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骨髓间质干细胞的成骨诱导作用及其机制的研究进展

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中华骨科杂志 2021年第4期41卷 262-270页

作者：刘天柱尉晓蔚刘阁赵德伟大连大学附属中山医院骨科 116001 大连大学附属中山医院骨科植入材料开发国家地方联合工程实验室 116001 大连大学中山临床学院 116001

大段骨缺损的治疗是临床难题,骨组织工程学的出现为其带来了一种具有前景的治疗策略,是当下的研究热点。骨髓间质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)作为骨组织工程学重要的种子细胞来源之一,是一种容易取材、来源广泛... 详细信息

大段骨缺损的治疗是临床难题,骨组织工程学的出现为其带来了一种具有前景的治疗策略,是当下的研究热点。骨髓间质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)作为骨组织工程学重要的种子细胞来源之一,是一种容易取材、来源广泛、增殖率高的多能干细胞。BMSCs可被多种方法诱导分化为成骨细胞,从而达到修复骨缺损的目的。目前常见的诱导BMSCs成骨分化的方法包括活性因子、激素、生物材料、中药、物理刺激以及非编码RNA等。BMSCs的成骨分化是一个非常复杂的过程,受到多种信号通路的调控,以维持平衡的骨代谢水平,主要有BMPs/Smad信号通路、转化生长因子-β信号通路、Wnt信号通路等。开发和研究不同的可诱导BMSCs成骨分化的活性因子和支架材料是骨组织工程学发展的基础;同时进一步探究其中的信号通路,可揭示具体的分子调控机制,有利于寻找新的治疗靶点,研发靶向治疗药物。但BMSCs的定向成骨诱导分化、信号通路相互交错干扰、临床转化及个体化应用等问题仍需进一步解决。

关键词： Wnt信号通路临床难题骨髓间质干细胞活性因子成骨分化物理刺激支架材料多能干细胞

分泌型卷曲相关蛋白2对HepG2细胞生物学行为的影响

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中华肝脏病杂志 2008年第12期16卷 913-917页

作者：王立芝谭冬梅尉晓蔚彭洪英赖国旗谭毅重庆医科大学实验动物中心 400016

目的了解分泌型卷曲相关蛋白2（sFRP2）对HepG2细胞增殖、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法采用sFRP2重组腺病毒感染HepG2细胞，四甲基偶氮唑盐法检测HepG2细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期分布，免疫组织化学法检测肿瘤转移相关因... 详细信息

目的了解分泌型卷曲相关蛋白2（sFRP2）对HepG2细胞增殖、侵袭和迁移等生物学行为的影响。方法采用sFRP2重组腺病毒感染HepG2细胞，四甲基偶氮唑盐法检测HepG2细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期分布，免疫组织化学法检测肿瘤转移相关因子的表达，Westernblot检测D连环素的表达，Transwell小室检测细胞迁移能力。结果sFRP2明显抑制HepG2细胞增殖，限制细胞周期从G0／G1期进入S期;sFRP2显著增强HepG2细胞CD44和cD82／KAI1等与肿瘤转移抑制相关蛋白的表达，而明显降低有助于肿瘤侵袭转移的细胞外基质金属蛋白酶诱导因子的表达；sFRP2可降低HepG2细胞的迁移能力。sFRP2感染前后，HepG2细胞均有D连环素的表达，且其表达差异无统计学意义。结论sFRP2的重组腺病毒能成功感染HepG2细胞，并对HepG2细胞的增殖、侵袭和转移具有抑制效应。

关键词：肿瘤转移肿瘤侵润分泌型卷曲相关蛋白2

重组腺病毒CD82／KAI1对小鼠子宫基质细胞内α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响

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第三军医大学学报 2009年第7期31卷 572-576页

作者：尉晓蔚张倩谭冬梅赵邦霞何通川谭毅重庆医科大学实验动物中心重庆400016 重庆医科大学美国芝加哥大学分子肿瘤实验室

目的研究CD82/KAI1对着床窗口期小鼠子宫基质细胞内整合素α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响。方法采用基因工程技术,构建CD82/KAI1腺病毒;用免疫细胞化学技术观察妊娠小鼠子宫基质细胞感染CD82/KAI1腺病毒后,细... 详细信息

目的研究CD82/KAI1对着床窗口期小鼠子宫基质细胞内整合素α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响。方法采用基因工程技术,构建CD82/KAI1腺病毒;用免疫细胞化学技术观察妊娠小鼠子宫基质细胞感染CD82/KAI1腺病毒后,细胞内α5、β3、MMP-9、E-cadherin和β-catenin的表达变化情况。结果①构建的小鼠重组腺病毒的滴度达到6.5×1012pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫基质细胞48h后,CD82/KAI1蛋白有明显表达。②妊娠4d的小鼠子宫基质细胞中E-cadherin、β-catenin、α5、MMP-9均有表达,没有检测到β3的表达;对照组未妊娠小鼠细胞中均没有检测到E-cadherin、β-catenin、α5、MMP-9和β3的表达。③与导空腺病毒组相比,妊娠4d的小鼠子宫基质细胞感染CD82/KAI1腺病毒后,β-catenin和MMP-9表达显著上升(P0.05),未检测到β3的表达。结论成功构建含小鼠CD82/KAI1全基因的重组腺病毒。胚胎植入前小鼠子宫基质细胞内整合素α5、MMP-9、E-cadherin和β-catenin的表达可能受CD82/KAI1的影响。

关键词： CD82/KAI1基因重组腺病毒子宫基质细胞原代培养

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新型多孔钽金属支架材料的生物学评价

中国组织工程研究 2017年第18期21卷 2839-2845页

作者：谢辉马志杰王建川王本杰王威尉晓蔚赵德伟大连理工大学电信学部生物医学工程系辽宁省大连市116023 大连大学附属中山医院骨科辽宁省大连市116001

背景:利用涂层制备技术在传统材料基体上沉积金属钽涂层,既利用了金属钽优异生物学性能又可降低成本,为金属钽器件的应用提供了一条切实可行的方向。目的:制备金属钽涂层支架材料,观察其体内外生物相容性。方法:采用常压化学气相沉积技... 详细信息

背景:利用涂层制备技术在传统材料基体上沉积金属钽涂层,既利用了金属钽优异生物学性能又可降低成本,为金属钽器件的应用提供了一条切实可行的方向。目的:制备金属钽涂层支架材料,观察其体内外生物相容性。方法:采用常压化学气相沉积技术在多孔碳化硅基体上制备多孔金属钽涂层支架材料,进行以下实验:(1)体外实验:将骨髓间充质干细胞与多孔金属钽涂层支架材料共培养2周,MTT法检测细胞增殖;培养第5,10,15天,扫描电镜观察细胞在材料表面附着情况;(2)体内实验:在犬股骨头骨缺损处植入多孔钽材料,分别于植入后6,12周处死实验动物,将标本硬组织切片染色后,显微镜下观察多孔钽材料与周围组织的生长情况。结果与结论:(1)体外实验结果:随着培养时间的延长,骨髓间充质干细胞呈现出极其旺盛的增殖,相互排列紧密,细胞之间连接并爬行生长进入多孔钽孔隙中,细胞完全覆盖在多孔钽表面,细胞与细胞之间形成团状重叠现象;(2)体内实验结果:植入6周,材料与骨组织周围界限清晰,多孔钽孔隙中有少量骨组织爬行,有少许骨小梁长入,未附着部分可见孔隙周围空虚及缝隙,材料周围未见组织破坏及排斥反应;植入12周,可明显观察到材料与骨组织生长良好,多孔钽表面和孔隙内大量骨组织长入,材料孔隙与组织紧密连接,有大量骨小梁长入,多孔钽与骨组织融于一体;(3)结果表明:采用常压化学气相沉积技术制备的金属钽涂层支架材料具有良好的生物相容性。

关键词：生物材料材料相容性碳化硅多孔钽化学气相沉积法骨髓间充质干细胞生物相容性

肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1对植入前小鼠胚胎体外发育的影响

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生殖与避孕 2008年第10期28卷 582-587页

作者：赵邦霞谭冬梅尉晓蔚谭毅重庆医科大学实验动物中心重庆400016

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠胚胎中的表达规律及其对小鼠胚胎体外发育的影响。方法:①应用RT-PCR及免疫荧光技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠不同发育时期胚胎中的表达规律。②在不同CD82/KAI1抗体浓度的培养液中,培养小... 详细信息

目的:研究CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠胚胎中的表达规律及其对小鼠胚胎体外发育的影响。方法:①应用RT-PCR及免疫荧光技术观察CD82/KAI1mRNA及蛋白质在小鼠不同发育时期胚胎中的表达规律。②在不同CD82/KAI1抗体浓度的培养液中,培养小鼠8-细胞胚胎,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化。结果:①CD82/KAI1mRNA在小鼠不同时期胚胎中均有表达,于8-细胞期及桑葚胚表达较丰富,CD82/KAI1蛋白表达于各期胚胎细胞的胞膜和胞浆,在桑葚胚期CD82蛋白还强表达于胚胎细胞的胞核。②一定浓度的CD82/KAI1抗体可明显抑制胚胎的发育速度(1∶800,P<0.05),降低囊胚的形成率(1∶400,P<0.05)和孵出率(1∶800,P<0.05),减少囊胚细胞数(1∶800,P<0.05)。结论:CD82/KAI1在小鼠胚胎的发育过程中可能发挥重要作用。

关键词：肿瘤转移抑制因子CD82/KAI1 胚胎体外发育

肿瘤转移抑制因子基因MRP-1/CD9对小鼠胚胎着床影响的研究

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四川动物 2007年第3期26卷 686-688页

作者：赵邦霞谭冬梅彭红英尉晓蔚谭毅重庆医科大学实验动物中心

目的研究外源性MRP-1/CD9抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法1.将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度MRP-1/CD9抗体的培养液中,观察囊胚形成及囊胚脱透明带的情况。2.妊娠D4小鼠子宫角注射MRP-1/CD9抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量。结果1... 详细信息

目的研究外源性MRP-1/CD9抗体对小鼠胚胎着床的影响。方法1.将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度MRP-1/CD9抗体的培养液中,观察囊胚形成及囊胚脱透明带的情况。2.妊娠D4小鼠子宫角注射MRP-1/CD9抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量。结果1.体外培养时,MRP-1/CD9抗体显著抑制胚胎的囊胚形成率(1:400,P<0.05)和脱带率(1∶800,P<0.05)。2.宫角注射MRP-1/CD9抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数(8.33±0.15vs4.57±0.21)。结论MRP-1/CD9参入小鼠胚胎的发育及植入。

关键词：肿瘤转移抑制因子MRP-1/CD9 子宫内膜胚胎着床

甲强龙联合脂多糖诱导成年犬股骨头动-静脉系统的组织病理学特点

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中国组织工程研究 2018年第20期22卷 3195-3200页

作者：张耀赵德伟王子华尉晓蔚田丰德杨帆大连理工大学生物医学工程学院辽宁省大连市116024 大连大学附属中山医院骨科辽宁省大连市116001

背景:糖皮质激素类的诸多作用机制对于与骨坏死的病理过程的启动有密切关系,然而对于激素性骨坏死时股骨头动、静脉血管在不同时段发生的病理形态学变化的区别仍缺少相关记述。目的:观察大剂量皮质激素联合脂多糖诱导下的成年犬在不同... 详细信息

背景:糖皮质激素类的诸多作用机制对于与骨坏死的病理过程的启动有密切关系,然而对于激素性骨坏死时股骨头动、静脉血管在不同时段发生的病理形态学变化的区别仍缺少相关记述。目的:观察大剂量皮质激素联合脂多糖诱导下的成年犬在不同时段其动脉和静脉系统的组织病理形态学变化,以讨论这种变化对骨坏死发生和发展造成的可能影响。方法:将健康成年犬15只随机分为4,8周观察组及对照组,每组5只(10髋)。4,8周观察组行静脉注射脂多糖10 g/kg,于24 h后肌注甲强龙20 mg/kg,连续注射3次,每次间隔24 h,干预后4,8周麻醉处死,取股骨头行双侧病理切片染色,对骨内及支持带动静脉血管缩窄度进行分析测量。结果与结论:诱导4,8周后,犬骨内静脉的结构形态发生明显变化,表现为正常型静脉结构显著减少,而中度狭窄型、阻塞塌陷型静脉结构占比显著升高。在骨内动脉系统,8周观察组相对其他2组骨内区域动脉血管内膜相对增厚,血管缩窄程度高(P<0.05)。结果证实,在皮质激素联合脂多糖诱导下,成年犬股骨头动脉和静脉系统出现病理变化的时间节点存在差异。静脉系统在药物诱导早期(4周)最先呈现出病理变化,而动脉系统病理变化出现在药物诱导8周后。

关键词：组织工程股骨头坏死脂多糖动物实验骨内动静脉糖皮质激素-脂多糖诱导组织学病理学血管缩窄度

ME491/CD63对小鼠胚胎发育及着床的影响

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第四军医大学学报 2009年第20期30卷 2081-2085页

作者：赵邦霞尉晓蔚谭毅谭冬梅重庆医科大学实验动物中心重庆400016

目的:研究ME491/CD63对小鼠胚胎体外发育及着床的影响,以及ME491/CD63mRNA及蛋白在假孕D1～8小鼠子宫中的表达规律.方法:①将小鼠8-细胞胚胎培养于含不同浓度ME491/CD63抗体的培养液中,观察胚胎发育,记录囊胚形成及脱透明带的情况.②妊... 详细信息

目的:研究ME491/CD63对小鼠胚胎体外发育及着床的影响,以及ME491/CD63mRNA及蛋白在假孕D1～8小鼠子宫中的表达规律.方法:①将小鼠8-细胞胚胎培养于含不同浓度ME491/CD63抗体的培养液中,观察胚胎发育,记录囊胚形成及脱透明带的情况.②妊娠D4小鼠宫角注射ME491/CD63抗体,于妊娠D8观察小鼠胚胎植入数量.③用RT-PCR及免疫组织化学技术观察ME491/CD63mRNA及蛋白在假孕小鼠子宫的表达规律.结果:①ME491/CD63抗体可影响胚胎在体外的发育.与对照组相比,在ME491/CD63抗体浓度为1∶400及以上时,囊胚的形成率明显降低(P<0.05);在抗体浓度为1∶800及以上时,胚胎脱带率显著下降(P<0.05),ME491/CD63抗体对胚胎发育的影响具有浓度依赖性.②宫角注射一定量的ME491/CD63抗体可以显著提高小鼠胚胎的着床数[(5.8±2.3)vs(4.1±1.8),P<0.05].③ME491/CD63mRNA在假孕D1～8小鼠子宫中均有表达,于D6表达最丰富.ME491/CD63蛋白在假孕D1～8的子宫腺上皮细胞均有表达,假孕D1～5腔上皮细胞无表达,假孕D6～8,子宫腔上皮细胞阳性表达.结论:①ME491/CD63在小鼠胚胎发育和着床过程中发挥重要作用.②ME491/CD63在妊娠小鼠子宫的表达是非胚胎依赖性的,其表达量的变化可能与胚胎存在与否有一定关系.

关键词：肿瘤转移抑制因子MFA91/CD63 胚胎着床子宫内膜

国产多孔玻璃碳的细胞相容性及犬体内植入的实验研究

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中华显微外科杂志 2016年第4期39卷 354-358页

作者：尉晓蔚赵德伟张魁伟王建川王本杰王威大连大学附属中山医院骨科医学研究中心辽宁省大连市116001

目的探讨同产多孔玻璃碳作为骨组织工程载体的支架材料的可能性。方法自2013年6月-2014年8月．原代培养的犬骨髓基质干细胞与多孔玻璃碳体外联合培养后，观察细胞的形态及其增殖情况。使用单因素方差分析检测多孔玻璃碳的细胞毒性。雄... 详细信息

目的探讨同产多孔玻璃碳作为骨组织工程载体的支架材料的可能性。方法自2013年6月-2014年8月．原代培养的犬骨髓基质干细胞与多孔玻璃碳体外联合培养后，观察细胞的形态及其增殖情况。使用单因素方差分析检测多孔玻璃碳的细胞毒性。雄性实验犬3只，在其右后肢建立大转子骨缺损模型，将多孔玻璃碳分别植入犬大转子骨缺损位点及腹股沟，每只犬的左后肢大转子设为对照组。12周后，观察多孔玻璃碳在犬体内的生物相容性。结果MTT结果显示骨髓基质干细胞与多孔玻璃碳分别联合培养1、3、5、7d后，其增殖情况与体外培养差异无统计学意义（P〉0．05）。倒置荧光显微镜及扫描电镜发现骨髓基质干细胞黏附于材料孔隙之间，细胞充分伸展，向四周伸出伪足，分泌的细胞外基质包绕于细胞周围。多孔玻璃碳植入腹股沟12周后，材料周同和内部新生出了结缔组织，并且没有发现局部肿瘤和炎症反应。多孔玻璃碳植入大转子骨缺损位点12周后，与宿主骨的骨小梁产生稳定连接，材料与缺损区周围的松质骨结合紧密。结论目产多孔玻璃碳支架无细胞毒性，在体外能促进骨髓基质干细胞的黏附与增殖，在体内具有良好的骨诱导特性。

关键词：多孔玻璃碳骨髓基质干细胞生物相容性骨缺损犬