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表皮细胞悬液与微粒皮联合修复深度创面的基础研究

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表皮细胞悬液与微粒皮联合修复深度创面的基础研究

作者：尚玉茹中国人民解放军医学院

学位级别：硕士

目的研究自体表皮细胞悬液与自体微粒皮联合修复深度创面的效果，为特大面积深度烧伤创面修复提供实验基础。方法1.大鼠表皮细胞分离培养与基因标记（1）用1.25g/L中性蛋白酶消化大鼠背部皮肤，分离表皮，2.5g/L胰蛋白酶消化表皮，体外... 详细信息

目的研究自体表皮细胞悬液与自体微粒皮联合修复深度创面的效果，为特大面积深度烧伤创面修复提供实验基础。方法1.大鼠表皮细胞分离培养与基因标记（1）用1.25g/L中性蛋白酶消化大鼠背部皮肤，分离表皮，2.5g/L胰蛋白酶消化表皮，体外分离培养原代表皮细胞（epidermis cells，ECs），免疫组织化学法检测细胞的抗原表达，将原代细胞随机分为两组，改良组和传统组，改良组细胞采用低浓度(0.25g/L胰蛋白酶)消化液消化传代，传统组采用传统浓度（2.5g/L胰蛋白酶）消化液消化传代，锥虫蓝染色法计数细胞存活率，噻唑蓝比色法检测贴壁细胞数量（以吸光度值表示）。倒置相差显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞周期，β-半乳糖苷酶染色法计数衰老细胞比率。（2）利用含RFP基因的慢病毒，以不同感染复数（MOI值分别为0,5,20,50,100）转染ECs，荧光显微镜下观察RFP的表达情况，流式细胞仪检测细胞转染效率，MTT法评价转染慢病毒对ECs增殖的影响，确定最佳病毒感染复数。2.动物模型建立与创面修复（1）动物模型建立：16只成年SD大鼠随机分为2组，模型组和对照组。每组8只。将大鼠麻醉，刮毛、消毒后，在背部量取3.3cm×3cm(纵长横短)皮肤范围，切除标记范围内的全层皮肤至深筋膜层，形成全层皮肤缺损创面。模型组创面周围缝合3.3cm×3cm钢丝圈，对照组不作处理，两组大鼠创面交叉移植同种异体中厚皮，纱布打包固定。术后7d拆除敷料，并于术后7d、14d、21d使用数码相机照相，采用图像分析软件(Image J,V1.30)计算两组大鼠创面收缩率。（2）创面修复：50只成年SD大鼠随机分成5组，微粒皮（1:10）移植组，微粒皮（1:20）+细胞悬液移植组、微粒皮（1:20）移植组、细胞悬液移植组、空白组对照组，每组10只。制作大鼠全层皮肤缺损创面抗挛缩模型，将各组移植物分别移植到相应创面，覆盖异体中厚皮（异体皮来自25只成年Wistar大鼠）。观察大张异体皮成活情况及脱落时间，用数码照相结合图像分析软件(Image J,V1.30)测量创面愈合率。于术后14d、21d取组织块以甲醛固定，制作病理切片，HE染色，免疫组织化学染色检测Ⅳ型胶原与层黏连蛋白表达。微粒皮（1:20）+细胞悬液移植组大鼠，表皮细胞荧光标记后移植，使用小动物活体成像技术检测创面荧光表达。结果1.大鼠表皮细胞分离培养与基因标记（1）消化培养得到的细胞经免疫组织化学染色，表面表达CK19和CK14等表皮细胞标志抗原，证实分离出的细胞为表皮细胞。首次传代细胞改良组细胞存活率[（94.56±1.74）%]显著高于传统组[（66.22±2.57）%,t=15.815, P<0.05];传代细胞接种1h、12h、24h，改良组贴壁细胞吸光光度值（0.205±0.015,0.225±0.014,0.265±0.021）均显著高于传统组（0.176±0.015,0.196±0.011,0.221±0.019, t值分别为2.947,3.517,3.476, P值均小于0.05）。细胞经5次传代后，镜下观察改良组细胞为圆形或小的多角形，或呈鹅卵石样铺满瓶底;传统组细胞胞体变大，增殖缓慢，呈片状覆盖瓶底;改良组S+G2/M期细胞所占百分率[(30.55±2.29)%]显著高于传统组[(17.01±5.58)%, t=3.890, P<0.05];改良组衰老细胞比率[（10.87±2.01）%]显著低于传统组[（75.93±4.11）%, t=24.624, P<0.05]。（2）显微镜下观察细胞发现，转染24h后有微弱荧光，48h后荧光增强，72h后荧光更强。当以MOI=5,20,50,100转染细胞72h后，RFP阳性表达率分别为1.68%,17.15%,47.53%,69.90%;病毒转染72h后，MOI=0,5,20,50,100各组细胞吸光度值分别为1.14±0.143,1.05±0.073,1.02±0.090,1.03±0.141,0.912±0.102，组间比较差异有统计学意义（F=3.022，P<0.05），两两比较MOI=0未转染组和MOI=5组细胞吸光度值高于MOI=100组（P<0.05）。2.动物模型建立与创面修复（1）动物模型建立：术后7d、14d、21d，模型组创面收缩率分别为（1.3±0.5）%,（1.9±0.9）%,（2.6±1.3）%均显著低于（8.6±1.2）%,（37.4±2.6）%,（65.0±3.7）%（t值分别为15.911,36.581,44.847，P均小于0.05）。（2）创面修复：①大体观察：术后5d，

关键词：皮肤缺损表皮细胞微粒皮创面愈合

低浓度胰蛋白酶消化法优化大鼠角质形成细胞的传代培养

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中华烧伤杂志 2014年第2期30卷 179-181页

作者：尚玉茹申传安柴家科马丽李大伟李龙珠尹凯解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的了解通过改良传代技术是否可获取高增殖活性的大鼠KC，为体外研究提供种子细胞。方法将从3只清洁级新生SD大鼠背部皮肤中分离、培养的原代KC按随机数字表法分为改良组和传统组，改良组采用0．25g／L胰蛋白酶联合0．4g／L乙二胺四乙... 详细信息

目的了解通过改良传代技术是否可获取高增殖活性的大鼠KC，为体外研究提供种子细胞。方法将从3只清洁级新生SD大鼠背部皮肤中分离、培养的原代KC按随机数字表法分为改良组和传统组，改良组采用0．25g／L胰蛋白酶联合0．4g／L乙二胺四乙酸消化传代，传统组采用2．5g／L胰蛋白酶结合0．4g／L乙二胺四乙酸消化传代。收集2组原代细胞及传代细胞于倒置相差显微镜下进行形态学观察。取部分第1代细胞，应用锥虫蓝染色法观察细胞存活情况并计算存活率（样本数为3）；另取第1代细胞培养1、12、24h，噻唑蓝比色法进行细胞黏附实验（以吸光度值表示黏附细胞数量，每时相点样本数为6）。取第5代细胞，采用流式细胞仪检测细胞周期，B半乳糖苷酶染色法计算衰老细胞百分比。对数据行LSD-t检验。结果改良组原代细胞、第5代细胞及第18代细胞形态类似，呈圆形或小的多角形，或呈鹅卵石样；传统组原代细胞形态与改良组类似，第5代细胞胞体变大，增殖缓慢，呈片状覆盖，无法再继续传代。改良组细胞存活率为（94．6±1．7）％，显著高于传统组[（66．2±2．6）％，t=15．815，P〈0．05]。培养1、12、24h，改良组黏附细胞数量分别为0．205±0．015、0．225±0．014、0．265±0．021，均显著多于传统组（0．176±0．015、0．196±0．011、0．221±0．019，t值分别为2．947、3．517、3．476，P值均小于0．05）。改良组（S＋G2／M）期细胞所占比例[（30．6±2．3）％]显著高于传统组[（17．0±5．6）％，t=3．890，P〈0．05]。改良组衰老细胞百分比[（10．9±2．0）％]显著低于传统组[（75．9±4．1）％，t=24．624，P〈0．05]。结论低浓度胰蛋白酶消化法能减轻细胞损伤、提高细胞活性、增加传代次数，为实验研究创造良好条件。

关键词：胰蛋白酶连续传代大鼠角质形成细胞

自体表皮细胞悬液移植修复全层皮肤缺损创面的动物实验研究

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中国修复重建外科杂志 2016年第2期30卷 219-223页

作者：尹凯申传安马丽尚玉茹李大伟李龙珠赵东旭程文凤解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的探讨自体表皮细胞悬液移植技术用于全层皮肤缺损创面修复的适宜密度。方法取健康清洁级成年SD大鼠40只,雌雄不限,体质量210~230 g;根据细胞移植密度不同,随机分为高、中、低细胞密度及空白组(分别为A、B、C、D组,n=10)。取大鼠背部... 详细信息

目的探讨自体表皮细胞悬液移植技术用于全层皮肤缺损创面修复的适宜密度。方法取健康清洁级成年SD大鼠40只,雌雄不限,体质量210~230 g;根据细胞移植密度不同,随机分为高、中、低细胞密度及空白组(分别为A、B、C、D组,n=10)。取大鼠背部皮肤培养表皮细胞,并制作大鼠全层皮肤缺损创面抗挛缩模型。其中A、B、C组分别将0.2 mL密度为1×10~6、1×10~5、1×10~4个/cm^2的自体表皮细胞悬液移植至创面处,D组给予等量限制性角质形成细胞无血清培养基;取成年Wistar大鼠背部皮肤制备同种异体皮,覆盖各组创面。术后观察大鼠存活情况,于术后7、14、21 d大体观察同种异体皮成活、脱落及创面愈合情况,同种异体皮脱落后计算创面愈合率;21 d时取材行组织学及免疫组织化学染色,观察创面修复情况。结果术后大鼠均存活至实验完成。各组大鼠同种异体皮随时间延长逐渐成活,干燥并开始脱痂;至21 d同种异体皮基本脱落后A、B组创面可见成片上皮,C组创面可见少量菲薄上皮,D组创面无上皮形成。术后21 d同种异体皮脱落后,A、B、C、D组创面愈合率分别为62.9%±9.6%、64.2%±9.1%、38.5%±5.7%、22.7%±5.5%,A、B组创面愈合率显著高于C、D组(P0.05)。组织学观察示,A、B、C组愈合的创面上皮层可见鳞状上皮细胞,A、B组表皮分层明显,C组表皮层薄、可见炎性细胞浸润,D组为肉芽组织。免疫组织化学染色观察示,A、B、C组表皮-真皮连接层Ⅳ型胶原和Ⅶ型胶原表达呈阳性,D组无表皮层呈阴性;A、B组Ⅳ、Ⅶ型胶原表达阳性细胞百分比显著高于C组(P0.05)。结论自体表皮细胞悬液移植技术在大鼠全层皮肤缺损创面修复中可重构皮肤,1.0×10~5个/mL为创面修复的适宜移植密度。

关键词：细胞移植表皮细胞皮肤移植创面修复大鼠

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微粒皮移植技术的研究进展

微粒皮移植技术的研究进展

中华医学会烧伤外科学分会2012年学术年会

作者：尚玉茹解放军总医院第一附属医院烧伤整形科

＜正＞大面积深度烧伤后早期切除焦痂,覆盖创面,可提高患者的生存率,但大面积深度烧伤后自体皮源不足,如何以有限的自体皮永久性覆盖创面一直是临床面临的难题。微粒皮移植术为此提供了一个可以选择的方法。微粒皮移植术是于上世纪80年... 详细信息

＜正＞大面积深度烧伤后早期切除焦痂,覆盖创面,可提高患者的生存率,但大面积深度烧伤后自体皮源不足,如何以有限的自体皮永久性覆盖创面一直是临床面临的难题。微粒皮移植术为此提供了一个可以选择的方法。微粒皮移植术是于上世纪80年代由我国张

关键词：烧伤微粒皮皮肤移植

来源： cnki会议评论

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我国烧伤流行病学研究文献计量学分析

中华烧伤杂志 2017年第4期33卷 233-237页

作者：程文凤申传安赵东旭李大伟尚玉茹解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的分析我国烧伤流行病学研究现状并探讨相关策略。方法检索《PubMed》《Embase》《中国生物医学文献数据库》《中国期刊全文数据库》收录的、2005年1月—2015年12月发表的有关我国烧伤流行病学的中英文回顾性、横断面研究文献。统... 详细信息

目的分析我国烧伤流行病学研究现状并探讨相关策略。方法检索《PubMed》《Embase》《中国生物医学文献数据库》《中国期刊全文数据库》收录的、2005年1月—2015年12月发表的有关我国烧伤流行病学的中英文回顾性、横断面研究文献。统计所有文献发表年份、期刊分布、参与研究单位数、第1作者单位及其所在地、研究对象收治时间跨度及年龄，另对我国小儿烧伤流行病学研究英文文献中小儿年龄范围的限定、年龄分组方法进行统计。对数据进行描述性统计分析。结果共检索出符合入选标准的文献256篇，其中中文文献214篇，占83.59%；英文文献42篇，占16.41%。回顾性研究242篇，占94.53%；横断面研究14篇，占5.47%。11年间发表文献数总体较为波动。文献发表在130种期刊中，其中42篇英文文献发表在《科学引文索引扩展版收录期刊》中，占16.41%；116篇中文文献发表在《中国科技论文统计源期刊》中，占45.31%。单中心研究文献215篇，占83.98%；由3家及以上单位参与进行的多中心研究仅29篇，占11.33%。文献第1作者单位共161家，其中发表文献数居前10位的单位共发表文献58篇，占22.66%。我国大陆地区31个省、自治区、直辖市以及台湾省、香港特别行政区都有烧伤流行病学研究文献发表，其中上海市最多，共24篇，占9.38%。文献研究对象收治时间跨度为3个月～47年，其中3个月～5年的文献120篇，占46.87%；6～10年的文献79篇，占30.86%；大于10年的文献57篇，占22.27%。按文献研究对象年龄划分，123篇文献为小儿烧伤流行病学研究，占48.05%；仅16篇为老年烧伤流行病学研究，占6.25%。11篇小儿烧伤流行病学研究英文文献对小儿年龄范围没有一致的限定标准，对患儿年龄的分组也无统一方法。结论我国烧伤流行病学研究已在全国普遍开展，但组织相关研究单位不够多且多中心研究较少；文献质量有待进一步提升；老年烧伤流行病学研究相对缺乏，重视不够；烧伤流行病学研究在时间上缺乏规律性或连续性。亟待制订统一的烧伤流行病学研究项目的划分方法，以规范相关研究的开展。

关键词：烧伤流行病学文献计量学

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严重烫伤大鼠胰岛β细胞结构和功能的变化

中华烧伤杂志 2013年第4期29卷 355-359页

作者：李大伟申传安柴家科马丽尚玉茹李龙珠解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的观察严重烫伤大鼠胰岛B细胞的结构和功能变化，探讨与糖代谢障碍之间的关系。方法将72只Wistar大鼠按随机数字表法分为烫伤组和假伤组，每组36只。将烫伤组大鼠背部浸于94℃热水12s、腹部6S，造成50％TBSAⅢ度烫伤；假伤组大鼠背部... 详细信息

目的观察严重烫伤大鼠胰岛B细胞的结构和功能变化，探讨与糖代谢障碍之间的关系。方法将72只Wistar大鼠按随机数字表法分为烫伤组和假伤组，每组36只。将烫伤组大鼠背部浸于94℃热水12s、腹部6S，造成50％TBSAⅢ度烫伤；假伤组大鼠背部、腹部浸于37℃温水模拟烫伤。伤后6h及3、7d，各组分别取12只大鼠行腹腔葡萄糖耐量试验（IPGTT），检测血糖水平并计算血糖曲线下面积（AUC）。IPGTT结束后，分离大鼠胰腺组织行胰岛素免疫荧光和细胞核染色，观测胰岛内胰岛素阳性表达面积比、13细胞面积和数量（简称“胰岛内3项指标”）。对数据行重复测量方差分析及析因设计方差分析，两两比较采用LSD法。结果（1）伤后6h和3d，烫伤组大鼠葡萄糖注射前后血糖水平总体及各时相点血糖水平均显著高于假伤组（处理因素主效应，值分别为79．372、32．962，P值均小于0．001；两两比较，P〈0．05或P〈0．01）。伤后7d，2组大鼠葡萄糖注射前后血糖水平总体及各时相点血糖水平均相近（P值均大于0．05）。（2）烫伤组大鼠血糖AUC总体明显高于假伤组（处理因素主效应，F：337．87，P〈0．01）。伤后6h及3d，与假伤组[（1019±32）、（1003±72）mmol·min·L-1]比较，烫伤组大鼠血糖AUC均有显著升高[（1501±163）、（1132±67）mmol·min·L-1，P值均小于0．001]。伤后7d，2组大鼠的血糖AUC相近（P〉0．05）。烫伤组大鼠伤后3、7d血糖AUC均显著低于伤后6h（P值均小于0．001）。（3）烫伤组大鼠胰岛内3项指标水平总体均明显低于假伤组（处理因素主效应，值分别为135．17、24．75和39．35，P值均小于0．01）。2组大鼠伤后6h胰岛内3项指标水平无明显差异（P值均大于0．05），而烫伤组大鼠伤后3、7d胰岛内3项指标水平[0．47±0．05、0．51±0。07，（0．032±0．008）、（0．037±0．008）mm2，（303±64）、（341±58）个]显著低于假伤组[0。63±0．05、0．64±0．06，（0．043±0．011）、（0．044±0．012）mm2，（398±112）、（387±90）个，P〈0．05或P〈0．01]。烫伤组大鼠伤后3、7d胰岛内3项指标水平均显著低于伤后6h（P〈0．05或P〈0．01）。结论大鼠严重烫伤后，胰岛B细胞数量减少、胰岛素分泌功能下降，可能是以高血糖为主要表现的糖代谢障碍发生的重要原因之一。

关键词：烧伤胰腺糖代谢高糖血症

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织针挽脚断裂原因初探

纺织器材 1992年第3期19卷 35-36页

作者：尚玉茹林吉曙河南第二纺织器材厂成都纺织工业专科学校

本文对经过拉拔、切断和退火后的70钢钢丝横机针针坯在挽脚工序出现的裂纹和断裂现象进行了初步分析。试验结果表明,针坯在挽脚过程中出现的断裂现象主要与钢材中非均匀分布的氧化铁夹杂物有关。

关键词：横机织针挽脚断裂防止

腺病毒介导的人表皮生长因子基因转染对人表皮细胞生物学特性的影响

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中华烧伤杂志 2016年第5期32卷 305-311页

作者：尹凯马丽申传安尚玉茹李大伟李龙珠赵东旭程文凤解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的观察腺病毒介导的人EGF（Ad-hEGF）基因转染人表皮细胞的合适条件及转染对该细胞生物学特性的影响。方法取包皮环切术后弃用的新鲜人体包皮组织，通过酶消化法分离人表皮细胞，传代培养，采用第3代细胞进行以下实验。（1）按随机数... 详细信息

目的观察腺病毒介导的人EGF（Ad-hEGF）基因转染人表皮细胞的合适条件及转染对该细胞生物学特性的影响。方法取包皮环切术后弃用的新鲜人体包皮组织，通过酶消化法分离人表皮细胞，传代培养，采用第3代细胞进行以下实验。（1）按随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为未转染组及5、20、50、100、150、200倍转染组，每组3孔。未转染组不转染Ad-hEGF基因，后6组分别按感染复数（MOI）5、20、50、100、150、200转染Ad-hEGF基因。转染24、48、72h，倒置相差显做镜下观察细胞形态，倒置荧光显微镜下观察细胞绿色荧光蛋白表达。（2）另取3个批次细胞，分别同前分组处理，分别于转染24、48、72h，流式细胞仪检测Ad-hEGF基因转染率（样本数为3），ELISA法检测收集的细胞培养上清液中EGF质量浓度（样本数为6），细胞计数试剂盒8（CCK8）及酶标仪检测细胞增殖活性（样本数为6）。（3）另取细胞分为未转染组和转染组，每组6孔。未转染组用未转染细胞的细胞培养上清液孵育，转染组用以最佳MOI（50）转染Ad-hEGF基因细胞的细胞培养上清液孵育，分别于孵育1、3、5d，CCK8及酶标仪检测细胞分泌的EGF生物活性。（4）另取细胞分为未转染组和转染组，每组12孔。未转染组不转染Ad-hEGF基因，转染组以最佳MOI（50）转染Ad-hEGF基因。转染24h，免疫荧光染色法检测细胞角蛋白14（CK14）、CK19表达。（5）另取细胞，同（4）分组（每组6孔）处理，于划痕后0（即刻）、12、24、48h，倒置相差显微镜下观测细胞迁移距离。对数据行析因设计方差分析、重复测量方差分析、LSD检验。结果（1）转染24、48h，各转染组细胞形态与未转染组比较，无明显改变；转染72h，200倍转染组的细胞碎片较未转染组明显增多。转染24、48、72h，未转染组细胞未见绿色荧光蛋白表达，各转染组绿色荧光蛋白阳性细胞数随转染时间延长逐渐增多。（2）各转染组细胞***基因转染率随转染时间延长逐渐增高。转染72h，50～200倍转染组细胞Ad-hEGF基因转染率均大于90％；未转染组及5、20倍转染组细胞Ad-hEGF基因转染率则分别为（0．51±0．20）％、（62．44±6．23）％、（75．00±5．43）％，明显低于50倍转染组的（93．12±2．55）％，P值均小于0．01。随着转染时间的延长，各转染组细胞培养上清液中EGF质量浓度逐渐增高；转染72h，50倍转染组细胞培养上清液中EGF质量浓度明显高于其余各组（P值均小于0．01）。转染24、48h，各组细胞增殖活性相近（P值均大于0．05）；转染72h，200倍转染组细胞增殖活性明显低于其余各组（P值均小于0．05）。（3）孵育1d，2组细胞分泌的EGF生物活性相近（P〉0．05）；孵育3、5d，转染组细胞分泌的EGF生物活性明显高于未转染组（P值均小于0．01）。（4）转染24h，转染组细胞CK14、CK19表达较未转染组增强。（5）划痕后0h，2组细胞划痕宽度基本一致。划痕后12～48h，转染组细胞迁移距离明显长于未转染组（P值均小于0．01）。结论Ad-hEGF基因转染人表皮细胞的合适MOI为50～150，以50为最佳，以此MOI转染既能高效表达目的基因，又可保持细胞良好的增殖、分化和迁移能力。

关键词：表皮生长因子转染细胞增殖细胞运动人表皮细胞生物学特性

负压封闭引流技术在烧伤患儿颈部及躯干创面植皮术中的应用

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中华烧伤杂志 2017年第1期33卷 43-45页

作者：蔡建华申传安庹晓晔孙天骏李东杰邓虎平尚玉茹牛昊刘伟解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100048

目的探讨与传统打包加压固定比较，VSD技术在烧伤患儿颈部及躯干创面植皮术中的应用效果。方法回顾性分析2009年1月—2015年11月，笔者单位收治的91例颈部及躯干深度烧伤需植皮修复的患儿临床资料，根据移植皮片固定方式将患儿分为VSD... 详细信息

目的探讨与传统打包加压固定比较，VSD技术在烧伤患儿颈部及躯干创面植皮术中的应用效果。方法回顾性分析2009年1月—2015年11月，笔者单位收治的91例颈部及躯干深度烧伤需植皮修复的患儿临床资料，根据移植皮片固定方式将患儿分为VSD组49例和传统组42例。VSD组患儿应用VSD材料固定移植皮片，传统组患儿予以缝线打包固定移植皮片。2组患儿均于术后7 d拆除敷料，常规换药至创面完全愈合。观察并记录2组患儿手术时间、植皮成活率、二次手术率、术后换药次数及术后住院日。对数据行χ2检验、独立样本t检验。结果VSD组患儿的手术时间为（1.5±0.5）h，明显短于传统组的（2.0±0.5）h，t＝5.310，P〈0.01。VSD组患儿的植皮成活率为（97±3）%，明显高于传统组的（91±6）%，t＝5.576，P〈0.01。VSD组患儿的二次手术率为2.04%（1/49），明显低于传统组的7.14%（3/42），χ2＝37.961，P〈0.01。VSD组患儿的术后换药次数为（3.8±1.5）次，明显少于传统组的（5.8±2.4）次，t＝4.671，P〈0.01。VSD组患儿的术后住院日为（10.9±2.2）d，明显短于传统组的（14.9±3.6）d，t＝6.179，P〈0.01。结论在小儿颈部及躯干创面植皮治疗中，应用VSD固定移植皮片在缩短手术及术后住院时间、提高植皮成活率、降低二次手术率及减少换药次数等方面优于传统打包固定。

关键词：负压伤口疗法皮肤移植儿童颈躯干