检索结果-南通市图书馆

微生物学报 2013年第10期53卷 1011-1017页

作者：宿玲恰陈晟吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

随着生物技术的不断发展,大肠杆菌胞外分泌分子机理日渐明晰,大肠杆菌表达系统成为实现规模化制备胞外重组蛋白的途径之一。本文综述了大肠杆菌α-溶血素分泌途径的转运机制及应用前景。

关键词：大肠杆菌 α-溶血素分泌途径基质表达重组蛋白

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淀粉基未来食品及其制备方法研究进展

食品与生物技术学报 2021年第12期40卷 5-16页

作者：宿玲恰吴敬食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

随着现代社会经济的快速发展,人们生活水平显著提高,饮食需求从吃饱求生存转变为吃好求健康,未来食品成为食品领域学术界和产业界关注的热点。以淀粉基食品为代表的碳水化合物为人体主要能量来源,但淀粉基食品在人体内易消化后造成能量... 详细信息

随着现代社会经济的快速发展,人们生活水平显著提高,饮食需求从吃饱求生存转变为吃好求健康,未来食品成为食品领域学术界和产业界关注的热点。以淀粉基食品为代表的碳水化合物为人体主要能量来源,但淀粉基食品在人体内易消化后造成能量过剩,带来一系列亚健康问题。在加工过程中可通过改变淀粉及其部分降解产物分子结构或键型来降低其热量,同时还兼具益生功能,这有利于迎合未来大众消费者对营养健康的需求,已成为未来食品领域研究的重要组成部分。作者概述了淀粉改性产品种类及其生化特征和生理功能,并重点阐述了其制备方法研究进展,可为进一步开发和生产淀粉基未来食品提供理论基础和技术指导。

关键词：淀粉淀粉加工酶健康食品

重组大肠杆菌产Streptomyces ***1来源木聚糖酶的摇瓶发酵优化

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中国生物工程杂志 2013年第2期33卷 41-46页

作者：何洁宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

为了实现来源于Streptomyces ***1的木聚糖酶的高效胞外分泌表达,对*** BL21(DE3)/pET20b(+)/coe/xynA基因工程菌的发酵产酶诱导条件进行优化,获得最优的诱导条件为25℃发酵6 h后添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。在此基础上对发酵培养基... 详细信息

为了实现来源于Streptomyces ***1的木聚糖酶的高效胞外分泌表达,对*** BL21(DE3)/pET20b(+)/coe/xynA基因工程菌的发酵产酶诱导条件进行优化,获得最优的诱导条件为25℃发酵6 h后添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。在此基础上对发酵培养基进一步优化,得到最优培养基成分为:甘油11 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨8 g/L,磷酸盐浓度89 mmol/L,镁离子4mmol/L。最终酶活达到780.2 U/ml,为未优化前的2.2倍,是目前大肠杆菌摇瓶发酵产木聚糖酶的最高表达水平,为实现该酶的工业化生产奠定基础。

关键词：链霉菌木聚糖酶重组大肠杆菌发酵优化

重组4-α-糖基转移酶转化淀粉制备大元环糊精的条件优化

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食品与生物技术学报 2018年第12期37卷 1248-1254页

作者：朱荣宿玲恰吴敬食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏无锡214122 江南大学生物工程学院江苏无锡214122

4-α-糖基转移酶能够以淀粉为底物通过分子内转糖基作用制备大元环糊精。本研究成功构建了产超嗜热菌Aquifex aeolicus来源的4-α-糖基转移酶重组菌的*** BL21 (DE3)/pET-24a(+)-AaAM。对重组菌进行摇瓶发酵,培养27h破壁上清酶活达到0.9... 详细信息

4-α-糖基转移酶能够以淀粉为底物通过分子内转糖基作用制备大元环糊精。本研究成功构建了产超嗜热菌Aquifex aeolicus来源的4-α-糖基转移酶重组菌的*** BL21 (DE3)/pET-24a(+)-AaAM。对重组菌进行摇瓶发酵,培养27h破壁上清酶活达到0.99 U/mL。以马铃薯淀粉为底物,对酶转化生成大元环糊精进行了条件优化。结果表明,在底物质量浓度为1 g/dL时,经异淀粉酶脱支预处理后,调节初始pH为7.0,反应温度为75℃,加酶量为20 U/g,在10 h时大元环糊精的转化率达到最高24.8%,为大元环糊精的工业生产奠定了基础。

关键词： 4-α-糖基转移酶大元环糊精酶转化条件优化

Thermobifida fusca麦芽三糖淀粉酶的重组表达及其在麦芽三糖制备中的应用

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食品与发酵工业 2020年第5期46卷 23-30页

作者：胡凡宿玲恰吴敬食品科学与技术国家重点实验室(江南大学) 江苏无锡214122 工业生物技术教育部重点实验室(江南大学) 江苏无锡214122

麦芽三糖淀粉酶以淀粉或麦芽糊精为原料,可生产麦芽三糖,在食品、饮料等行业具有广泛的应用前景。实验将Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌WS11中进行重组表达,并进行酶学性质分析,重组酶的最适温度和pH分别... 详细信息

麦芽三糖淀粉酶以淀粉或麦芽糊精为原料,可生产麦芽三糖,在食品、饮料等行业具有广泛的应用前景。实验将Thermobifida fusca NTU22来源的麦芽三糖淀粉酶在枯草芽孢杆菌WS11中进行重组表达,并进行酶学性质分析,重组酶的最适温度和pH分别是55℃和6.0。在此基础上探究了重组酶作用于麦芽糊精生产麦芽三糖的最佳条件。结果表明,以15%浓度的麦芽糊精(DE 5-7)作为底物时,酶转化的最佳条件是温度55℃、pH 5.5、加酶量60 U/g(底物)、普鲁兰酶加酶量32 U/g(底物)、反应时间11 h,此时得到麦芽三糖转化率44.4%。该研究为工业制备麦芽三糖提供了理论依据。

关键词：麦芽三糖淀粉酶 Thermobifida fusca 枯草芽孢杆菌麦芽糊精麦芽三糖

提高源自Bacillus circulans 251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用

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中国生物工程杂志 2019年第5期39卷 96-104页

作者：杜立宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122 江南大学教育部食品安全国际合作联合实验室无锡214122

将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓... 详细信息

将B. circulans 251β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50. 4%提高至71. 9%。为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B. circulans 251β-CGTase突变体。利用低底物浓度的96孔板4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷(EPS)显色法,最终筛选得到了一株对麦芽糖亲和性提高的突变体M234I。将野生型β-CGTase和突变体酶M234I进行蛋白质纯化,测定其酶学性质。结果表明,突变体的比活为345. 25U/mg,野生型则为357. 63U/mg;突变体M234I对麦芽糖的K_m为0. 258 2mmol/L,仅为野生型(0. 474 9mmol/L)的54. 4%,对麦芽糖的亲和性显著提高;突变体的最适温度、最适p H较野生型未发生较大变化。以麦芽糊精(DE值16)为底物,将突变体M234I用于多酶复配体系生产海藻糖,酶反应结果表明海藻糖的转化率最高达74. 9%,较野生型β-CGTase提高约3%。

关键词： β-CGTase 易错PCR 分子改造亲和性海藻糖转化

共表达磷脂酶C促进葡萄糖异构酶在大肠杆菌中的胞外表达

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食品与生物技术学报 2017年第3期36卷 236-242页

作者：姜琪宿玲恰吴敬陈晟食品科学与技术国家重点实验室江南大学江苏无锡214122

磷脂酶C(PLC)能够水解细胞膜主要成分磷脂,使细胞膜通透性增强,从而能够释放出胞内物质。作者构建了PLC与天然胞内定位蛋白葡萄糖异构酶(GI)共表达的重组大肠杆菌,摇瓶发酵胞外上清液中GIC酶活达到3.4 U/m L,占胞外和胞内总酶活的93%,表... 详细信息

磷脂酶C(PLC)能够水解细胞膜主要成分磷脂,使细胞膜通透性增强,从而能够释放出胞内物质。作者构建了PLC与天然胞内定位蛋白葡萄糖异构酶(GI)共表达的重组大肠杆菌,摇瓶发酵胞外上清液中GIC酶活达到3.4 U/m L,占胞外和胞内总酶活的93%,表明GIC成功实现了胞外表达。将胞外上清液中的GIC进行分离纯化和酶学定性,发现其比活为12.1 U/mg,最适反应温度为80℃,最适pH为10,均与对照菌单独表达的GIO性质基本一致。在此基础上,对上述重组菌进行3 L发酵罐培养,发酵周期为24 h,酶活达到17.7 U/m L,表明其良好的工业化放大生产前景。

关键词：磷脂酶C 葡萄糖异构酶共表达胞外表达

重组嗜热栖热菌海藻糖合酶制备海藻糖的工艺条件优化

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基因组学与应用生物学 2015年第7期34卷 1461-1467页

作者：宿玲恰张悦吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

海藻糖具有独特的生物活性,在多种行业应用广泛。海藻糖合酶能够专一性催化麦芽糖一步生成海藻糖。本文通过PCR扩增获得了来源于Thermus thermophilus ATCC33923的海藻糖合酶基因Tre S,构建了基因工程菌*** BL21(DE3)/p ET-24a(+)-Tre ... 详细信息

海藻糖具有独特的生物活性,在多种行业应用广泛。海藻糖合酶能够专一性催化麦芽糖一步生成海藻糖。本文通过PCR扩增获得了来源于Thermus thermophilus ATCC33923的海藻糖合酶基因Tre S,构建了基因工程菌*** BL21(DE3)/p ET-24a(+)-Tre S。工程菌在摇瓶中发酵28 h时,胞内海藻糖合酶酶活达到最高值为6.4 U/m L。进一步研究了该重组酶制备海藻糖的影响因素,发现当以10%麦芽糖为底物,初始反应p H 7.5,加酶量为15 U/g麦芽糖,40℃,150 r/min反应24 h,转化率达到最高值,为49.0%。当底物浓度提高至20%~40%时,转化率为45.4%~46.2%。

关键词：嗜热栖热菌海藻糖合酶海藻糖克隆表达

Thermobifida fusca海藻糖合成酶基因的克隆表达及发酵优化

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中国生物工程杂志 2013年第8期33卷 93-99页

作者：罗锋段绪果宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

将来源于嗜热单孢菌(Thermobifida fusca)的海藻糖合成酶基因进行克隆表达,构建重组菌*** BL 21(DE3){pET-24a(+)/Tres}。并对基因工程菌的发酵产酶条件进行优化,得到最优培养基成分为:甘油12 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨12g/L,磷酸盐浓度6... 详细信息

将来源于嗜热单孢菌(Thermobifida fusca)的海藻糖合成酶基因进行克隆表达,构建重组菌*** BL 21(DE3){pET-24a(+)/Tres}。并对基因工程菌的发酵产酶条件进行优化,得到最优培养基成分为:甘油12 g/L,酵母粉24 g/L,蛋白胨12g/L,磷酸盐浓度60mmol/L,Zn2+2mmol/L。最佳培养条件为:装液量20 ml(250 ml摇瓶),发酵2 h后25℃诱导并添加终浓度为0.4 mmol/L的IPTG。优化后的最终发酵酶活达到28.6 U/ml,为未优化前的3.4倍,是目前国内报道大肠杆菌摇瓶发酵产海藻糖合成酶的最高表达水平,为该酶的工业化生产奠定了基础。

关键词：嗜热单孢菌海藻糖合成酶重组大肠杆菌发酵优化

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多酶复配合成海藻糖及其分离提取的研究

中国生物工程杂志 2019年第7期39卷 65-70页

作者：封金云宿玲恰吴敬江南大学食品科学与技术国家重点实验室无锡214122 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

以大米淀粉为原料,多酶复配制备海藻糖。确定了实验室条件下多酶复配生产海藻糖的最佳条件:以15%(m/V)大米淀粉为底物,催化温度45℃、pH 6. 0、DE值16、α/β-CGTase加量为1. 4U/ml、催化28h后糖化处理12h,海藻糖转化率由双酶法催化的50... 详细信息

以大米淀粉为原料,多酶复配制备海藻糖。确定了实验室条件下多酶复配生产海藻糖的最佳条件:以15%(m/V)大米淀粉为底物,催化温度45℃、pH 6. 0、DE值16、α/β-CGTase加量为1. 4U/ml、催化28h后糖化处理12h,海藻糖转化率由双酶法催化的50%提高至73%。在底物浓度为25%(m/V)时,海藻糖产量最高达到182. 5g/L,随后对高浓度海藻糖进行分离提取,分别考察了活性炭脱色、离交分离、浓缩结晶等对海藻糖提取效率的响。

关键词：海藻糖多酶复配酶催化反应分离提取