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2020—2022年青岛地区手足口病病原谱及柯萨奇病毒A6型青岛株VP1区基因特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第8期44卷 713-717页

作者：宫金伶肖思颖梁荣香朱顺昕孙睿山东省青岛市疾病预防控制中心病毒性疾病检验所青岛266000

目的了解2020—2022年青岛市手足口病病原学特征和柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CVA6)的VP1基因进化特征,为手足口病的防控工作提供依据。方法利用荧光RT-PCR对青岛地区2020—2022年的手足口病患者咽拭子样本进行总肠道病毒(EV)、... 详细信息

目的了解2020—2022年青岛市手足口病病原学特征和柯萨奇病毒A6型(coxsackievirus A6,CVA6)的VP1基因进化特征,为手足口病的防控工作提供依据。方法利用荧光RT-PCR对青岛地区2020—2022年的手足口病患者咽拭子样本进行总肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)、CVA16、CVA6和CVA10检测,并对CVA6阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定,以MEGA-X软件进行系统发育及分子特征分析。结果1645份手足口病患者样本中肠道病毒总阳性率为80.73%(1328/1645)。EV71、CVA16、CVA6、CVA10及其他肠道病毒构成比分别为0.08%(1/1328)、19.65%(261/1328)、68.15%(905/1328)、0.98%(13/1328)、11.14%(148/1328),5岁以下儿童占全部病例的75.68%(1245/1645),占重症病例的100%(2/2)。获得的45株CVA6 VP1区基因测序绘制了基因树,属于D3a亚型,基因进化分析其VP1区蛋白质发生了10处氨基酸的非同义突变。结论2020—2022年青岛地区手足口病以CVA6 D3a亚型为主要流行株,且在5岁以下高发。

关键词：手足口病病原谱流行病学特征柯萨奇病毒A6型系统进化分析

2010-2012年青岛地区手足口病病原谱及柯萨奇 A10型的分子流行病学研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2014年第10期34卷 731-736页

作者：柴青宫金伶赵丹史晓燕于萍汪照国青岛市疾病预防控制中心微生物与寄生虫检验科 266033

目的：阐明2010-2012年青岛地区手足口病（ HFMD）病原谱及相关柯萨奇病毒A10（ CVA10）型基因特征。方法用荧光RT-PCR法对HFMD患者咽拭子标本进行总肠道病毒（ EV）、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和肠道病毒71（EV71）型检测，然后用半巢... 详细信息

目的：阐明2010-2012年青岛地区手足口病（ HFMD）病原谱及相关柯萨奇病毒A10（ CVA10）型基因特征。方法用荧光RT-PCR法对HFMD患者咽拭子标本进行总肠道病毒（ EV）、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和肠道病毒71（EV71）型检测，然后用半巢式反转录PCR进行肠道病毒VP1基因部分序列扩增，再结合序列分析鉴定血清型；对CVA10阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定，用MEGA5．0软件进行系统发育分析及分子特征分析。结果2010-2012年间，共检测1919个手足口病门诊轻症病例和1336个住院重症病例；门诊轻症病例中，2010年和2012年以CVA16为主，各占轻症病例总阳性数的53％和73％，而2011年以EV71为主，占轻症病例总阳性数的78％；住院重症病例中，EV71为2010年和2011年主要病原，各占重症病例总阳性数的70％和86％；其他型别（非CVA16、非EV71）肠道病毒在2012年住院重症病例中成为主要病原，占重症病例总阳性数的44％；2010-2012年分别检出其他型别肠道病毒19株、16株和22株，其中CVA10检出率最高；23株CVA10的VP1全长基因序列进化分析表明这23株CVA10病毒全部属于C基因型，它们VP1基因氨基酸序列同源性为97．3％～100．0％，与其他地区同期参考株相比无显著差异。结论2010-2012年间，CVA16和EV71是引起青岛地区手足口病流行的主要病原，同时伴有多种其他型别肠道病毒流行，其中C基因型CVA10分离率较高，它们相互间同源性较高，与其他地区同期参考株相似。

关键词：手足口病肠道病毒柯萨奇病毒A10 系统进化分析

新城疫病毒通过上调小鼠NK细胞TRAIL表达杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞

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细胞与分子免疫学杂志 2015年第5期31卷 599-604页

作者：宋德志梁莹樊晓晖殷君宫金伶赖振屏高灵茜广西医科大学基础医学院微生物学教研室广西南宁530021 广西中医药大学第一附属医院检验科广西南宁530023 青岛市疾病预防控制中心山东青岛266033

目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后... 详细信息

目的观察经腹腔注射的新城疫病毒(NDV)对小鼠脾脏NK细胞表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及杀伤Novikoff小鼠肝癌细胞的影响,并探讨其与γ干扰素(IFN-γ)的关系。方法给予BALB/c小鼠和IFN-γR-/-B6.129S7小鼠腹腔注射NDV,12 h后,用ELISA检测小鼠外周血IFN-γ浓度;分离小鼠脾脏NK细胞,用反转录PCR法检测NK细胞中TRAIL mRNA转录水平,Western blot法检测脾脏NK细胞中TRAIL蛋白水平,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。结果腹腔注射NDV可以提高BALB/c小鼠外周血IFN-γ浓度,上调小鼠脾脏NK细胞TRAIL mRNA和蛋白表达水平,增强小鼠脾脏NK细胞体外条件下对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性。TRAIL中和抗体能抑制NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤作用。IFN-γR-/-B6.129S7小鼠接受NDV注射后脾脏NK细胞的TRAIL表达无显著增加,NDV激活的NK细胞对Novikoff肝癌细胞的杀伤活性显著低于IFN-γ受体正常的BALB/c小鼠。结论腹腔注射NDV可增强脾脏NK细胞的体外抗肿瘤活性,其机制之一是通过IFN-γ受体途径上调NK细胞表面TRAIL蛋白表达来发挥作用。

关键词：新城疫病毒 NK细胞肿瘤坏死因子相关凋亡配体肝癌细胞

青岛地区2012—2014年甲型H1N1流感病毒基因特征

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中国公共卫生 2016年第8期32卷 1096-1100页

作者：赵丹苏志磊于萍柴青宫金伶史晓燕汪照国山东省青岛市疾病预防控制中心 266033

目的了解2012—2014年山东省青岛地区人群甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒流行株基因特征及变异趋势。方法收集2012年4月—2014年3月青岛地区流感样病例咽试子2 100份,分离鉴定136株,随机抽取51株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增血凝... 详细信息

目的了解2012—2014年山东省青岛地区人群甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒流行株基因特征及变异趋势。方法收集2012年4月—2014年3月青岛地区流感样病例咽试子2 100份,分离鉴定136株,随机抽取51株,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白(MP)3个基因片段全长,并进行序列测定,对各基因片段进行系统发育分析及基因和氨基酸位点变异分析。结果 HA、NA进化树分析发现,2012—2014年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒分为3个分支;HA蛋白的氨基酸位点分析显示,部分毒株在抗原决定位点,受体结合位点以及其他位点上发生一定程度的变异,涉及15个氨基酸位点变化;NA蛋白的氨基酸位点分析显示,与疫苗株比较有10处氨基酸位点发生了明显变异;M2蛋白分析显示所有毒株均对金刚烷胺类药物耐药。结论 2012—2014年青岛地区流行的甲型H1N1流感病毒在抗原和受体结合位点均发生基因变异及抗药毒株的出现对流感防控提出更大的挑战。

关键词：甲型H1N1流行性感冒(流感)病毒 HA基因 NA基因基因特征

2013 年青岛地区手足口病病原谱及三种主要肠道病毒青岛分离株的基因特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第10期35卷 765-770页

作者：史晓燕柴青宫金伶庄桂丽赵丹张秀莲汪照国青岛市疾病预防控制中心微生物与寄生虫检验科 660033

目的阐明2013年青岛地区手足口病（HFMD）病原谱及肠道病毒71（EV71）型、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和柯萨奇病毒A6（CVA6）型青岛分离株的基因特征. 方法用荧光RT-PCR法检测2013年青岛地区HFMD患者咽拭子标本中的总肠道病毒（ EV）、... 详细信息

目的阐明2013年青岛地区手足口病（HFMD）病原谱及肠道病毒71（EV71）型、柯萨奇病毒A16（CVA16）型和柯萨奇病毒A6（CVA6）型青岛分离株的基因特征. 方法用荧光RT-PCR法检测2013年青岛地区HFMD患者咽拭子标本中的总肠道病毒（ EV）、EV71、CVA16和CVA6,对阳性分离株进行VP1基因全长序列扩增、基因序列测定及系统进化分析. 结果 2013年共检测841个手足口病轻症病例和107 个重症病例,肠道病毒阳性率64 .3%,主要病原构成为EV71 （ 44 .8%）、CVA6（28.2%）和CVA16（9.5%）. CVA6超过CVA16成为手足口病的第二大致病原,占3岁以下儿童肠道病毒构成的42 .7%,占重症病例分离病原的22 .2%,在手足口病病原构成中所占比例随年龄增长呈下降趋势（ P〈0 .001 ）. VP1全长的系统发生分析显示,2013年EV71属于C4基因亚型中的C4a,CVA16属于B1亚型的B1a和B1b,与其他地区同期参考株无明显差别;CVA6的VP1序列分为A^F 6个基因组,青岛地区CVA6分离株分处A和D基因组,2013年CVA6青岛分离株83 .9%位于A基因组,16 .1%位于D基因组;2012年CVA6青岛分离株66 .7%位于A基因组,33 .3%位于D基因组;2008—2011年CVA6青岛分离株全部位于D基因组. 结论 EV71、CVA6和CVA16是2013年青岛地区手足口病的主要病原;CVA6所占病原构成随年龄增长呈下降趋势;EV71 流行亚型为C4a, CVA16流行亚型为B1a和B1b;CVA6优势毒株在2008—2013年间显示出由D基因组向A基因组的改变.

关键词：手足口病肠道病毒系统进化分析基因组

2015年青岛地区手足口病主要病原谱及基因特征分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第12期37卷 903-909页

作者：张凤史晓燕苏志磊宫金伶柴青曲剑英汪照国青岛市疾病预防控制中心(青岛市预防医学研究院)微生物检验科 266033

目的阐明2015年青岛地区手足口病（HFMD）流行特征和病原谱变化及3种主要肠道病毒分离株的基因特征。方法描述性分析2015年青岛地区手足口病病例的年龄、月份分布情况。用荧光RT-PCR法对2015年青岛地区HFMD患者咽拭子标本进行肠道病毒... 详细信息

目的阐明2015年青岛地区手足口病（HFMD）流行特征和病原谱变化及3种主要肠道病毒分离株的基因特征。方法描述性分析2015年青岛地区手足口病病例的年龄、月份分布情况。用荧光RT-PCR法对2015年青岛地区HFMD患者咽拭子标本进行肠道病毒通用、肠道病毒71型、柯萨奇病毒A16型和柯萨奇病毒A6型，对阳性分离株进行VPl基因全长序列扩增及基因序列测定．以MEGA7．0软件进行系统发育及分子特征分析。结果2015年共检测1176例手足口病病例，其中肠道病毒阳性率为68．4％，主要病原构成为CA6（41．4％）、EV71（31．6％）和CAl6（15．3％）。5岁及以下儿童占总病例数的80．3％。CA6占3岁以下儿童肠道病毒构成的48．9％。其中EV71流行亚型为C4a，CAl6优势流行亚型为Blb。CA6优势流行亚型为A基因组。结论CA6、EV71和CAl6是导致2015年青岛地区手足口病流行的3种主要病原。2015年CA6超过EV71成为第一致病原，主要感染3岁以下儿童。EV71的流行亚型不变。CAl6优势流行亚型为Blb。CA6优势分离株主要是A基因组。并且内部进化为多个小的分支，与A基因组内部的2013年青岛分离株处于不同分支。

关键词：手足口病肠道病毒系统进化分析 VPl基因

青岛市柯萨奇病毒A12型VP1区基因特征及相关重症手足口病临床表现

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中华微生物学和免疫学杂志 2018年第9期38卷 658-664页

作者：史晓燕张艳辉苏志磊赵丹柴青宫金伶张凤汪照国青岛市疾病预防控制中心青岛市预防医学研究院266033 青岛市妇女儿童医院 266034

目的了解2011—2016年柯萨奇病毒A12型（CV-A12）青岛分离株的基因特征及所致重症手足口病临床特点.方法人横纹肌肉瘤（human rhabdomyosarcoma,RD）细胞和人喉癌（human laryngeal carcinoma,Hep-2）细胞分离自2011—2016年青岛地区... 详细信息

目的了解2011—2016年柯萨奇病毒A12型（CV-A12）青岛分离株的基因特征及所致重症手足口病临床特点.方法人横纹肌肉瘤（human rhabdomyosarcoma,RD）细胞和人喉癌（human laryngeal carcinoma,Hep-2）细胞分离自2011—2016年青岛地区儿童手足口病及部分疱疹性咽峡炎和流感样病例咽拭子标本中非EV-A71、非CV-A16毒株,半巢式反转录PCR扩增肠道病毒部分VP1序列,结合序列分析鉴定CV-A12毒株;对全部CV-A12分离株进行VP1基因全长序列扩增及基因序列测定,以MEGA7.0软件进行遗传进化及分子特征分析;收集CV-A12所致重症手足口病临床资料并分析其特征.结果青岛市手足口病、疱疹性咽颊炎和儿童流感样病例中CV-A12分离率分别为0.3％（18/6798）、1.2％（2/169）和0.1％（1/676）.CV-A12感染所致手足口病在2013年及以前以轻症病例为主（84.6％,11/13）,2013年以后以伴有神经系统症状的住院重症病例为主（100％,5/5）.VP1区遗传进化分析显示,全球CV-A12分为A、B两个基因型,2011—2016年青岛地区毒株均属于B基因型且88.9％（16/18）位于B2亚型;2013年后致手足口病重症病例毒株均为B2亚型B2b分支毒株.结论 CV-A12是青岛儿童手足口病、疱疹性咽颊炎和流感样疾病的病原之一;B2亚型毒株为近年来青岛CV-A12主要流行毒株,其感染所致手足口病能导致神经系统损害.

关键词：柯萨奇病毒A12 手足口病重症遗传进化分析

4株手足口病相关柯萨奇病毒A4型的全基因组特征

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第1期41卷 50-55页

作者：王伟栋贾光宫金伶柴青苏志磊张凤史晓燕汪照国青岛市预防医学研究院青岛市疾病预防控制中心微生物检验科266033

目的了解青岛地区流行的柯萨奇病毒A4型(CVA4)的全基因组特征。方法选取2013—2015年间青岛地区流行的4株CVA4病毒,通过一步法RT-PCR对毒株进行全基因组扩增,采用MEGA7.0软件进行序列比对及系统进化分析,采用similarity plots 3.5.1软... 详细信息

目的了解青岛地区流行的柯萨奇病毒A4型(CVA4)的全基因组特征。方法选取2013—2015年间青岛地区流行的4株CVA4病毒,通过一步法RT-PCR对毒株进行全基因组扩增,采用MEGA7.0软件进行序列比对及系统进化分析,采用similarity plots 3.5.1软件进行基因重组分析。结果进化分析显示:在全基因组、P1区、P2区及P3区系统进化树上:毒株HS312/QD/CHN/2013和HS605/QD/CHN/2014与国内早期分离株共处同一分支;毒株FY218/QD/CHN/2015与2013年江苏温州分离株CV-A4/P1033/2013/China一起在各基因进化树上形成一独立分支;毒株HS144/QD/CHN/2014在P1区进化树上与HS312/QD/CHN/2014、HS605/QD/CHN/2014及国内早期分离株共处同一分支,但在全基因组、P2区及P3区进化树上各形成单一分支。重组分析提示:毒株HS144/QD/CHN/2014与2013年大陆流行的CVA2型毒株CV-A2/P373/2013/China在2C区~3D区间(5081~7301)发生基因重组;毒株FY218/QD/CHN/2015与毒株CV-A4/P1033/2013/China同源,都与CVA2型分离株CV-A2/P373/2013/China在2A区~2B区间(3821~4161)发生基因重组。结论青岛地区流行的CVA4在全基因组层面有明显的遗传多样性。

关键词：手足口病柯萨奇病毒A4型系统发育基因重组

青岛市急性呼吸道感染儿童中人副流感病毒3型血凝素-神经氨酸酶基因特征分析

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中华预防医学杂志 2022年第5期56卷 626-631页

作者：郝康宇刘子然宫金伶孙睿张凤王文静高嘉禾汪照国青岛大学公共卫生学院流行病学与卫生统计系青岛266071 青岛市疾病预防控制中心青岛市预防医学研究院青岛266033 山东省青岛第二中学青岛266061

探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型(HPIV-3)的感染情况,并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)基因特征。本研究为横断面研究,青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019年12... 详细信息

探讨山东省青岛市地区急性呼吸道感染患儿人副流感病毒3型(HPIV-3)的感染情况,并分析HPIV-3血凝素-神经氨酸酶蛋白(HN)基因特征。本研究为横断面研究,青岛市妇女儿童医院、青岛大学附属医院西海岸院区及崂山院区在2018年1月至2019年12月期间,每月随机采集急性呼吸道感染(ARTI)儿科患者的咽拭子样本,总共1674份,采用多重实时荧光逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,筛查HPIV-3阳性样本。采用巢式PCR方法扩增HPIV-3阳性样本HN全长基因并进行序列测定,序列结果与GenBank中HPIV-3的代表株进行对比分析,建立系统进化树。结果显示,1674份咽拭子样本中,HPIV-3阳性有90份,检出率为5.37%,其中,6岁以下儿童占97.78%(88份)。HPIV-3阳性病例主要分布在春季和夏季。通过巢式PCR方法扩增得到44株HPIV-3 HN基因全长序列,序列比对及进化分析表明,HPIV-3 HN基因属于C3基因亚型的C3a和C3b分支,其中,C3a亚型有30株,C3b亚型有14株。44株青岛分离株之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.0%~100.0%和98.5%~100.0%。综上,2018至2019年间,HPIV-3 C3基因型的C3a和C3b分支在山东省青岛市地区循环流行,其HN基因型变异较小,进化上具有一定的地域特征。

关键词：副流感病毒3型,人呼吸道感染血凝素-神经氨酸酶蛋白系统进化分析