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lnc-MRGPRF-6:1对动脉粥样硬化中巨噬细胞脂质代谢的影响

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心脏杂志 2023年第5期35卷 517-522,534页

作者：尤志欢梁小洁王文平梁彩虹南京医科大学附属江宁医院心血管内科江苏南京211100 南京医科大学附属江宁医院普外科江苏南京211100 南京医科大学附属江宁医院超声科江苏南京211100

目的研究长链非编码RNA MRGPRF-6:1(lnc-MRGPRF-6:1)对动脉粥样硬化中脂质代谢影响。方法收集临床资料,通过逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定对照组(n=20)和冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary artery disease,CAD)组(n=20)血浆中lnc... 详细信息

目的研究长链非编码RNA MRGPRF-6:1(lnc-MRGPRF-6:1)对动脉粥样硬化中脂质代谢影响。方法收集临床资料,通过逆转录-聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定对照组(n=20)和冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary artery disease,CAD)组(n=20)血浆中lnc-MRGPRF-6:1的表达,通过试剂盒检测对照组和CAD组的总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,分析lnc-MRGPRF-6:1与TC、TG的相关性。构建lnc-MRGPRF-6:1敲减的THP-1源性的巨噬细胞模型,以阴性对照慢病毒感染细胞作为对照,进行油红染色,检测TC、TG、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,CCK-8检测细胞活性,流式细胞术分析细胞凋亡。结果CAD患者血浆中lnc-MRGPRF-6:1、TC、TG的表达量显著高于对照组(P<0.05),且lnc-MRGPRF-6:1的表达与TC、TG表达呈正相关。lnc-MRGPRF-6:1敲减细胞中脂质积聚减少,TC、TG、MDA、ROS含量显著下降(P<0.05),SOD的活性明显改善(P<0.05),细胞活性明显提高(P<0.05)且凋亡减少。结论lnc-MRGPRF-6:1可促进巨噬细胞中脂质积聚、脂质过氧化。

关键词： lnc-MRGPRF-6:1 动脉粥样硬化脂质代谢

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胎猪肾脏发育不同时期相关信号分子的表达

南京医科大学学报（自然科学版） 2019年第6期39卷 822-828页

作者：刘曼菱赵丽华张曼玲金永王晨宇尤志欢张红李荣凤南京医科大学江苏省异种移植重点实验室南京医科大学心血管病靶向干预研究重点实验室南京医科大学心血管病转化医学协同创新中心江苏南京211166

目的:明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法:收集不同时期(妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d)胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western b... 详细信息

目的:明确不同时期胎猪的肾脏发育情况,并研究胎猪肾脏发育相关信号分子的表达。方法:收集不同时期(妊娠21.5、27.5、35.0、45.0、75.0及110.0 d)胎猪肾脏组织,应用HE法观察不同时期胎猪肾脏的组织结构。通过实时荧光定量PCR和Western blot分别检测肾脏发育相关信号分子(Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4)的mRNA和蛋白表达水平,并通过免疫组织化学检测Pax2在不同时期胎猪肾脏的表达定位情况。结果:27.5 d胎猪的后肾已经开始发育;35 d早期肾小体已经出现,肾小管也开始发育;45 d观察到近皮质不成熟的肾小体和近髓质成熟的肾小体;75 d肾单位数目显著增加,观察到肾椎体、肾乳头和肾盂;110d肾脏基本发育成熟,皮髓质分界明显,仍有新的肾单位产生。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4在胎猪75d的肾脏中mRNA和蛋白表达量高于35 d。Pax2广泛表达于输尿管芽、后肾间充质、帽状间充质、肾小囊体、逗号形体、S形体以及肾小管,并在后肾发育过程中持续表达。结论:27.5 d时胎猪后肾已经开始发育,110 d基本发育成熟。Pax2、Pax8、Six2、Six1、Sall1和Bmp4等信号分子在胎猪肾脏发育过程中均有不同程度表达,其中Pax2可能是胎猪肾脏发育的关键调控分子。

关键词：肾脏发育 Pax2 猪

生长因子对猪卵母细胞成熟及孤雌胚胎发育的影响

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内蒙古大学学报（自然科学版） 2019年第4期50卷 397-403页

作者：张曼玲金永赵丽华王晨宇刘曼菱张红尤志欢李荣凤南京医科大学江苏省异种移植重点实验室南京211166 内蒙古大学生命科学学院蒙古高原动物遗传资源研究中心呼和浩特010070

主要探讨了三种生长因子对猪卵母细胞成熟及孤雌胚胎发育及多能基因表达的影响,结果表明:成熟液中添加生长因子后可显著提高卵母细胞成熟率;成熟液和发育液中都添加生长因子后胚胎卵裂率、囊胚率及胚胎质量均显著升高;添加生长因子可极... 详细信息

主要探讨了三种生长因子对猪卵母细胞成熟及孤雌胚胎发育及多能基因表达的影响,结果表明:成熟液中添加生长因子后可显著提高卵母细胞成熟率;成熟液和发育液中都添加生长因子后胚胎卵裂率、囊胚率及胚胎质量均显著升高;添加生长因子可极显著提高孤雌囊胚中多能基因的表达.本研究为提高猪卵母细胞成熟及胚胎早期发育奠定了基础,进而为获得更利于分离培养猪胚胎干细胞系的囊胚材料提供了参考.

关键词：生长因子猪卵母细胞孤雌发育

CRISPR/Cas9介导的猪Six1和Six4基因敲除细胞系的建立

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南京医科大学学报（自然科学版） 2018年第2期38卷 143-148页

作者：王俊政李艳如赵丽华刘曼菱张曼玲金永陈俏羽王晨宇尤志欢李荣凤南京医科大学江苏省异种移植重点实验室江苏南京211166

目的:利用干细胞囊胚互补技术再生同种或异种动物器官已得到验证,其重要的前提是需要构建出相应的器官缺失动物模型。本文拟通过CRISPR/Cas9基因编辑技术建立猪Six1单基因和Six1/Six4双基因敲除猪细胞系,为构建肾脏发育缺陷和缺失猪模... 详细信息

目的:利用干细胞囊胚互补技术再生同种或异种动物器官已得到验证,其重要的前提是需要构建出相应的器官缺失动物模型。本文拟通过CRISPR/Cas9基因编辑技术建立猪Six1单基因和Six1/Six4双基因敲除猪细胞系,为构建肾脏发育缺陷和缺失猪模型奠定重要的研究基础。方法:选取猪Six1基因和Six4基因第一外显子为敲除靶点,分别设计并合成单导向RNA(single guide RNA,sg RNA),将其插入含有Cas9骨架的PX330质粒,分别构建Six1基因和Six4基因敲除打靶载体PX330-sg RNA1和PX330-sg RNA4;用T7EN1酶验证打靶载体敲除效率后,将高效打靶载体与含G418抗性的质粒(p CMV-td Tomato)共转染原代猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)中,并通过药物筛选获得单克隆细胞群落,随后对单克隆细胞进行基因型鉴定。结果:分别成功构建Six1和Six4基因的Cas9/sg RNA表达载体。转染Six1基因打靶载体经药物筛选后,利用PCR方法鉴定所获得的Six1基因敲除单克隆细胞系48个,其中Six1-/-细胞系21个。通过同样方法同时转染Six1基因和Six4基因打靶载体,经药物筛选后共获得44个单克隆细胞系,其中Six1-/-Six4-/-细胞系为13个。结论:通过CRISPR/Cas9基因编辑技术可高效获得Six1单基因敲除细胞系和Six1/Six4双基因敲除细胞系,为构建肾脏发育缺陷猪动物模型提供了基础,并有助于研究Six1和Six4基因在猪肾脏发育中的功能。

关键词：猪 CRISPR/Cas9 Six1基因敲除细胞系 Six1/Six4基因敲除细胞系

miRNA-205过表达载体的构建及其对猪诱导性多能干细胞建系的作用

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南京医科大学学报（自然科学版） 2018年第6期38卷 713-720页

作者：陈俏羽赵丽华陈袁张曼玲侯道荣姜海滨王俊政刘曼菱王晨宇尤志欢李荣凤南京医科大学江苏省异种移植重点实验室江苏南京211166

目的:构建miRNA-205过表达载体并研究miRNA-205对猪诱导多能干细胞系建立的影响。方法:对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪内细胞团细胞及猪胎儿成纤维细胞三者之间进行miRNA表达谱的分析比较,利用PCR扩增miRNA-205前体序列,并... 详细信息

目的:构建miRNA-205过表达载体并研究miRNA-205对猪诱导多能干细胞系建立的影响。方法:对本实验室已建系的猪primed胚胎干细胞、猪内细胞团细胞及猪胎儿成纤维细胞三者之间进行miRNA表达谱的分析比较,利用PCR扩增miRNA-205前体序列,并将其克隆于基础表达载体p CAGDNA3-h Fat1,构建过表达载体p CAG-miR205。使用脂质体转染技术将该载体转染到已转基因修饰的猪胎儿成纤维细胞(含有鼠源干细胞多能性转录因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc)。利用干细胞培养液诱导培养建立猪诱导性多能干细胞系。通过实时荧光定量PCR检测转染前后细胞内miRNA-205的表达情况,比较分析miRNA-205对猪诱导性多能干细胞的建系效率的影响。结果:成功构建了p CAG-miR205过表达载体;相较于未转染细胞,转染该载体细胞的miRNA-205表达量显著升高(P<0.01);利用干细胞培养液诱导后培养转染组的诱导性多能干细胞克隆长出率高于未转染细胞组。结论:研究结果表明在细胞水平上过表达micro RNA-205,可提高猪诱导性多能干细胞建系效率;已构建的miRNA-205过表达载体将有助于在后续研究中建立稳定表达miRNA-205的细胞系,为进一步深入研究miRNA-205在干细胞重编程和多能性维持中的作用机制打下基础。

关键词：猪 miRNA-205 诱导多能干细胞

猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞体外诱导分化

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南京医科大学学报（自然科学版） 2019年第6期39卷 829-834页

作者：王晨宇张曼玲姜海滨金永赵丽华刘曼菱陈俏羽王俊政尤志欢张红李荣凤南京医科大学江苏省异种移植重点实验室

目的:将猪naive-like胚胎干细胞体外定向诱导分化为神经细胞,为猪多能干细胞诱导神经分化方法的建立提供参考。方法:利用小分子化合物β-巯基乙醇、B-27、肝素等组成的神经诱导培养液,采用直接分化法,分化得到神经样细胞,对其进行神经... 详细信息

目的:将猪naive-like胚胎干细胞体外定向诱导分化为神经细胞,为猪多能干细胞诱导神经分化方法的建立提供参考。方法:利用小分子化合物β-巯基乙醇、B-27、肝素等组成的神经诱导培养液,采用直接分化法,分化得到神经样细胞,对其进行神经特异性基因表达鉴定,同时检测分化后的细胞是否已经丧失多能性。结果:分化所得到的神经细胞具有明显的神经细胞结构特征,RT-PCR和免疫荧光结果显示分化后的神经细胞表达多种神经细胞特异性基因,qPCR结果显示分化后多能因子的表达显著降低,神经特异性基因表达显著升高,免疫荧光结果经统计分析后显示,低分子量神经微丝蛋白(light neurofilament protein,NF-L)阳性细胞率可达79%。结论:成功实现了体外直接诱导猪naive-like胚胎干细胞向神经细胞分化,为神经系统疾病修复与治疗研究奠定了基础。

关键词：猪胚胎干细胞神经细胞小分子诱导分化

跨文化流动经历与家庭储蓄率——基于“南稻北麦”视角的研究

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数量经济技术经济研究 2025年

作者：巩阅瑄王河欢丁从明李丁西南财经大学公共管理学院成都中医药大学马克思主义学院重庆大学公共管理学院

中国文明的形成与发展，得益于中国各区域文明的接触、碰撞、组合与变奏，南北方人口的流动承载着其中最重要的部分，而南北方文化的交流与融合不仅促成了文化中新特征的出现，也保留了各自文化中的部分传统特质。本文聚焦于跨南北流动... 详细信息

中国文明的形成与发展，得益于中国各区域文明的接触、碰撞、组合与变奏，南北方人口的流动承载着其中最重要的部分，而南北方文化的交流与融合不仅促成了文化中新特征的出现，也保留了各自文化中的部分传统特质。本文聚焦于跨南北流动经历与家庭储蓄率，旨在突破流动人口仅仅带来经济结局的刻板印象，揭示流动人口背后的文化融合现象。本文利用CHFS数据，以北方家庭为研究样本，基于“南稻北麦”视角实证分析了南方流动经历对家庭储蓄率的影响，以期捕捉到经济动因背后的文化影响。研究发现：拥有南方流动经历的北方家庭较其他北方家庭的储蓄率显著低5.2个百分点，呈现更高的消费倾向。机制分析显示，曾有南方流动经历的北方家庭表现出与南方家庭相似的集体主义倾向，促使风险偏好趋同，由此导致家庭储蓄率降低。若进一步打破人口跨域流动壁垒，促进南北文化交融，将有助于优化家庭储蓄决策、激发消费活力，强化中华民族集体主义价值观。

关键词：储蓄率人口流动文化融合南稻北麦集体主义

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虑及时变时滞的伺服电机传动系统稳定性分析

电子测量技术 2025年

作者：陈子欢周占民王鑫于齐李旭中国科学院长春光学精密机械与物理研究所大连理工大学机械工程学院

针对伺服电机传动系统建模过程对时滞的考虑不够充分、控制增益的整定缺乏以系统稳定为前提给出的分析、系统稳定判据保守性相对较高的问题，本文提出了一个具有更低保守性的时滞相关稳定判据。首先在惯量结构模型考虑时变时滞并通过设... 详细信息

针对伺服电机传动系统建模过程对时滞的考虑不够充分、控制增益的整定缺乏以系统稳定为前提给出的分析、系统稳定判据保守性相对较高的问题，本文提出了一个具有更低保守性的时滞相关稳定判据。首先在惯量结构模型考虑时变时滞并通过设计相应的控制器建立了时滞闭环系统状态空间方程，然后利用Lyapunov泛函分析法结合自由权矩阵、时滞分割、积分不等式等技术以降低稳定判据的保守性。通过运行MATLAB程序得出了由该稳定判据保证系统稳定的控制器增益适用时滞范围，并得出本文判据使系统稳定的最大时滞上界提高了46.33%，验证了本文判据具有更低的保守性。本文的稳定性分析研究为更复杂的伺服电机传动系统分析与控制提供理论参考。

关键词：稳定性分析 Lyapunov-Krasovskii泛函伺服电机传动系统时变时滞状态空间

制造业企业增值税优惠政策利用策略与税务合规性分析

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知识经济 2025年第3期 71-73页

作者：明欢成都国光电气股份有限公司四川成都610000

文章基于制造业企业的增值税优惠政策,探讨了制造业企业如何有效利用增值税优惠政策,通过强调政策学习的重要性,提出通过调整生产与经营策略、加强财务管理与税务筹划、推进信息化建设等举措,以最大化政策效益。文章分析了税务合规性对... 详细信息

文章基于制造业企业的增值税优惠政策,探讨了制造业企业如何有效利用增值税优惠政策,通过强调政策学习的重要性,提出通过调整生产与经营策略、加强财务管理与税务筹划、推进信息化建设等举措,以最大化政策效益。文章分析了税务合规性对于制造业企业的重要性,明确了税务合规性要求,识别了潜在风险,并探讨了建立税务合规性管理体系的策略。文章还阐述了增值税优惠政策利用与税务合规性之间的协同作用,提出了实现两者协同发展的具体路径与策略,为制造业企业合理利用增值税优惠政策、加强税务合规性管理提供参考。

关键词：制造业企业增值税优惠政策税务合规性利用策略协同发展