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藏红花素生物合成路径的构建

藏红花素生物合成路径的构建

作者：封悦洋天津大学

学位级别：硕士

植物糖苷藏红花素（Crocin）存在于藏红花柱头中,具有镇静、抗氧化、抗癌的作用。1分子藏红花素由1分子藏红花酸和4分子尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）缩合形成。根据缩合UDPG的位置和个数,其糖基化产物可分为藏红花素-5（Crocin-5）、藏红花... 详细信息

植物糖苷藏红花素（Crocin）存在于藏红花柱头中,具有镇静、抗氧化、抗癌的作用。1分子藏红花素由1分子藏红花酸和4分子尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）缩合形成。根据缩合UDPG的位置和个数,其糖基化产物可分为藏红花素-5（Crocin-5）、藏红花素-4（Crocin-4）、藏红花素-3（Crocin-3）、藏红花素-2（Crocin-2）和藏红花素。目前藏红花素的生产主要依赖于植物提取。但该方法产量低、纯度低。而微生物异源从头合成藏红花素是对该产品现有生产方式的一种重要补充,目前尚未在异源真核底盘中实现。本实验室前期成功在酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中构建藏红花酸的合成路径,可作为生产藏红花素的底盘菌株。本研究在该菌株中表达栀子（Gardenia jasminoides）来源的糖基转移酶UGT75L6和UGT94E5并降低发酵温度至20℃,在酿酒酵母中首次实现了初级糖基化产物——藏红花素-5（单侧加1个UDPG）和次级糖基化产物藏红花素-2（一侧加1个UDPG,另一侧加2个UDPG）的合成。通过筛选来自藏红花（Crocus sativus L.）、甜叶菊（Stevia rebaudiana）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis 168）的6种初级糖基转移酶和次级糖基转移酶的组合,发现除含有藏红花来源UGT2的组合外,均可实现藏红花素-5和藏红花素-2的合成,且含有枯草芽孢杆菌来源糖基转移酶Yoj K/Yji C/Ydh E的酵母菌株合成藏红花素-5摇瓶水平产量最高（达到6.08 mg/L）。在此基础上通过过表达磷酸变位酶（PGM1）、葡萄糖-1-尿苷转移酶（UGP1）和核苷二磷酸激酶（YNK1）上调酵母内源UDPG合成路径,仅含有Yoj K/Yji C/Ydh E的菌株实现了藏红花素的合成,产量为0.263 mg/L。同时,含有糖基转移酶UGT75L6/UGT94E5的菌株获得了微生物中藏红花素-5的最高产量,为8.8 mg/L。UDPG的供给是合成藏红花素的限速步骤。藏红花素的生物合成和细胞生长共同竞争UDPG。如果通过构建酿酒酵母和大肠杆菌（Escherichia coli）的混菌系统,实现产藏红花酸生产和糖基化过程的分工,将会有充足的UDPG用于藏红花素的合成。本研究证明藏红花酸可以在酿酒酵母胞外富集。而添加在发酵培养基中的藏红花酸可以被大肠杆菌转运至胞内,且与大肠杆菌MG1655相比BL21（DE3）藏红花酸转运效率更高。选择大肠杆菌BL21（DE3）作为出发菌,在敲除UDPG水解酶基因（ush A）的同时过表达PGM1和葡萄糖-1-尿苷转移酶（Gal U）,以获得UDPG合成路径上调的底盘菌株。在该底盘中分别导入UGT75L6/UGT94E5、UGT75L6/UGT76G1、Yoj K和Yoj K/Yji C/Ydh E这4种糖基转移酶组合。通过胞外饲喂藏红花酸,包含糖基转移酶Yoj K/Yji C/Ydh E的菌株藏红花素-5产量最高为1.81 mg/L,并可合成藏红花素-2,但该菌株中未检测到藏红花素的合成。这是因为在大肠杆菌中表达的糖基转移酶多以包涵体形式存在,严重限制了藏红花素-5的积累以及藏红花素的合成。本研究首次在酿酒酵母中实现了藏红花素的全合成,为后续藏红花素的高水平异源表达奠定了基础。同时构建了可生产藏红花素-2和藏红花素-5的大肠杆菌菌株,为藏红花素混菌体系的构建打下基础。

关键词：藏红花素藏红花素-5 酿酒酵母大肠杆菌糖基转移酶尿苷二磷酸葡萄糖

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置胃管失败的原因分析与对策

第三军医大学学报 2004年第1期26卷 83-83,86页

作者：陈显春封悦杨英宋爽第三军医大学西南医院乳腺疾病中心重庆400038

置胃管是临床常用的护理技术操作,但也是一种侵袭性操作,置胃管失败的现象时有发生,为提高一次性置胃管成功率,保证置人胃管的有效性。

关键词：置胃管失败原因对策

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精细过滤输液器在胃肠道手术病人中的应用

第三军医大学学报 2003年第5期25卷 448-448,453页

作者：陈显春封悦杨英宋爽颜贤惠第三军医大学附属西南医院普通外科重庆400038

外科病人由于手术创伤、术后禁食、胃肠减压等因素的影响，机体处于高代谢和分解代谢状态，导致病人出现负氮平衡，一般持续3～7 d。因此，术后1周病人免疫力低下，输液、用药是治疗的关键。外科病人术后具有输液量大，添加药物多的特... 详细信息

外科病人由于手术创伤、术后禁食、胃肠减压等因素的影响，机体处于高代谢和分解代谢状态，导致病人出现负氮平衡，一般持续3～7 d。因此，术后1周病人免疫力低下，输液、用药是治疗的关键。外科病人术后具有输液量大，添加药物多的特点，为提高输液安全度，保证病人术后治疗的顺利进行，我们选择精细过滤输液器用于外科术后病人的输液，取得良好效果。

关键词：精细过滤输液器胃肠道手术胃癌肿肠道癌肿

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生物合成槲皮素糖苷类衍生物的研究进展

化工学报 2020年第7期71卷 2945-2955页

作者：封悦洋王颖姚明东肖文海丁明珠天津大学前沿技术研究院天津301700 天津大学合成生物学前沿科学中心天津300072 天津大学系统生物工程教育部重点实验室天津300072

糖苷类天然产物是植物中次级代谢产物的主要存在形式,具有重要的生物活性。通过糖基化修饰可以改变其水溶性、稳定性,产生特殊的生物活性和功能,因此易于商品化应用,具有重要的药用价值和工业价值,尤其在抗癌药物和日化用品中有着广泛... 详细信息

糖苷类天然产物是植物中次级代谢产物的主要存在形式,具有重要的生物活性。通过糖基化修饰可以改变其水溶性、稳定性,产生特殊的生物活性和功能,因此易于商品化应用,具有重要的药用价值和工业价值,尤其在抗癌药物和日化用品中有着广泛应用。近年来糖苷类产物的生物合成也取得了重大的进展。以重要的糖苷化合物槲皮素为例介绍了糖苷化合物的生物合成,从糖基转移酶和前体供应等角度阐述了生物高产糖苷类化合物的工程策略,为利用合成生物学技术获得植物糖苷的高产菌株提供了技术参考。

关键词：植物糖苷槲皮素 UDP-糖代谢分子生物学酶

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钼酸铵分光光度法测定废水中的元素磷

中国环境监测 2005年第2期21卷 29-30,28页

作者：封悦科史箴何鸿治攀枝花市环境监测站四川攀枝花617000 四川省环境监测中心站四川成都610041

利用钼酸铵分光光度法测定了水样中的元素磷,发现该方法的灵敏度、准确度和稳定性都可以满足分析的要求,并且用元素磷标准样品进行了对比实验,分析误差在10%以内。

关键词：元素磷钼酸铵分光光度法

乳腺癌术后患侧上肢功能康复的分段性护理指导

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第三军医大学学报 2003年第23期25卷 2150-2151页

作者：陈显春封悦宋爽杨英王寅欢第三军医大学附属西南医院乳腺疾病中心重庆400038

我国乳腺癌的发病率已居女性恶性肿瘤首位，采取以手术为主的综合治疗仍然是目前治疗乳腺癌的有效方法。但乳腺癌手术范围大，组织损伤多，为了达到根治目的，有可能损伤与上肢活动有关的胸大肌、胸小肌及相关的神经、血管、淋巴管，造... 详细信息

我国乳腺癌的发病率已居女性恶性肿瘤首位，采取以手术为主的综合治疗仍然是目前治疗乳腺癌的有效方法。但乳腺癌手术范围大，组织损伤多，为了达到根治目的，有可能损伤与上肢活动有关的胸大肌、胸小肌及相关的神经、血管、淋巴管，造成患侧上肢功能障碍，影响患者日常生活。

关键词：乳腺癌术后功能康复护理指导

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颈外静脉留置针在乳癌化疗中的应用

第三军医大学学报 2002年第7期24卷 821-821,824页

作者：陈显春封悦宋爽杨英王泽惠第三军医大学附属西南医院普通外科重庆400038

静脉留置针作为一种输液工具，以其套管柔软，不易穿破血管，在静脉内留置时间较长等优点被广泛应用于临床，使得输液、输血更加方便、快捷。我科自2000年1月开始采用BD公司生产的INTIMA-II静脉留置针进行颈外静脉穿刺，对乳癌病人输入... 详细信息

静脉留置针作为一种输液工具，以其套管柔软，不易穿破血管，在静脉内留置时间较长等优点被广泛应用于临床，使得输液、输血更加方便、快捷。我科自2000年1月开始采用BD公司生产的INTIMA-II静脉留置针进行颈外静脉穿刺，对乳癌病人输入化疗药物，效果良好。

关键词：颈外静脉穿刺乳腺癌静脉留置针化疗

聚醚-酯嵌段共聚物提高聚氨酯弹性体水解稳定性的研究

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高分子材料科学与工程 2007年第4期23卷 105-109页

作者：殷宁亢茂青冯月兰封悦霞王心葵中国科学院山西煤炭化学研究所山西太原030001

采用双金属络合催化剂(DMC),以脂肪族己二酸系聚酯多元醇为起始剂,与环氧丙烷、环氧乙烷进行烷氧基化反应,制得聚醚酯多元醇用于聚氨酯弹性体(PUE)的合成,可得到综合性能优良的PUE材料。在相同硬段含量下,聚醚酯型PUE的力学性能接近纯... 详细信息

采用双金属络合催化剂(DMC),以脂肪族己二酸系聚酯多元醇为起始剂,与环氧丙烷、环氧乙烷进行烷氧基化反应,制得聚醚酯多元醇用于聚氨酯弹性体(PUE)的合成,可得到综合性能优良的PUE材料。在相同硬段含量下,聚醚酯型PUE的力学性能接近纯聚酯型PUE,优于纯聚醚型PUE,并且其耐水解性能得到较大的提高,接近纯聚醚型PUE。

关键词：双金属络合催化剂烷氧基化反应聚醚酯多元醇聚氨酯弹性体水解稳定性力学性能

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静脉留置针临床应用中的问题与对策

实用护理杂志 2002年第1期18卷 42-43页

作者：陈显春封悦宋爽杨英王泽惠第三军医大学西南医院普通外科重庆400038

静脉留置针又称套管针,作为头皮针的换代产品,以其操作简单、套管柔软、套管在静脉内留置时间长且不易穿破血管壁等优点,被广泛应用于临床.对该技术的临床应用及护理经验已有大量报道,而主要针对其成功的方面报道居多,实际上静脉留置针... 详细信息

静脉留置针又称套管针,作为头皮针的换代产品,以其操作简单、套管柔软、套管在静脉内留置时间长且不易穿破血管壁等优点,被广泛应用于临床.对该技术的临床应用及护理经验已有大量报道,而主要针对其成功的方面报道居多,实际上静脉留置针引起的问题值得思考,现将我们在临床应用中发现的问题与采取的相应对策报告如下.

关键词：静脉留置针临床应用套管针静脉炎