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微小巴贝斯虫烯醇化酶蛋白主要特征与抗原表位的生物信息学分析

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中国病原生物学杂志 2017年第2期12卷 136-139页

作者：刘相叶郑辰潘志华寇艳波郑葵阳江苏省免疫代谢重点实验室徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室江苏徐州221004

目的运用生物信息学方法分析微小巴贝斯虫烯醇化酶(BmEno)基因编码蛋白的主要特征和抗原表位。方法运用ORF Finder、PROSITE、ProtPar am、SignalP、TMpred、SOSUI、MotifScan、Bcepred、HNN等生物信息学在线分析软件,结合DNASTAR生物... 详细信息

目的运用生物信息学方法分析微小巴贝斯虫烯醇化酶(BmEno)基因编码蛋白的主要特征和抗原表位。方法运用ORF Finder、PROSITE、ProtPar am、SignalP、TMpred、SOSUI、MotifScan、Bcepred、HNN等生物信息学在线分析软件,结合DNASTAR生物信息学分析软件,预测BmEno蛋白的开放阅读框、特征结构域、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、可溶性、亲水性、表面可及性、二级结构和抗原表位。结果该蛋白由438个氨基酸组成,在349-362位存在烯醇化酶的特征结构域,分子式为C_(2098)H_(3366)N_(570)O_(648)S_(18),分子质量单位为47.5203ku,等电点理论值为5.98,有25个翻译后修饰位点,10个亲水性参数得分≥1.9的区域,6个柔韧性参数得分≥2.0的区域,18个表面可及性参数得分≥1.9的区域,7个潜在的B细胞抗原表位,15个潜在的T细胞抗原表位,为可溶性蛋白。结论微小巴贝斯虫烯醇化酶蛋白为可溶性蛋白,有多个抗原表位,具有潜在的免疫原性,可以作为微小巴贝斯虫的疫苗候选抗原。

关键词：微小巴贝斯虫烯醇化酶理化性质抗原表位生物信息学分析

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浅谈综合创新实验教学在病原生物学中的应用

现代职业教育 2019年第34期 42-43页

作者：寇艳波刘晓梅付琳琳汤仁仙徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室

病原生物学内容多、知识点散乱,给教学带来较大的挑战,同时也为培养学生综合素养和创新能力提供了无限的可能。分享综合创新实验教学改革在病原生物学中应用的几点体会。通过以动物模型为案例引导的病原生物学综合创新实验的开展,锻炼... 详细信息

病原生物学内容多、知识点散乱,给教学带来较大的挑战,同时也为培养学生综合素养和创新能力提供了无限的可能。分享综合创新实验教学改革在病原生物学中应用的几点体会。通过以动物模型为案例引导的病原生物学综合创新实验的开展,锻炼学生的动手能力,巩固对理论知识的理解和记忆,更重要的是可以培养学生的综合分析能力和实践创新能力。

关键词：病原生物学实验教学综合创新

充分利用医学教育资源提高生物类专业微生物学教学质量的思考

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继续医学教育 2020年第2期34卷 63-64页

作者：韦艳霞汤仁仙寇艳波张鹏徐州医科大学基础医学院病原生物学与免疫学教研室

微生物学是高等院校生物类专业的专业基础课,具有涉及面广、实用性强及发展迅速等特点,同时也是其他生物学理论和课程的基础,其教学质量对生物专业人才培养具有重要影响。徐州医科大学生物类专业是一门新开专业,如何结合医学院校自身教... 详细信息

微生物学是高等院校生物类专业的专业基础课,具有涉及面广、实用性强及发展迅速等特点,同时也是其他生物学理论和课程的基础,其教学质量对生物专业人才培养具有重要影响。徐州医科大学生物类专业是一门新开专业,如何结合医学院校自身教育优势及生物类专业特点和发展要求,努力探索一套科学合理、具有医学院校特色的微生物学教学体系,是目前医学院校生物类专业微生物教学的重要议题之一。

关键词：医学院校教育资源生物专业微生物学教学质量创新能力

可溶型小鼠细胞因子LIGHT/TNFSF14的原核表达、纯化及活性验证

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中国医学创新 2018年第32期15卷 27-31页

作者：颜晓庆刘飞刘庆亚寇艳波徐州医科大学江苏徐州221004

目的:前期研究发现小鼠细胞因子LIGHT(TNFSF14)能够抑制脂肪前体细胞分化,表达纯化LIGHT并验证其活性,将为进一步明确其调控脂肪前体细胞分化的机制提供坚实的基础。方法:以小鼠脾脏总cDNA为模板,通过PCR扩增得到LIGHT胞外段编码序列,... 详细信息

目的:前期研究发现小鼠细胞因子LIGHT(TNFSF14)能够抑制脂肪前体细胞分化,表达纯化LIGHT并验证其活性,将为进一步明确其调控脂肪前体细胞分化的机制提供坚实的基础。方法:以小鼠脾脏总cDNA为模板,通过PCR扩增得到LIGHT胞外段编码序列,并将其克隆至pGEX4T-1,经菌液PCR、限制性内切酶酶切及测序验证后获得重组质粒pGEX4T-1-LIGHTc。重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导蛋白表达后SDS-PAGE检测菌体破碎液上清中可溶型LIGHTc的存在。含有重组蛋白的上清经亲和纯化后获得GST-LIGHTc重组蛋白,重组蛋白经凝血酶消化后得到游离型LIGHTc单体,最后通过结肠癌细胞生长抑制实验验证LIGHTc单体的活性。结果:通过大肠杆菌异源表达和亲和纯化获得了GST-LIGHTc重组蛋白,经凝血酶处理后得到有活性的游离型小鼠LIGHT蛋白。结论:通过大肠杆菌异源表达及亲和纯化获得有活性的小鼠LIGHTc重组蛋白,为进一步研究LIGHT影响脂肪前体细胞分化的分子机制奠定了重要的材料基础。

关键词： LIGHT 肿瘤坏死因子异源表达纯化亲和纯化

徐州地区116株MRSA耐药性分析与分子流行病学调查

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中国感染控制杂志 2017年第2期16卷 104-108页

作者：纵帅徐萍萍顾兵郝婷婷寇艳波徐银海徐州医科大学附属医院江苏徐州221002 徐州市中心医院江苏徐州221002 徐州医科大学感染与免疫实验室江苏徐州221004

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染现状和耐药机制,为临床合理用药提供依据。方法收集徐州地区2012—2015年各类标本中分离的金黄色葡萄球菌(SA),用头孢西丁纸片扩散法初筛MRSA菌株,扩增mecA基因进行确认,K-B法检测MRSA对药... 详细信息

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染现状和耐药机制,为临床合理用药提供依据。方法收集徐州地区2012—2015年各类标本中分离的金黄色葡萄球菌(SA),用头孢西丁纸片扩散法初筛MRSA菌株,扩增mecA基因进行确认,K-B法检测MRSA对药物的敏感性,E-test法测定万古霉素的最低抑菌浓度(MIC),采用多重PCR进行葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因分型。结果 2012—2015年210株SA共检出MRSA116株,其中mecA基因阳性114株,MRSA总检出率为55.24%。MRSA对万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、替考拉宁和利奈唑胺的敏感率均为100%,对氯霉素和呋喃妥因的耐药率最低,分别为15.52%、1.72%,MRSA对10种抗菌药物的耐药率>80%;MRSA对青霉素类、氨基糖苷类、红霉素、喹诺酮类、磺胺类、利福平、四环素、克林霉素的耐药率高于甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。2012—2015年万古霉素对MRSA的MIC均为1.0μg/mL,MIC90均为1.5μg/mL,2015年发现1株MRSA的万古霉素MIC为2.0μg/mL。116株MRSA分型结果显示,SCCmecII型11株(9.48%),SCCmecIII型85株(73.28%),SCCmecIV型4株(IVa和IVb型各2株,均为1.72%),未分型MRSA16株(13.79%),未检出SCCmecI和V型。结论 MRSA呈严重的多重耐药,对万古霉素MIC无漂移,临床MRSA分离株以SCCmecIII型为主,临床应采取感染控制措施,控制MRSA感染。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MRSA 耐药性最低抑菌浓度 MIC 葡萄球菌染色体mec盒 SCCmec

hsp90α基因四环素诱导调控表达质粒的构建及功能验证

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中西医结合心血管病电子杂志 2018年第8期6卷 192-195页

作者：尚冰清周丹朱宏刘昱郭丽丽汤仁仙寇艳波徐州医科大学临床医学系院徐州医科大学免疫与代谢重点实验室

目的构建Hsp90α基因的单质粒四环素/强力霉素诱导表达系统,并验证其不同表达量对Hep G2肝癌细胞增殖的影响。方法通过PCR,分别从p Retro X-Tet-On Advanced质粒和pc DNA3.1-EGFP质粒中扩增rt TA表达盒和EGFP基因,依次将rt TA和EGFP基... 详细信息

目的构建Hsp90α基因的单质粒四环素/强力霉素诱导表达系统,并验证其不同表达量对Hep G2肝癌细胞增殖的影响。方法通过PCR,分别从p Retro X-Tet-On Advanced质粒和pc DNA3.1-EGFP质粒中扩增rt TA表达盒和EGFP基因,依次将rt TA和EGFP基因克隆入p TRE-Tight载体中,p Retro X-Tight载体中,获得EGFP标记的Tet-on单质粒系统。基于本系统,构建DOX诱导的Hsp90α表达质粒p Retro X-Hsp90α-EGFPTet-On,然后采用脂质体转染Hep G2细胞,以不同浓度(0,100,500,2500 ng/m L)的DOX诱导,通过荧光显微镜、荧光定量PCR以及Western blot检测EGFP和目的蛋白Hsp90α的表达。结果转染质粒载体后的Hep G2细胞经不同浓度的DOX 24 h后,RT-PCR和Western blot结果显示一致,随着DOX浓度的增大,Hsp90α基因表达量逐渐增加,DOX 500 ng/m L时时,基因表达的水平达到高峰;加入DOX 48 h后,细胞的增殖明显高于对照组,且存在剂量依赖性。结论该研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了Hsp90α基因在HepG2细胞内表达及促肿瘤细胞增殖的功能,为进一步探讨Hsp90α基因与肿瘤的增殖和侵袭之间的关系提供理论基础。

关键词：四环素基因表达调控 Hsp90α基因 HepG2细胞

106株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性分析与SCCmec基因分型及pvl基因研究

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中华医院感染学杂志 2016年第20期26卷 4561-4564页

作者：徐银海纵帅顾兵徐萍萍丁宸寇艳波王莹宇徐州医学院附属医院检验科江苏徐州221002 徐州市中心医院检验科江苏徐州221002 徐州医学院感染与免疫实验室江苏徐州221004

目的研究医院感染分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,对葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因进行分型,并检测杀白细胞素(PVL)毒力基因,以明确MRSA耐药表型和流行病学特征,为临床治疗提供参考。方法收集2011-2014年金黄色葡萄球菌(S... 详细信息

目的研究医院感染分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性,对葡萄球菌染色体mec(SCCmec)基因进行分型,并检测杀白细胞素(PVL)毒力基因,以明确MRSA耐药表型和流行病学特征,为临床治疗提供参考。方法收集2011-2014年金黄色葡萄球菌(SAU)179株并鉴定出MRSA,采用K-B法进行耐药表型检测,多重PCR进行SCCmec基因分型,普通PCR检测pvl基因携带情况。结果 179株SAU中共鉴定出106株MRSA,检出率为59.2%;MRSA对万古霉素、喹奴普汀/达福普汀、利奈唑胺和替考拉宁耐药率为0,对利福平、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶和呋喃妥因的耐药率分别为43.4%、21.7%和4.8%,对其他抗菌药物耐药率均>50.0%;106株MRSA被分为3个型别,其中SCCmecⅢ型77株(72.6%),SCCmecⅡ型11株(10.4%),SCCmecⅣ型2株(1.9%),未分型16株(15.1%);4株MRSA被检出pvl基因阳性,携带率为3.8%。结论 MRSA总体呈严重的多药耐药性,未发现万古霉素耐药株;临床MRSA分离株以SCCmecⅢ型为主,Ⅱ型次之;应重点关注携带pvl基因的SCCmecⅢ型多药耐药MRSA株。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌葡萄球菌染色体mec盒杀白细胞素

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酵母双杂交文库筛选HBX相互作用蛋白

交通医学 2018年第5期32卷 409-414页

作者：颜晓庆刘庆亚杨红宁汤仁仙寇艳波徐州医科大学急救与救援医学系急诊医学实验室江苏221004 徐州医科大学江苏省免疫与代谢重点实验室江苏221004

目的:筛选鉴定新的乙肝病毒X蛋白(hepatitis B viral X protein,HBX)相互作用蛋白。方法:以HBX为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4 DBD(DNA binding domain)融合表达,将人肝脏cDNA文库编码的蛋白与GAL4的AD区(activation domain)融... 详细信息

目的:筛选鉴定新的乙肝病毒X蛋白(hepatitis B viral X protein,HBX)相互作用蛋白。方法:以HBX为诱饵蛋白,将其与酿酒酵母转录因子GAL4 DBD(DNA binding domain)融合表达,将人肝脏cDNA文库编码的蛋白与GAL4的AD区(activation domain)融合表达。通过酵母双杂交筛选鉴定肝脏中与HBX相互作用的蛋白。筛选得到的阳性酵母转化子,经质粒提取和测序后,分析其所包含的序列编码的蛋白,通过再次验证,初步确定该蛋白是否与HBX具有相互作用。结果:筛选得到5个潜在的能与HBX相互作用的蛋白。结论:通过酵母双杂交c DNA文库筛选,得到多个潜在的HBX相互作用蛋白,进一步的验证及功能研究将对揭示HBX促进肝癌发生的机制起到重要的推动作用。

关键词：乙肝病毒X蛋白酵母双杂交肝癌

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稻瘟病菌效应子研究进展

中国水稻科学 2024年

作者：卢椰子邱结华蒋楠寇艳君时焕斌中国水稻研究所水稻生物育种全国重点实验室

稻瘟病菌引起的稻瘟病是危害最严重的水稻病害之一。在侵染过程中，稻瘟病菌向水稻细胞释放大量的效应子，改变水稻的生理状态和代谢，并抑制免疫反应以促进侵染。深入了解稻瘟病菌效应子特性及其与水稻之间的作用机制，可为稻瘟病病防... 详细信息

稻瘟病菌引起的稻瘟病是危害最严重的水稻病害之一。在侵染过程中，稻瘟病菌向水稻细胞释放大量的效应子，改变水稻的生理状态和代谢，并抑制免疫反应以促进侵染。深入了解稻瘟病菌效应子特性及其与水稻之间的作用机制，可为稻瘟病病防治提供重要参考。本文对稻瘟病菌效应子分泌进入细胞的机制，稻瘟病菌效应子对稻瘟病抗性的复杂调控机制，稻瘟病菌效应子的分类等方面研究进展进行综述，同时讨论了当前稻瘟病菌效应子研究中存在的问题，并对未来的研究方向进行了展望，以期为稻瘟病菌引起的稻瘟病防治提供参考依据。

关键词：水稻病害病原真菌稻瘟病效应子