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三重微滴数字PCR定量检测即食米粉中致病菌方法研究

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中国食品卫生杂志 2023年第11期35卷 1571-1578页

作者：孙雪奇尹玮璐蒋佳希张明明梁美丹曾善美肖剑广州市食品检验所广东广州511400 广州知识产权保护中心广东广州510010 澳实分析检测有限公司(加拿大) 加拿大不列颠哥伦比亚省V4A1W9

目的建立三重微滴数字PCR(ddPCR)方法同时定量检测即食食品中的沙门菌、蜡样芽胞杆菌和单核细胞增生李斯特菌。方法选择以沙门菌ttrA/ttrC、蜡样芽胞杆菌essC、单核细胞增生李斯特菌侵袭相关内肽酶基因等3个单拷贝基因对应的3对引物探针... 详细信息

目的建立三重微滴数字PCR(ddPCR)方法同时定量检测即食食品中的沙门菌、蜡样芽胞杆菌和单核细胞增生李斯特菌。方法选择以沙门菌ttrA/ttrC、蜡样芽胞杆菌essC、单核细胞增生李斯特菌侵袭相关内肽酶基因等3个单拷贝基因对应的3对引物探针,采用实时荧光定量PCR验证引物/探针特异性后,建立三重ddPCR方法同时定量检测3种致病菌的拷贝数。结果该方法的线性范围分别为:沙门菌25~22687 copies/20μL;蜡样芽胞杆菌19~15620 copies/20μL;单核细胞增生李斯特菌18~23373 copies/20μL,线性相关因子r^(2)≥0.999,6个浓度3次重复测定3种菌的相对标准偏差(RSD)≤12%,重复性好,对于上述菌株的最低检出限分别为6、3和7 copies/20μL;采用已建立的ddPCR方法和平板计数方法对模拟染菌米粉样品进行检测,两种方法测定值结果RSD小于9%,结果一致性较好。结论本研究建立的三重ddPCR同时定量检测即食食品中沙门菌、蜡样芽胞杆菌和单核细胞增生李斯特菌的方法与平板计数法相比,更快速、灵敏,结果准确。

关键词：食源性致病菌沙门菌蜡样芽胞杆菌单核细胞增生李斯特菌三重微滴数字PCR 即食食品

能力验证乳粉样品中双歧杆菌计数培养基的选择探究

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食品安全导刊 2021年第22期 144-146页

作者：劳嘉倩蒋佳希尹玮璐广州市食品检验所广东广州510410

目的:探讨能力验证中双歧杆菌计数培养基的选择及注意事项。方法:依据《食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌检验》(GB 4789.34—2016)和乳粉中乳酸菌检验能力验证[ACAS-PT926(2020)]参试指导书的要求,通过采用人员比对及不同培养... 详细信息

目的:探讨能力验证中双歧杆菌计数培养基的选择及注意事项。方法:依据《食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌检验》(GB 4789.34—2016)和乳粉中乳酸菌检验能力验证[ACAS-PT926(2020)]参试指导书的要求,通过采用人员比对及不同培养基(MRS培养基、双歧杆菌培养基),比较分析双歧杆菌计数结果的差异性。结果:相同培养条件下,同一样品使用MRS培养基和双歧杆菌培养基,结果的再现性均较低,两种培养基的稳定性较好。同一样品在双歧杆菌培养基中的菌落计数均比MRS培养基高,但两者的再现性(r=0.17,r=0.21)均小于再现性限(r=0.45),表明两者的差异是可以接受的。结论:MRS培养基和双歧杆菌培养基均可作为双歧杆菌计数培养基,两者的稳定性均较好。在日常样品检验过程中,为了提高工作效率,可选用更为便捷的MRS培养基,若要尽可能多地计算样品中双歧杆菌含量,可选用BBL培养基进行培养计数。

关键词：能力验证双歧杆菌培养基

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婴幼儿乳粉叶酸含量两种测定方法的研究

轻工科技 2019年第7期35卷 14-16页

作者：张明明黄志深蒋佳希尹玮璐广州市食品检验所

目的:对比婴幼儿乳粉中叶酸含量检测的两种方法,探究其准确性及更方便快捷的检测流程。方法:分别采用GB5009.211-2014与试剂盒法测定乳粉质控样品及市售的30批次婴幼儿乳粉样品中叶酸含量。结果:国标法和试剂盒法对质控乳粉样品中叶酸... 详细信息

目的:对比婴幼儿乳粉中叶酸含量检测的两种方法,探究其准确性及更方便快捷的检测流程。方法:分别采用GB5009.211-2014与试剂盒法测定乳粉质控样品及市售的30批次婴幼儿乳粉样品中叶酸含量。结果:国标法和试剂盒法对质控乳粉样品中叶酸含量的测定值分别为147.6±5.8μg/100g、146.4±2.9μg/100g,RSD分别为3.93%和1.98%;两种方法的回收率分别为110.38%±3.39%、98.03±8.62%。对使用国标法和试剂盒法测定30批次婴幼儿乳粉样品叶酸含量的两组数据进行配对t检验,t=1.881,P=0.070,P>0.05说明两组检测结果无显著性差异。结论:国标法及试剂盒法均能对婴幼儿乳粉中叶酸含量进行有效测定且结果接近,均可作为检验方法及质控方式用于实际检验工作当中。

关键词：叶酸乳粉质控样品婴幼儿乳粉国标法试剂盒法

多重微滴数字PCR同时定量检测三种食源性致病菌DNA拷贝数

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农业生物技术学报 2022年第3期30卷 606-618页

作者：张明明肖剑林秀敏尹玮璐梁美丹周露孙雪奇广州市食品检验所广东省食品检验所

食源微生物是影响食品质量与安全的重要因素，微滴数字PCR (droplet digital PCR, ddPCR)能够对核酸进行绝对定量检测，在食源性致病菌检测中具有越来越重要的地位。为实现食源性致病菌基因组拷贝数的快速绝对定量检测，本研究从已报道... 详细信息

食源微生物是影响食品质量与安全的重要因素，微滴数字PCR (droplet digital PCR, ddPCR)能够对核酸进行绝对定量检测，在食源性致病菌检测中具有越来越重要的地位。为实现食源性致病菌基因组拷贝数的快速绝对定量检测，本研究从已报道的伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)检测引物和探针中，经Taq Man探针法qPCR特异性验证，筛选获得以ttrA/ttrC、FMN-binding glutamate synthase、invasion associated endopeptidase基因为靶标的引物和探针，并将伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌检测探针连接6-羧基荧光素(6-carboxy-fluorescein, FAM)基团、单核细胞增生李斯特氏菌检测探针连接六氯-6-甲基荧光素(hexachloro fluorescein, HEX)基团，分别构建3种目标菌株的单重ddPCR检测体系。在此基础上，通过引物和探针浓度和退火温度的优化构建可在同一反应体系中同时、快速、绝对定量检测伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌基因组拷贝数的多重ddPCR检测体系。多重ddPCR检测体系可扩增获得8 (23)个微滴簇区域，对伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌定量检测的线性范围分别为235～0.23、284～0.18、380～0.42 copies/μL；在定量检测范围内的线性相关系数R~2均大于0.999，且重复性较好，3种致病菌的多重ddPCR检测体系与单种菌的单重ddPCR定量线性范围几乎一致。本研究构建的多重ddPCR检测体系特异性强、稳定性好、定量范围广，可为食源性致病菌的无增菌绝对定量检测提供技术支持。

关键词：食源性致病菌伤寒沙门氏菌金黄色葡萄球菌单核细胞增生李斯特氏菌多重微滴数字PCR(ddPCR) 绝对定量检测

环介导等温扩增技术快速检测植物蛋白饮料中大豆成分

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食品安全质量检测学报 2021年第21期12卷 8433-8438页

作者：肖剑梁美丹孙雪奇尹玮璐林秀敏蒋佳希广州市食品检验所广州511400

目的建立环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测植物蛋白饮料中大豆成分的技术方法。方法根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和... 详细信息

目的建立环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测植物蛋白饮料中大豆成分的技术方法。方法根据大豆Lectin基因保守序列,设计大豆成分环介导等温扩增检测特异性引物和反应体系,对方法特异性、灵敏度和稳定性进行测试,并以实时荧光聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)方法为参比方法,对32种植物蛋白饮料进行检测应用验证。结果本研究建立的LAMP方法特异性强,32种植物成分中除了大豆外,其他均未发生扩增,稳定性好,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为6.05%,最低检出限为0.1%(以质量分数计)。通过参比方法验证,方法特异性和灵敏度为100%,不存在假阳性和假阴性。结论本研究建立的LAMP技术快速检测植物蛋白饮料大豆成分的方法具有操作简单、快速准确、检测成本低等优点,可为植物蛋白饮料大豆成分掺杂掺假提供一种快速检测方法。

关键词：环介导等温扩增法植物蛋白饮料大豆成分

微生物法测定婴幼儿乳粉叶酸含量的不确定度评估

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食品安全导刊 2021年第21期 124-127页

作者：肖剑梁美丹张明明尹玮璐蒋佳希广州市食品检验所广东广州510410

根据GB 5009.211—2014《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》的要求对婴幼儿乳粉中叶酸含量进行测定,依据CNAS-CL01-G003:2018、JJF1059.1—2012和GB/Z 22553—2010对影响检验结果的因素进行评估、分析。结果表明,婴幼儿乳粉样本中叶... 详细信息

根据GB 5009.211—2014《食品安全国家标准食品中叶酸的测定》的要求对婴幼儿乳粉中叶酸含量进行测定,依据CNAS-CL01-G003:2018、JJF1059.1—2012和GB/Z 22553—2010对影响检验结果的因素进行评估、分析。结果表明,婴幼儿乳粉样本中叶酸含量为(138.7±19.0) μg/100 g(P=95%,k=2)。经评估得到叶酸的不确定度主要受标准曲线拟合及标准物质称量和稀释的影响。因此,对于非生物影响可定期校准仪器设备,对于生物因素影响,则需建立详细的标准化操作流程,保证试验条件的一致性。

关键词：微生物法婴幼儿乳粉叶酸不确定度

水产品中广州管圆线虫微滴数字聚合酶链反应定量检测方法的建立

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食品安全质量检测学报 2023年第21期14卷 141-146页

作者：梁美丹雷燕陈楷黄志深曹霞飞尹玮璐孙雪奇广州市食品检验所广州511400

目的建立微滴数字聚合酶链反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速、准确定量检测水产品中广州管圆线虫的分析方法。方法选择广州管圆线虫ITS2基因序列作为靶标序列,自主设计特异性引物和探针,建立广州管圆线虫ddPC... 详细信息

目的建立微滴数字聚合酶链反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)快速、准确定量检测水产品中广州管圆线虫的分析方法。方法选择广州管圆线虫ITS2基因序列作为靶标序列,自主设计特异性引物和探针,建立广州管圆线虫ddPCR定量检测方法,通过对ddPCR反应条件的优化,确立了ddPCR最佳反应条件,从稳定性、特异性、定量限范围、定量检测低限和人工污染样品等方法,综合评价建立的广州管圆线虫ddPCR定量检测方法的效果。结果广州管圆线虫DNA质量浓度在0.320~1000.000 pg/μL的范围内,基因拷贝数与DNA浓度呈良好的线性关系,相关系数r2=1,定量检测低限为0.297拷贝/μL,人工污染样品中3次重复实验分别检出4370、4210、4310拷贝/μL。结论本研究建立的广州管圆线虫ddPCR定量检测方法特异性强、灵敏度高、稳定性好、定量范围广,为水产品中广州管圆线虫的定量检测提供新的检测手段。

关键词：广州管圆线虫微滴数字聚合酶链反应水产品定量检测

实时荧光PCR检测熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的结果分析与探讨

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轻工科技 2018年第5期34卷 3-5页

作者：陈楷蒋佳希张明明尹玮璐张彬彬肖剑广州市食品检验所广东广州510410

目的:对实时荧光PCR检测单核细胞增生李斯特氏菌假阳性结果的原因分析探讨。方法:对假阳性的样本进行传统培养法鉴定分析,将鉴定的菌落进行实时荧光PCR检测,同时对样本基质的影响和培养基本底的影响进行实时荧光PCR检测。结果:样本中的... 详细信息

目的:对实时荧光PCR检测单核细胞增生李斯特氏菌假阳性结果的原因分析探讨。方法:对假阳性的样本进行传统培养法鉴定分析,将鉴定的菌落进行实时荧光PCR检测,同时对样本基质的影响和培养基本底的影响进行实时荧光PCR检测。结果:样本中的可疑菌落、样本的基质、培养基本底对实时荧光PCR检测结果均无假阳性影响。结论:实时荧光PCR检测熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的假阳性主要原因可能是样本中存在死亡目的菌基因造成的干扰。

关键词：实时荧光PCR 单核细胞增生李斯特氏菌假阳性

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高效液相非接触电导法测定盐酸二甲双胍

中国当代医药 2016年第13期23卷 8-10页

作者：肖羽尹玮璐陈安丽陈缵光广州市药品检验所广州510160 中山大学药学院广州510006

目的建立高效液相非接触电导检测法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量的新方法。方法色谱系统采用Ucleosil C18柱（4.6×250 mm）;流动相：磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵17 g,加水1000 ml溶解,用磷酸调节p H至3.0）;流速：1.0 m... 详细信息

目的建立高效液相非接触电导检测法测定盐酸二甲双胍片中盐酸二甲双胍含量的新方法。方法色谱系统采用Ucleosil C18柱（4.6×250 mm）;流动相：磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵17 g,加水1000 ml溶解,用磷酸调节p H至3.0）;流速：1.0 ml/min;进样量：10μl;柱温：35℃。用非接触电导检测器对盐酸二甲双胍进行检测。结果盐酸二甲双胍进样量在0.10-1.04μg范围内与峰面积响应值呈良好线性关系（r=0.9960）,平均回收率（n=9）为101.0%;RSD为0.26%（n=6）。结论该方法简便、灵敏、重复性好,适用于盐酸二甲双胍的含量测定,结果满意。

关键词：高效液相非接触电导检测盐酸二甲双胍含量测定