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TBTV卫星RNA不同分离物的序列测定及系统进化分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2010年第6期25卷 797-801页

作者：尹朝先包娜冉志伟陈海如李凡云南农业大学农业生物多样性与病害控制教育部重点实验室云南昆明650201

利用RT-PCR方法对烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)卫星RNA不同分离物进行扩增和克隆测序,同时运用DNAMAN,MEGA,ClustalX等生物软件对TBTV和其它幽影病毒的卫星RNA核苷酸序列进行同源性比较,构建了幽影病毒属成员卫星RNA的... 详细信息

利用RT-PCR方法对烟草丛顶病毒(tobacco bushy top virus,TBTV)卫星RNA不同分离物进行扩增和克隆测序,同时运用DNAMAN,MEGA,ClustalX等生物软件对TBTV和其它幽影病毒的卫星RNA核苷酸序列进行同源性比较,构建了幽影病毒属成员卫星RNA的系统进化树。E结果显示:TBTV不同分离物卫星RNA的核苷酸同源性为79.2%～99.0%。它们与幽影病毒属其它成员卫星RNA的核苷酸同源性为32.5%～44.1%。通过构建幽影病毒属成员卫星RNA的系统进化树可以看出:TBTV的卫星RNA与GRV的卫星RNA亲缘关系最近,与CMoMV的亲缘关系最远。

关键词：烟草丛顶病毒幽影病毒卫星RNA 序列分析系统进化

烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用

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农业生物技术学报 2011年第2期19卷 356-362页

作者：龙亚芹王万东左瑞娟李凡尹朝先陈海如云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室云南省农业科学院热带亚热带经济作物研究所

为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)... 详细信息

为制备烟草丛顶病毒(TBTV)ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物(TBTV-BSLLi)的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a(+)中,通过热击转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(plysS),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2+亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白。用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清。DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草(Nicotiana tabacumL.)样品及传播介体的检测。本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件。

关键词：烟草丛顶病毒(TBTV) ORF3和ORF4 原核表达抗血清制备

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李坏死环斑病毒检测方法的比较研究

西南师范大学学报（自然科学版） 2008年第5期33卷 91-94页

作者：郭俊陈精兰李凡黄扬尹朝先陈海如云南农业大学农业生物多样性与病害控制教育部重点实验室昆明650201

针对感染李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)植株病毒的特异性检测,将DAS- ELISA、RT-PCR方法综合改进、优化,建立了免疫捕获反转录PCR(IC-RT-PCR)检测PNRSV的方法.该方法采用PNRSV抗体特异性免疫捕获病毒,并根据Gen... 详细信息

针对感染李坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)植株病毒的特异性检测,将DAS- ELISA、RT-PCR方法综合改进、优化,建立了免疫捕获反转录PCR(IC-RT-PCR)检测PNRSV的方法.该方法采用PNRSV抗体特异性免疫捕获病毒,并根据GenBank中PNRSV序列设计的特异性引物对PN5/PN3进行PCR扩增,得到约760 bp大小的特异性基因片段.扩增产物经克隆测序后,结果表明:产物序列与PNRSV的外壳蛋白编码基因存在94%～98%的同源性.检测广泛性以及灵敏度比较研究显示.IC-RT-PCR方法能从含量很低的受病样品中检出PNRSV,检测灵敏度与RT-PCR相近,但所检测样品的范围更广,适用于从植物各部位检测低含量的病毒.IC-RT-PCR检测灵敏度比DAS-ELISA方法高出1000倍.

关键词：月季李坏死环斑病毒检测 RT—PCR IC—RT—PCR

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烟农专业合作社建设中存在的主要问题与对策

陕西农业科学 2013年第6期59卷 211-212页

作者：尹朝先王飞肖鹏张钦松朱书龙重庆市烟草公司奉节分公司重庆奉节404699

针对烟农专业合作社发展过程中出现的资金来源依赖烟草行业程度高,烟农主体地位不突出,内部管理松散,缺少相关技术人才,风险意识欠缺等问题,结合实践摸索,提出了多渠道筹集资金,强化自主运营意识,积极引导扶持,加强技术培训,引进技术人... 详细信息

针对烟农专业合作社发展过程中出现的资金来源依赖烟草行业程度高,烟农主体地位不突出,内部管理松散,缺少相关技术人才,风险意识欠缺等问题,结合实践摸索,提出了多渠道筹集资金,强化自主运营意识,积极引导扶持,加强技术培训,引进技术人才,提升安全防范意识等建议及对策。

关键词：烟农专业合作社建设运营问题对策

重庆市奉节县烟农状况与现代职业烟农队伍建设对策

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安徽农业科学 2015年第26期43卷 309-310页

作者：尹朝先王飞陈天才耿红梅王磊重庆市烟草公司奉节分公司重庆404600

为促进重庆市烟草种植产业的可持续发展,以奉节县为例,对该县1 065户烟农进行调查获得数据,分析奉节县烟农群体的现状,探索了现代职业烟农的标准,对现代职业烟农建设提出了可行性建议。针对奉节县烟农年龄偏大、整体文化素质偏低等问题... 详细信息

为促进重庆市烟草种植产业的可持续发展,以奉节县为例,对该县1 065户烟农进行调查获得数据,分析奉节县烟农群体的现状,探索了现代职业烟农的标准,对现代职业烟农建设提出了可行性建议。针对奉节县烟农年龄偏大、整体文化素质偏低等问题,提出制定职业烟农标准、完善资格认定、加强培训扶持、创新管理等解决对策。

关键词：职业烟农烟草种植队伍建设奉节

烟草丛顶病毒云南不同分离物全基因组序列测定与分析

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云南农业大学学报（自然科学版） 2017年第3期32卷 410-420页

作者：吕婧刘芳谭冠林魏薇尹朝先马龑陈小姣和理淮陈海如李凡云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室云南昆明650201 云南农业大学教务处现代教育技术中心云南昆明650201 丽江市古城区农业局农业技术推广中心云南丽江674199

【目的】探明烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)云南不同分离物之间的遗传差异并完成系统进化分析。【方法】采用RT-PCR方法扩增获得云南不同地区10个TBTV分离物的全基因组序列。【结果】10个TBTV云南分离物的全基因组序列均... 详细信息

【目的】探明烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)云南不同分离物之间的遗传差异并完成系统进化分析。【方法】采用RT-PCR方法扩增获得云南不同地区10个TBTV分离物的全基因组序列。【结果】10个TBTV云南分离物的全基因组序列均为4 152 bp,基因组结构由4个开放阅读框(ORFs)构成,ORF2通过与ORF1发生-1位的移码(frameshift)表达融合蛋白,推测ORF1末端的GGAUUUU特征序列是确定ORF1与ORF2是否发生移码翻译的依据。各TBTV云南分离物全基因组序列的核苷酸序列同源性为84.9%~99.1%,其中来自德宏的分离物(TBTV-YDHo)变异最大。TBTV不同分离物间存在重组现象,且分离物之间亲缘关系与重组的发生有关,重组主要发生在变异较大的ORF1~ORF2区段。TBTV分离物的各区段中,ORF1和ORF1~ORF2变异最大,而ORF4和3'UTR较为保守。系统进化分析结果表明:TBTV作为幽影病毒属(Umbravirus)的成员之一,其与同属中的罂粟花叶病毒(Opium poppy mosaic virus,OPMV)亲缘关系最近,核苷酸序列同源性为61.1%~61.6%;与CMo V和CMo MV亲缘关系较远,同源性为54%~55.1%。除幽影病毒属外,TBTV与番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)其他属的病毒核苷酸序列同源性为25.1%~49.8%;Tombusviridae中Umbravirus与香石竹环斑病毒属(Dianthovirus)的RNA2亲缘关系最远,与其他病毒属成员的亲缘关系都相对较近。【结论】TBTV云南各分离物之间存在一定的分子变异,有的存在重组现象;TBTV与OPMV亲缘关系最近。

关键词：烟草丛顶病毒幽影病毒属番茄丛矮病毒科序列分析重组

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烟草抗性诱导剂及其使用技术

植物医学 2013年第3期26卷 45-48页

作者：肖鹏王振国李栋梁王飞王磊尹朝先丁伟中国烟草总公司重庆市公司奉节分公司西南大学植物保护学院

随着植物抗病诱导技术的不断发展,烟草植保提出了"保健—预警—系统控制"的新植保理念,该理念以有害生物测报预警为保障,以提高烟株自身抗逆抗病能力为核心,以化学防控为重要手段,将烟草自身抗病能力的提升作为抗病或抗逆的核心。为了... 详细信息

随着植物抗病诱导技术的不断发展,烟草植保提出了"保健—预警—系统控制"的新植保理念,该理念以有害生物测报预警为保障,以提高烟株自身抗逆抗病能力为核心,以化学防控为重要手段,将烟草自身抗病能力的提升作为抗病或抗逆的核心。为了适应农业生产发展,在烟草生产上,很多学者、专家正研究利用抗性诱导剂替代农药对烟草的保护,推动烟叶及其产品向着绿色、安全、无公害方向发展。为此,

关键词：烟草性诱导剂诱导抗性化学诱抗剂烟草普通花叶病毒烟草花叶病毒烟叶烟草生产

重庆奉节烟区烟农队伍现状分析及职业烟农培育实践探索

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中文科技期刊数据库（全文版）社会科学 2022年第3期 130-134页

作者：耿红梅陈天才尹朝先王磊王振国重庆市烟草公司奉节分公司重庆404600

烟叶是我国农业经济的重要组成部分,是偏远落后地区的主要经济支柱产业,对地区经济发展和乡村振兴作用突出。“烟农稳、则产业稳”成为烟草行业的共识,烟农是烟叶生产的主体,稳定的烟农队伍,是保证烟叶产业稳定发展的基础。本文分析了... 详细信息

烟叶是我国农业经济的重要组成部分,是偏远落后地区的主要经济支柱产业,对地区经济发展和乡村振兴作用突出。“烟农稳、则产业稳”成为烟草行业的共识,烟农是烟叶生产的主体,稳定的烟农队伍,是保证烟叶产业稳定发展的基础。本文分析了奉节烟区烟农队伍现状,从职业烟农准入条件、评定办法、分类管理3个方面详细介绍了奉节烟区职业烟农培育模式,客观展示了开展职业烟农培育以来取得的积极成效,并提出了职业烟农队伍建设的有关思考。

关键词：奉节烟区烟农现状职业烟农培育实践探索

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烟草农业机械化推广保障体系构建及其成效

中文科技期刊数据库（全文版）农业科学 2024年第1期 0130-0133页

作者：甘朝红尹翊先云南省烟草公司保山市公司腾冲分公司猴桥烟叶工作站、曲石烟叶工作站云南保山679100

本研究基于烟草农业机械化推广的背景,阐述了目前草农业机械化推广保障的现状以及取得的成效,同时分析了目前烟草农业机械化推广保障体系仍然存在的问题,最后从加强农机自动化、农机维护保养保障、建立农机标准体系以及加强烟农培训四... 详细信息

本研究基于烟草农业机械化推广的背景,阐述了目前草农业机械化推广保障的现状以及取得的成效,同时分析了目前烟草农业机械化推广保障体系仍然存在的问题,最后从加强农机自动化、农机维护保养保障、建立农机标准体系以及加强烟农培训四个角度提出了烟草农业机械化推广保障体系的优化构建路径,一方面希望丰富该领域研究成果,另一方面也希望为烟草企业以及烟草农业提供机械化推广与发展路径。

关键词：烟草农业农业机械化现代化农业保障体系