87~-0.10,P=0.01);火针疗法与常规药物治疗在治疗神经性皮炎过程中的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(95%CI:0.45~2.23,P=1.00);火针疗法不能降低治疗完成3个月后神经性皮炎的复发率(95%CI:0.08~1.15,P=0.08)。结论火针疗法能有效治疗神经性皮炎,提高治疗有效率,但不能降低治疗过程中不良反应的发生率及3个月后的复发率。由于纳入文献数量过少,尤其缺少高质量、多中心的文献,因此还需要进一步深入研究。

关键词：火针神经性皮炎随机对照试验 Meta分析