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高氧损伤肺组织体外诱导骨髓间充质干细胞分化的研究

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高氧损伤肺组织体外诱导骨髓间充质干细胞分化的研究

作者：尉进茜山西医科大学

学位级别：硕士

第一章小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离扩增及鉴定目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells MSCs)体外分离、纯化及鉴定的方法。方法采用密度梯度离心法结合贴壁细胞培养法培养小鼠MSCs,观察不同代细胞的... 详细信息

第一章小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外分离扩增及鉴定目的探讨小鼠骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells MSCs)体外分离、纯化及鉴定的方法。方法采用密度梯度离心法结合贴壁细胞培养法培养小鼠MSCs,观察不同代细胞的形态及生长情况,流式细胞术检测表面抗原CD34、CD45、CD105和CD106的表达情况,并对小鼠MSCs进行纯度测定。结果：小鼠MSCs原代培养接种24小时后仅可见少许细胞贴壁,72小时后贴壁细胞数量逐渐增多,可见一些集落形成,此时贴壁的细胞形态为长梭形。在细胞培养的2-6天细胞增殖较慢,7-12天细胞增殖较快,呈“旋涡样”排列。细胞培养约两周左右,可接近80%-90%融合,细胞形态较为均一。传代后的小鼠MSCs24小时基本全部贴壁,呈梭形或星型样形态,传代培养后的细胞不再以集落方式生长,而呈均匀性分布生长。分离纯化后所得细胞活力为92.6±1.8%。流式细胞术结果显示第3代小鼠MSCs细胞均一性较好,在90%以上;CD34、CD45表达阴性,CD105、CD106表达阳性。结论：密度梯度离心法结合贴壁细胞培养法可成功培养出MSCs,所得小鼠MSCs活力及纯度均较高,流式细胞技术可以鉴定体外分离培养的小鼠MSCs。第二章肺组织与骨髓间充质干细胞体外非接触共培养目的建立肺组织与MSCs体外非接触共培养实验模型,探讨高氧损伤肺组织体外对MSCs分化及迁移能力的影响。方法出生1天新生小鼠置于60%氧浓度条件下饲养21天,建立支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia BPD)肺损伤模型。21天时脱颈椎处死取出肺组织,无菌条件下研磨、筛网过滤、胰酶消化、制备成肺组织单细胞悬液。共设定3组,transwell小室(PET膜孔径为0.4um)下室中为第三代小鼠MSCs,上室中分别随机放入高氧损伤肺组织单细胞悬液(实验组A)、正常肺组织单细胞悬液(实验组B)及空白培养液(对照组),进行体外非接触共培养。共培养6天做划痕实验、transwell小室侵袭实验,观察共培养后各组MSCs迁移能力的变化。共培养8天进行免疫荧光染色,激光共聚焦显微下观察各组共培养体系下室SP-C、AQP5免疫荧光表达情况。共培养8天采用实时定量(Real-time)PCR,2-△△Ct方法定量分析共培养体系下室MSCs中表面活性蛋白-C(SP-C)、水通道蛋白5(AQP5)、转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA含量的表达。结果吸入60%氧气21天小鼠肺组织病理切片示：肺泡正常结构消失,肺泡腔直径明显扩大,肺泡数量减少,可见大面积肺泡融合,肺泡间隔增厚,大量间质细胞增生,BPD高氧肺损伤模型建立成功。划痕后培养12小时进行观察,三组均仅有少量细胞爬行至划痕中,24小时三组数目均有增加,但实验组A增加较明显,48小时实验组B及对照组迁移细胞数量明显少于实验组A。Transwell小室侵袭实验：培养48小时后,对小室下表面上的细胞计数,发现实验组A与实验组B或对照组相比较,穿过PET膜的细胞数目均有显著性差异。提示损伤肺组织共培养可以促进MSCs迁移能力的提高。共培养8天时免疫荧光结果：实验组A组可以见hoechst33342标记的蓝色荧光,AQP5的红色荧光, SP-C的绿色荧光;实验组B和对照组都仅见到hoechst33342标记的蓝色荧光,AQP5的红色荧光,而未见到SP-C的绿色荧光。共培养8天时Real-timePCR结果：SP-CmRNA在实验组A存在表达,但实验组B和对照组均未见有SP-CmRNA表达。AQP5mRNA、TGF-β1mRNA三组均有表达,实验组A与实验组B和对照组比较AQP5、TGF-β1mRNA的表达水平明显增加(P0.05)。结论成功建立BPD高氧肺损伤模型,以及体外非接触共培养诱导小鼠MSCs分化为肺泡上皮细胞的实验模型,并证实与损伤肺组织共培养后MSCs的体外迁移能力增强,损伤的肺组织可以促进小鼠MSCs诱导分化为肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell AECⅡ)

关键词：骨髓间充质干细胞小鼠流式细胞技术肺泡上皮细胞迁移

高胆红素血症患儿谷氨酰转肽酶变化的临床意义

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中国处方药 2015年第5期13卷 99-100页

作者：尉进茜北京市顺义区妇幼保健院新生儿科北京101300

目的探讨高胆红素血症患儿谷氨酰转肽酶变化的临床意义。方法选取2012年10月~2013年10月新生儿科收治的重度高胆红素血症患儿共120例,设为观察组,另选取100例普通高胆红素血症患儿设为对照组,采用全自动生化仪对两组患儿总胆红素与谷氨... 详细信息

目的探讨高胆红素血症患儿谷氨酰转肽酶变化的临床意义。方法选取2012年10月~2013年10月新生儿科收治的重度高胆红素血症患儿共120例,设为观察组,另选取100例普通高胆红素血症患儿设为对照组,采用全自动生化仪对两组患儿总胆红素与谷氨酰转肽酶水平进行测定,并作比较分析。结果观察组患儿总胆红素检测平均值为（422.3±58.7）μmol/L,谷氨酰转肽酶检测平均值为（178.6±127.2）U/L;对照组患儿总胆红素检测平均值为（253.2±53.2）μmol/L,谷氨酰转肽酶检测平均值为（98.2±57.5）U/L;对照组采用持续光疗时间为（32.2±5.4）h,观察组为（68.2±12.3）h。组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论高胆红素血症患儿存在胆汁淤积、胆道排泄功能障碍等问题,这对患儿肝功能损伤性较大,为减少高胆红素血症对肝细胞造成的伤害,须尽早积极治疗。

关键词：高胆红素血症谷氨酰转肽酶新生儿临床意义

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窒息新生儿心肌酶谱的变化及临床意义

北京医学 2012年第5期34卷 418-419页

作者：赵辉尉进茜北京市顺义区妇幼保健院新生儿科 101300

窒息是新生儿最常见的临床症状,也是新生儿的主要死亡原因,窒息时缺氧缺血可导致脑、心、肝、肾等多个系统器官损害。新生儿窒息后可使心肌细胞能量代谢发生障碍,ATP耗竭,导致心肌损害[1]。我们对2008年5月至2011年11月在我院出生的窒... 详细信息

窒息是新生儿最常见的临床症状,也是新生儿的主要死亡原因,窒息时缺氧缺血可导致脑、心、肝、肾等多个系统器官损害。新生儿窒息后可使心肌细胞能量代谢发生障碍,ATP耗竭,导致心肌损害[1]。我们对2008年5月至2011年11月在我院出生的窒息新生儿54例和非窒息、非早产儿36例进行心肌酶谱的检测,以了解新生儿窒息后心肌酶活性变化情况,探讨临床意义,报告如下。

关键词：窒息新生儿心肌酶谱临床意义新生儿窒息后心肌酶活性变化主要死亡原因细胞能量代谢临床症状

母乳成分对纯母乳喂养婴幼儿早期生长发育速率的影响

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中国医药科学 2022年第14期12卷 69-72页

作者：赵辉尉进茜北京市顺义区妇幼保健院北京儿童医院顺义妇儿医院新生儿科北京101300

目的探讨母乳成分对纯母乳喂养婴幼儿早期生长发育速率的影响。方法选取北京市顺义区妇幼保健院2016年9月至2017年4月收治的纯母乳喂养正常分娩足月婴儿50例作为研究对象,依据婴儿生长发育速率进行分组,正常发育婴儿组20例和异常发育婴... 详细信息

目的探讨母乳成分对纯母乳喂养婴幼儿早期生长发育速率的影响。方法选取北京市顺义区妇幼保健院2016年9月至2017年4月收治的纯母乳喂养正常分娩足月婴儿50例作为研究对象,依据婴儿生长发育速率进行分组,正常发育婴儿组20例和异常发育婴儿组30例。观察两组婴儿出生时、3月龄时身高、体重、平均身高、体重的净增量、喂养时间间隔、吮吸时间情况,观察两组对应母乳蛋白质、脂肪、乳糖、干物质、水分和总能量含量,观察婴儿平均体重、身高净增量影响因素。结果异常发育婴儿组3月龄时身高、体重、体重净增量、身高净增量均低于正常发育婴儿组,差异有统计学意义(P0.05)。两组乳糖、水分含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。异常发育婴儿组蛋白质、脂肪、总能量低于正常发育婴儿组,干物质高于正常发育婴儿组,差异有统计学意义(P<0.05)。通过logistic回归分析,母乳中的蛋白质、脂肪含量和婴儿平均体重净增量有一定的相关性,母乳中的蛋白质含量和婴儿平均身高净增量的影响因素(P<0.05)。结论纯母乳喂养婴幼儿早期生长发育速率和母乳成分中蛋白质、脂肪具有一定的相关性,应该重视母乳成分水平,保证母乳质量,提高婴幼儿生长发育水平。

关键词：母乳成分纯母乳喂养婴幼儿生长发育速率

骨髓间充质干细胞对难治性肺疾病治疗的研究进展

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中国实用医药 2011年第24期6卷 248-249页

作者：尉进茜伊慧珍北京市顺义区妇幼保健医院 101300

一些呼吸系统难治性疾病，如急性呼吸窘迫综合征、支气管肺发育不良、肺纤维化、肺癌、肺气肿等，这些疾病的病死率很高，而且存活者常因肺功能减退而严重影响生活质量，目前尚无根本性治疗方法。近年研究显示植入动物体内的骨髓间充质... 详细信息

一些呼吸系统难治性疾病，如急性呼吸窘迫综合征、支气管肺发育不良、肺纤维化、肺癌、肺气肿等，这些疾病的病死率很高，而且存活者常因肺功能减退而严重影响生活质量，目前尚无根本性治疗方法。近年研究显示植入动物体内的骨髓间充质干细胞（MSCs）能够在受损肺组织内分化为肺泡I型细胞（AECI）、肺泡Ⅱ型细胞（AECII）、内皮细胞和纤维母细胞，并不同程度的减轻肺的炎性反应。为根本性治疗这些肺疾病带来了希望，因此运用干细胞移植疗法可能成为今后治疗难治性肺疾病的发展趋势。

关键词：骨髓间充质干细胞难治性疾病治疗方法肺疾病急性呼吸窘迫综合征支气管肺发育不良肺泡I型细胞肺泡Ⅱ型细胞

妊娠晚期生殖道B族链球菌定植对母婴结局的影响

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妇儿健康导刊 2022年第7期1卷 111-113,123页

作者：赵辉尉进茜北京市顺义区妇幼保健院北京儿童医院顺义妇儿医院新生儿科北京101300

目的探讨孕妇妊娠晚期阴道B族链球菌(GBS)定植对母婴结局的影响。方法回顾性选取2019年1月至12月北京市顺义区妇幼保健院产科分娩妊娠晚期孕妇诊断链球菌感染的106例患者作为观察组,随机选取同期GBS阴性的112例孕妇作为对照组。比较分... 详细信息

目的探讨孕妇妊娠晚期阴道B族链球菌(GBS)定植对母婴结局的影响。方法回顾性选取2019年1月至12月北京市顺义区妇幼保健院产科分娩妊娠晚期孕妇诊断链球菌感染的106例患者作为观察组,随机选取同期GBS阴性的112例孕妇作为对照组。比较分析两组的围产期情况、抗生素使用情况及母婴结局。结果两组孕妇在胎膜早破、羊水粪染、剖宫产、产后即时出血及产褥贫血方面比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组在分娩前抗生素使用情况高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。观察组新生儿感染发生率及达住院标准情况高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论孕母GBS感染会增加新生儿患感染性疾病的可能,增加新生儿住院的可能性。故应对孕晚期孕妇常规进行GBS感染筛查并进行及时有效治疗,减少新生儿并发症的可能性。

关键词： B族链球菌感染妊娠晚期生殖道妊娠结局抗生素使用新生儿疾病

新生儿高未结合胆红素血症光疗时测定总胆汁酸的临床意义

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中国卫生产业 2012年第35期9卷 69-70页

作者：李莉伊慧珍尉进茜北京市顺义区妇幼保健院北京101300

目的探讨总胆汁酸在新生儿高未结合胆红素血症(简称高胆)蓝光治疗(简称光疗)时间中的临床意义。方法对210例进行蓝光照射治疗高胆患儿,测定血清总胆汁酸(TBA)、未结合胆红素(IBIL)和蓝光治疗时间,将总胆汁酸和未结合胆红素、蓝光治疗时... 详细信息

目的探讨总胆汁酸在新生儿高未结合胆红素血症(简称高胆)蓝光治疗(简称光疗)时间中的临床意义。方法对210例进行蓝光照射治疗高胆患儿,测定血清总胆汁酸(TBA)、未结合胆红素(IBIL)和蓝光治疗时间,将总胆汁酸和未结合胆红素、蓝光治疗时间做相关分析。结果血清总胆汁酸与未结合胆红素无相关性(P>0.05),与蓝光治疗时间具有相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高胆患儿总胆汁酸与未结合胆红素无相关性,总胆汁酸升高时,胆红素代谢能力下降,蓝光治疗时间长。

关键词：总胆汁酸未结合胆红素蓝光治疗时间新生儿

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母婴血型不合导致新生儿溶血病实验室分析

陕西医学杂志 2013年第11期42卷 1512-1513页

作者：伊慧珍尉进茜赵辉北京市顺义区妇幼保健医院新生儿科北京101300

目的:对母婴血型不合导致新生儿发生溶血的实验室数据进行分析,为新生儿溶血病(HDN)的诊断提供早期直接依据。方法:共纳入160例新生儿溶血病患者,清晨空腹抽取160例新生儿及其母亲肘静脉血液,进行ABO、Rh血型鉴定及新生儿脐血直接抗人... 详细信息

目的:对母婴血型不合导致新生儿发生溶血的实验室数据进行分析,为新生儿溶血病(HDN)的诊断提供早期直接依据。方法:共纳入160例新生儿溶血病患者,清晨空腹抽取160例新生儿及其母亲肘静脉血液,进行ABO、Rh血型鉴定及新生儿脐血直接抗人球蛋白试验、游离抗体试验、抗体释放试验。结果:160份临床疑为溶血病的新生儿中,患儿均为Rh阳性,母亲1例为Rh阴性;其中A型者60例,B型80例,O型18例。血型血清学检测证实的血型抗原不合引起的HDN例数为97例,总阳性率为60.6%,其中ABO-HDN 96例,Rh-HDN 1例。在被证实为ABOHDN的96例患儿中,A型41例(25.6%),B型55例(34.4%)。直接抗人球蛋白试验和游离抗体试验检测筛查18例O型患儿均为阴性。Rh阴性的1例母亲及其患儿ABO血型均为A型,直接抗人球蛋白试验结果阳性。结论:在所有的HDN中,ABO血型的HDN发生明显多于Rh型HDN,其中又以母亲为O型的B型新生儿多见;抗体释放试验比直接抗人球蛋白试验及游离抗体试验诊断HDN的准确率高。为临床上早期诊断HDN提供重要的依据,对防止胆红素脑病的发生具有重要意义。

关键词：血型不合新生儿病证溶血诊断

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新生儿窒息后低钙血症相关影响因素分析

中国处方药 2018年第8期16卷 143-144页

作者：李飞天詹实娜尉进茜北京市顺义区妇幼保健院北京儿童医院顺义妇儿医院新生儿科北京101300

目的探讨新生儿窒息后低钙血症相关影响因素情况。方法分析2015年1月~2017年12月收治的60例新生儿窒息后低钙血症临床资料,其中60例窒息后低钙血症患儿为观察组,同时50例新生儿窒息无低钙血症发生病例作为对照组。观察两组新生儿窒息程... 详细信息

目的探讨新生儿窒息后低钙血症相关影响因素情况。方法分析2015年1月~2017年12月收治的60例新生儿窒息后低钙血症临床资料,其中60例窒息后低钙血症患儿为观察组,同时50例新生儿窒息无低钙血症发生病例作为对照组。观察两组新生儿窒息程度、血钙水平、低钠血症、多器官功能损害、高血糖症情况,观察新生儿窒息后低钙血症logistic回归分析情况。结果观察组新生儿重度窒息、低钠血症、多器官功能损害、高血糖症比例均高于对照组,血钙水平低于对照组。新生儿窒息程度、低钠血症、多器官功能损害、高血糖症是新生儿窒息后低钙血症相关影响因素,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿窒息程度、低钠血症、多器官功能损害、高血糖症是新生儿窒息后低钙血症相关影响因素,可以为临床治疗提供理论依据。

关键词：新生儿窒息低钙血症影响因素