检索结果-南通市图书馆

链霉菌Streptomyces tenebrarius H6中与抗生素有关的糖生物合成基因的克隆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2001年第3期17卷 329-331页

作者：李天伯尚广东夏焕章王以光沈阳药科大学沈阳110015 中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

Streptomyces tenebrarius H6 produces a complex of aminoglycoside antibiotics,such as apramycin,tobramycin and kanamycin B etc. To study the apramycin biosynthetic genes the genomic library from the Streptomyces tenebrarius H6 was established using ***/Streptomyces shuttle vector pKC505 by in vitro *** probability of finding a specific gene from the library composed of 3 000 colonies was over 99 9%. According to the highly conserved sequence of the genes involved in 6\|deoxyhexose biosynthesis,primers were designed and 0 6kb fragment homologous to strE gene was obtained by PCR.30 positive clones were found from the genomic library of \%***\% H6 with the 0 6kb fragment as a *** regions were localized by Southern hybridization and putative sugar related biosynthetic gene cluster was mapped by restriction enzyme *** ORF of dTDP\|glucose\|4,6\|dehydratase gene consisted of 1,132bp,designated as apr E,was obtained and submitted to GenBank under the accession number of AF306787.A DNA sequence highly homologous to str L coding dTDP\|4\|dehydrorhamnose reductase was found linked with apr E gene.

关键词：黑暗链霉菌 dTDP-葡萄糖-4,6-脱水酶基因糖生物合成基因抗生素

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法

应用与环境生物学报 2010年第3期16卷 432-434页

作者：陈莎莎杨圣勇尚广东南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京市微生物工程技术研究中心南京210046

恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440是模式环境微生物菌株,也是异源表达的良好宿主菌.高效率的电转化方法对于基因的引入及后续实验非常关键.通过条件优化,建立了高效的电转化方法.EM培养基培养菌体至D600nm=0.6～0.75,冰冷的3mmol... 详细信息

恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440是模式环境微生物菌株,也是异源表达的良好宿主菌.高效率的电转化方法对于基因的引入及后续实验非常关键.通过条件优化,建立了高效的电转化方法.EM培养基培养菌体至D600nm=0.6～0.75,冰冷的3mmol/L4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES,pH=7.0)的缓冲液洗涤菌体3次,菌体浓缩300倍,50μL分装并用于一次电转化.电转化条件:1.2kV,200Ω,25μF.1mL SOC培养基悬浮后,转至15mL聚丙烯离心管培养2h,转化效率可高达3.0×108转化子/μg,比目前为止文献报道的该菌株电转化效率高出30倍左右.实验结果还表明,转化DNA浓度与转化子数目呈线性关系.

关键词：恶臭假单胞菌KT2440 电转化感受态细胞

牲畜链霉菌一个调节基因的克隆及其顺式调控元件的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国科学（C辑） 2000年第2期30卷 207-212页

作者：尚广东王以光中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

依据原核生物中广泛存在的调节基因ｌｕｘＩ保守性区域的氨基酸序列设计引物，以牲畜链霉菌总ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出约１８０ｂｐ片段．以此为探针，与总ＤＮＡ不同酶切产物进行杂交，最终获得外源基因克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒ... 详细信息

依据原核生物中广泛存在的调节基因ｌｕｘＩ保守性区域的氨基酸序列设计引物，以牲畜链霉菌总ＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增出约１８０ｂｐ片段．以此为探针，与总ＤＮＡ不同酶切产物进行杂交，最终获得外源基因克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（－）ＥｃｏＲＩ－ＢａｍＨＩ位点的重组质粒ｐＳＮ１．序列分析发现一个１８００ｂｐ的完整ＯＲＦ，（Ｇ＋Ｃ）％为６９．３％，命名为ｓｃｔＩ．ＯＲＦ上游有２４９ｂｐ的ＡＴ富集区，下游有复杂的二级结构．凝胶滞留实验证明ＡＴ富集区有特异性的ＤＮＡ结合蛋白，且在低温聚丙烯酰胺凝胶电泳时可见“ＤＮＡ弯曲”现象，提示此ＡＴ富集区为一顺式调控元件。

关键词：牲畜链霉菌调节基因克隆顺式调控元件抗生素

重组工程法构建德胺糖生物合成基因簇的表达载体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国抗生素杂志 2007年第12期32卷 719-722页

作者：朱蕾谢峰尚广东南京师范大学生命科学学院江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京210097

德胺糖(desosamine)是次级代谢产物来源的微生物药物中的一个重要的糖基团。为构建德胺糖生物合成基因簇的异源表达体系,本研究运用重组工程技术一步法从黏粒中克隆了德胺糖的生物合成基因簇的两个转录单元,重组效率高达100%。本方法避... 详细信息

德胺糖(desosamine)是次级代谢产物来源的微生物药物中的一个重要的糖基团。为构建德胺糖生物合成基因簇的异源表达体系,本研究运用重组工程技术一步法从黏粒中克隆了德胺糖的生物合成基因簇的两个转录单元,重组效率高达100%。本方法避免了常规克隆手段的烦琐、耗时、针对长DNA片段的PCR易发生碱基突变等缺点。进一步,将两个转录单元分别置于来源于天蓝色链霉菌的pacI/pactIII双向启动子的控制下并克隆至链霉菌的游离型和整合型表达载体上。本工作为探索德胺糖生物合成基因簇在异源宿主菌中表达、德胺糖与多种糖苷底物偶联以创制新化合物奠定了基础。

关键词：德胺糖生物合成基因簇重组工程

产2S-甲基丙二酰辅酶A的基因工程假单胞菌的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国抗生素杂志 2011年第3期36卷 191-196页

作者：杨圣勇任杰尚广东江苏省微生物工程技术研究中心江苏省生物多样性与生物技术重点实验室南京师范大学生命科学学院南京210046

目的假单胞菌是次级代谢产物生物异源表达的优良宿主菌,然而它缺少许多次级代谢产物生物合成所需的小分子前体2S-甲基丙二酸辅酶A(2S-mm-CoA),因此构建产生2S-mm-CoA的宿主菌将有利于次级代谢产物的异源表达。方法本研究将来源于大肠埃... 详细信息

目的假单胞菌是次级代谢产物生物异源表达的优良宿主菌,然而它缺少许多次级代谢产物生物合成所需的小分子前体2S-甲基丙二酸辅酶A(2S-mm-CoA),因此构建产生2S-mm-CoA的宿主菌将有利于次级代谢产物的异源表达。方法本研究将来源于大肠埃希菌的编码甲基丙二酰辅酶A变位酶的sbm基因和编码甲基丙二酰辅酶A变位酶复合物保护蛋白的argK基因以及来源于天蓝色链霉菌的编码甲基丙二酰辅酶A异构酶的epi基因通过同源重组整合到恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonas putida KT2440)基因组,得到基因工程菌株*** LS-MCM。结果气质联用(GC/MS)分析表明*** LS-MCM能产生达2.22nmol/mL的2S-mm-CoA。结论 *** LS-MCM可作为异源表达需要2S-mm-CoA作为前体单元的次级代谢产物的宿主菌。

关键词： 2S-甲基丙二酰辅酶A 假单胞菌同源重组异源表达

基于微孔板的高通量筛选6-羟基烟酸转化菌方法的建立

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2008年第1期48卷 112-115页

作者：杨瑶袁生戴亦军尚广东南京师范大学生命科学学院南京市微生物技术工程研究中心南京师范大学生命科学学院微生物工程重点实验室南京210046

建立了一种基于96孔板-酶标仪的双波长紫外分光光度法高通量筛选6-羟基烟酸转化菌的方法。实验以251nm为测定波长、231nm为参比波长测定转化样品的6-羟基烟酸含量,6-羟基烟酸与ΔA251-231在0.5～11μg/mL浓度范围内有良好的线性关系,服... 详细信息

建立了一种基于96孔板-酶标仪的双波长紫外分光光度法高通量筛选6-羟基烟酸转化菌的方法。实验以251nm为测定波长、231nm为参比波长测定转化样品的6-羟基烟酸含量,6-羟基烟酸与ΔA251-231在0.5～11μg/mL浓度范围内有良好的线性关系,服从朗伯-比尔定律,平均回收率为99.11%～100.81%。利用96孔板-酶标仪,每天筛选量可达到2000～5000个反应,达到高通量筛选要求。

关键词：微孔板高通量筛选双波长紫外分光光度测定烟酸 6-羟基烟酸

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生技霉素稳定型基因工程菌的构建

生物工程学报 1999年第2期15卷 171-175页

作者：尚广东戴剑漉王以光中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所

运用同源重组技术将异戊酰基转移酶基因整合至螺旋霉素产生菌（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐｉｒａｍｙｃｅｔｉｃｕｓＦ２１）的染色体上，构建了稳定的生技霉素基因工程菌。在不加压的情况下传代，菌种携带选择性遗传标记情况、生长... 详细信息

运用同源重组技术将异戊酰基转移酶基因整合至螺旋霉素产生菌（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐｉｒａｍｙｃｅｔｉｃｕｓＦ２１）的染色体上，构建了稳定的生技霉素基因工程菌。在不加压的情况下传代，菌种携带选择性遗传标记情况、生长、发酵效价及发酵产物的ＴＬＣ分析均表明此基因工程菌有较好的遗传稳定性，且发酵效价及产物的组分均得到改善。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证明外源基因在螺旋霉素产生菌染色体上的整合情况。

关键词：生技霉素同源重组基因工程菌基因转化

Cloning of a regulatory gene from Streptomyces cattleya and study on its cis-acting element

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Science China(Life Sciences) 2000年第4期43卷 418-424页

作者：尚广东王以光 Institute of Medicinal Biotechnology Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College Beijing 100050 China

Primers were designed from the highly conserved protein regions of luxl, one of the two component regulatory genes in prokaryotic, and an about 180 bp DNA from Streptomyces cattleya was amplified by PCR. Using this fragment as a probe, Southern hybridization was accomplished with chromosome DNA of S. cattleya, leading to the cloning of the foreign DNA into pBluescript (SK-). DNA sequencing and frame analysis showed an intact ORF consisting of 1 800 bp; the G+C composition was 69.3%. Upstream from the ORF was a 249 bp AT rich region, downstream of the ORF several complicated secondary structures were found. DNA-binding assay by gel retardation demonstrated the presence of a protein that specifically bound to the 249 bp AT rich region. The region also showed anomalous electrophoretic mobility at low temperature, like that of a bent DNA molecule, indicating that the region contains a c/s-acting element.

关键词： Streptomyces cattleya regulatory gene gel retardation "Bent" DNA.

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

DNA克隆载体的“三片段克隆法”改造策略

南京师大学报（自然科学版） 2007年第4期30卷 80-83页

作者：谢锋朱蕾尚广东江苏省生物多样性和生物技术重点实验室江苏南京210046

将一个或多个DNA片段克隆至载体是分子生物学研究中最常用的技术之一.本研究使用新颖的Red/ETDNA重组克隆技术原理一步法将结合转移片段oriT,阿普霉素抗性基因Am和链霉素抗性基因(rpsL)克隆至常用的克隆载体pBluescriptKS(-),同时去除... 详细信息

将一个或多个DNA片段克隆至载体是分子生物学研究中最常用的技术之一.本研究使用新颖的Red/ETDNA重组克隆技术原理一步法将结合转移片段oriT,阿普霉素抗性基因Am和链霉素抗性基因(rpsL)克隆至常用的克隆载体pBluescriptKS(-),同时去除载体的氨苄青霉素抗性基因(bla).此"三片段克隆法"简便,快速,避免了经典的克隆策略常常难以寻找合适的限制性内切酶,长片段PCR、暴露于紫外线和凝胶回收等步骤所可能引入的碱基突变等等难以克服的问题,有可能成为通用的克隆策略.所得到的结合转移载体在通过结合转移将外源片段从大肠杆菌等转移至放线菌方面将有着广泛的用途.

关键词：重组工程三片段克隆法结合转移载体