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VD3抑制LPS诱导牛ISCs与类器官的异常增殖与迁移

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VD3抑制LPS诱导牛ISCs与类器官的异常增殖与迁移

作者：庄玉洁河南农业大学

学位级别：硕士

肠道干细胞（Intestinal stem cells,ISCs）的增殖和迁移能力与肠道功能完整性和自我更新密切相关,病原体、毒素以及肠道菌群失调等都会影响其正常功能,严重影响家畜的健康。当ISCs遇到炎性介质,可激活多种信号转导系统,引起炎症反应,... 详细信息

肠道干细胞（Intestinal stem cells,ISCs）的增殖和迁移能力与肠道功能完整性和自我更新密切相关,病原体、毒素以及肠道菌群失调等都会影响其正常功能,严重影响家畜的健康。当ISCs遇到炎性介质,可激活多种信号转导系统,引起炎症反应,破坏其修改能力。Wnt/β-catenin信号通路就是肠干细胞增殖的关键信号通路,参与肠稳态形成。VD具有抗炎、抗氧化、抗病毒等生物活性,同时也参与Wnt/β-catenin信号通路调节。但是在炎性状态下,VD抗炎性与Wnt/β-catenin信号在肠道修复互作关系不清楚。本研究用LPS诱导牛空肠隐窝干细胞与类器官,构建炎性模型,研究VD3与Wnt/β-catenin互作机制,探讨VD3在影响ISCs迁移和增殖能力是否与Wnt/β-catenin信号通路相关。研究内容如下:（1）牛肠类器官及其隐窝干细胞的分离培养本试验分离培养胎牛空肠,得到空肠类器官,形态上具有肠上皮组织结构;并从牛空肠类器官分离培养获得隐窝干细胞,用免疫荧光染色鉴定牛空肠干细胞标记物Lgr5+表达呈阳性,后续试验建立理想的体外模型。（2）LPS对牛肠道隐窝干细胞增殖与迁移的影响不同浓度LPS处理牛肠道隐窝干细胞24 h,收集细胞,CCK-8检测细胞活性,RT-q PCR、Western blot等方法检测相关主要炎性因子和蛋白的表达水平,细胞增殖和迁移能力。结果显示10μg/m L LPS显著影响细胞活力,并且诱导细胞24 h,TNF-α、IL-1β、IL-6等炎性因子显著上调（P<0.05）;Ki67、PCNA、Occludin、Claudin-1、Claudin-3、N-Cad等增殖与紧密连接基因水平升高（P<0.05）;细胞迁移能力增加;LPS为100μg/m L时迁移受到抑制。因此用浓度为10μg/m L的LPS诱导24 h构建炎性模型。（3）VD3对LPS刺激后ISCs增殖与迁移的影响探究VD3对ISCs炎症模型的影响。用不同浓度VD3试验,检测炎症相关基因、紧密连接和增殖相关基因变化。结果显示VD3浓度≥100 n M时会显著降低细胞活力,选用50 n M VD3作为治疗浓度进行下面实验。结果表明:加入VD3后可以显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6,减少Ki67、PCNA、Occludin、Claudin-1、Claudin-3、N-Cad表达;VD3抑制细胞迁移。表明VD3可缓解LPS诱导的牛空肠干细胞炎症反应,修复干细胞异常增殖与迁移。（4）VD3对ISCs炎症模型转录组研究进一步探讨VD3对ISCs作用,通过转录组测序,筛选与发育、疾病、治疗等过程关键基因。结果得知:LPS处理组与对照组相比,有247个差异基因,其中上调基因209个,有下调基因38个,主要富集在癌症、细胞因子受体互作通路、PI3K-Akt信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等。LPS+VD组与LPS组相比有453个差异基因,其中上调基因有194个,下调基因有259个,也富集在同样信号通路。表明VD能显著降低相关基因的表达,并筛选出4个迁移相关基因进行验证。（5）VD3对LPS刺激后ISCs Wnt/β-catenin信号通路的影响为了探究VD3对ISCs炎性状态下Wnt/β-catenin通路的比变化。借助Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1,检测炎症、增殖、紧密连接蛋白、Wnt/β-catenin通路相关基因的表达。通过CCK8检测IWR-1对干细胞活力的影响,IWR-1浓度到8μM时细胞活力显著降低。试验结果可知,LPS激活Wnt/β-catenin信号通路,VD3则抑制LPS抑制ISCs的Wnt/β-catenin信号通路的激活,降低相关基因与蛋白的表达;同时减少促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌和抑制紧密连接蛋白相关基因m RNA与蛋白表达。由迁移试验可知,抑制Wnt/β-catenin信号通路可以抑制细胞异常迁移。可见VD3经Wnt/β-catenin信号通路缓解细胞炎症,改善细胞异常增殖与迁移。（6）VD3对LPS刺激后类器官Wnt/β-catenin信号通路的影响为了探究VD3对LPS刺激后牛肠道类器官的影响。分别在分子和蛋白水平检测了炎症、增殖、紧密连接蛋白、Wnt/β-catenin通路相关基因的表达。结果表明:VD3抑制Wnt/β-catenin通路相关m RNA与蛋白的表达;减少TNF-α、IL-1β、IL-6的产生;抑制Ki67蛋白异常表达。LPS组类器官面积极显著增大,VD3在一定程度上抑制类器官异常增殖;使用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1,类器官与对照组相比并无显著性差异。由此可知抑制Wnt/β-cate

关键词：牛空肠干细胞牛空肠类器官 LPS VD3 Wnt/β-catenin信号通路增殖迁移

“中国属于第三世界”——“三个世界”划分战略思想提出50周年

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中国档案 2024年第3期 14-15页

作者：史玉洁中央档案馆

“三个世界”划分的战略思想反映了毛泽东对20世纪70年代国际格局的总体看法,经邓小平在联合国会议全面阐述后,受到国际社会普遍关注。在当时的历史条件下,这一思想对指导我国外交工作,坚持反对超级大国的霸权主义和战争威胁,努力建立... 详细信息

“三个世界”划分的战略思想反映了毛泽东对20世纪70年代国际格局的总体看法,经邓小平在联合国会议全面阐述后,受到国际社会普遍关注。在当时的历史条件下,这一思想对指导我国外交工作,坚持反对超级大国的霸权主义和战争威胁,努力建立和发展同第三世界各国以及其他类型国家的友好合作关系,包括继续推动中美两国关系,都发挥过重要作用。

关键词：第三世界国际格局战略思想战争威胁霸权主义中美两国建立和发展 20世纪70年代

希瓦氏菌CcmG基因调控细胞色素c蛋白成熟及其在电子传递中的功能研究

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希瓦氏菌CcmG基因调控细胞色素c蛋白成熟及其在电子传递中的功能...

作者：房玉洁齐鲁工业大学

学位级别：硕士

随着全球环境污染和能源短缺问题日益严重,寻找无污染的新能源以及大力开发清洁能源变得至关重要。微生物燃料电池(Microbial Fuel Cell,MFC)可以降解各种有机废物和污染物来产生清洁的电能,作为一种可再生能源,具有广阔的应用前景。MF... 详细信息

随着全球环境污染和能源短缺问题日益严重,寻找无污染的新能源以及大力开发清洁能源变得至关重要。微生物燃料电池(Microbial Fuel Cell,MFC)可以降解各种有机废物和污染物来产生清洁的电能,作为一种可再生能源,具有广阔的应用前景。MFC的阳极是产电微生物生长以及电子收集的部位,对阳极微生物研究时,奥奈达希瓦氏菌(*** MR-1)是经常使用到的模式菌,它能够将代谢有机底物产生的电子,通过胞外电子传递的形式传递给胞外的电子受体。在这个过程中,细胞色素c蛋白是电子传递到胞外的关键蛋白,它需要与血红素(heme c)结合,并利用其中铁原子氧化态及还原态的可逆变化来实现电子的传递。细胞色素c蛋白与血红素的共价结合过程被称为细胞色素c的成熟,这个过程需要Ccm家族基因的参与。本研究对希瓦氏菌中该家族中的硫氧还蛋白CcmG进行研究,揭示CcmG基因调控细胞色素c蛋白成熟的机制和在电子传递功能中的功能,为微生物燃料电池的改进、提升提供理新的论依据。本研究基于框内缺失法,通过筛选敲除载体和接合菌株,构建了一个适合希瓦氏菌基因敲除的敲除体系,并利用该体系对CcmG基因进行敲除。对于一个产电菌最受关注的就是其产电能力,因此以野生型*** MR-1和CcmG基因缺失菌株开展实验,构建双室微生物燃料电池。结果表明,与野生型MR-1菌株相比,CcmG基因缺失突变菌株所构建的MFC的电压和比热容显著降低,生物膜电活性降低,菌株在阳极碳布上的附着能力也明显降低。实验过程中构建了回补菌株。CcmG基因缺失所导致的表型在回补菌株中都能够得到恢复,这说明CcmG基因在希瓦氏菌的胞外电子传递中起到关键作用。为进一步探索CcmG在细胞色素c蛋白成熟过程中的作用,对?CcmG菌株进行了颜色观察、细胞色素c含量、总铁测定和血红素染色实验,结果显示,CcmG基因敲除后,菌落颜色变浅,细胞色素c含量明显低于野生型菌株,与此同时,?CcmG中的血红素和铁含量也明显低于MR-1,这表明CcmG基因敲除后影响了细胞色素c蛋白的成熟过程。CcmG的蛋白序列中含有CXXC活性位点,可能对细胞色素c蛋白的成熟起到关键作用。因此我们将蛋白序列中第74和77位的半胱氨酸变为丝氨酸构建点突变菌株?CcmG/CcmGC74,77S,点突变菌株搭建的MFC及细胞色素c含量与CcmG缺失菌株实验结果相一致,这表明CXXC位点是CcmG蛋白行使功能的重要活性位点。最后本研究对CcmG基因缺失菌株和MR-1进行转录组测序分析,发现硫氧还蛋白CcmG缺失影响多个基因的表达,测序结果显示有29个基因上调表达,62个基因下调表达。对这些差异表达基因进行功能预测分析发现,有5个基因与铁转运相关。我们对其进行基因功能分析,进行了初步研究发现不同的铁调控相关蛋白在铁转运中存在协同或互补关系。综上所述,本研究通过对*** MR-1中的硫氧还蛋白CcmG的研究,揭示了CcmG对细胞色素c成熟及在胞外电子传递过程中的影响,为微生物燃料电池的改进、提升提供理论依据。

关键词：微生物燃料电池硫氧还蛋白细胞色素c蛋白成熟胞外电子转移

绿色供应链金融对高碳企业绿色转型的影响研究

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绿色供应链金融对高碳企业绿色转型的影响研究

作者：仓玉洁南京信息工程大学

学位级别：硕士

基于ChatGPT+Prompt的专利技术功效实体自动生成研究

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数据分析与知识发现 2024年第4期8卷 14-25页

作者：白如江陈启明张玉洁杨超山东理工大学信息管理研究院淄博255000 浙江大学公共管理学院杭州310058

【目的】针对专利技术功效实体的自动识别问题,智能感知生成专利文献中的关键技术功效,辅助专利技术功效矩阵高质量构建。【方法】本文提出将ChatGPT应用于专利技术功效实体抽取任务的新思路,使用ChatGPT+Prompt的方法实现专利技术词、... 详细信息

【目的】针对专利技术功效实体的自动识别问题,智能感知生成专利文献中的关键技术功效,辅助专利技术功效矩阵高质量构建。【方法】本文提出将ChatGPT应用于专利技术功效实体抽取任务的新思路,使用ChatGPT+Prompt的方法实现专利技术词、功效词以及技术-功效二元组的识别、提取和生成。【结果】本文识别生成了4个领域、三种语言的专利技术功效实体,跨领域、跨语言、提示样本数量对比的实验结果(ROUGE值)表明,该方法能够较为准确地识别技术功效二元组。新能源汽车领域效果最佳,英文专利表现最优,跨域能力和跨语言能力显著,给予One-Shot显著提升模型性能。【局限】本文方法仍存在Prompt不标准、生成内容重复、单轮或多轮问答的选择困难等问题。【结论】本文方法具备合理性和可行性,有效降低技术功效实体生成的人力成本和任务门槛,拓展AIGC的应用场景,释放ChatGPT在专利文献挖掘的潜力。

关键词：专利技术功效矩阵技术词功效词实体识别生成式模型 ChatGPT Prompt

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水蛭真伪鉴定和质量评价方法研究进展

药学研究 2023年第5期42卷 340-344页

作者：吉舒琪张慧婷王梦轩宫玉洁王艺颖刘玉姣董红敬张波临沂大学药学院山东临沂276000 齐鲁工业大学<山东省科学院> 山东省分析测试中心山东省大型精密分析仪器应用技术重点实验室山东济南250014

目的通过进一步完善水蛭的真伪鉴别与质量评价方法,为保障水蛭临床用药安全有效提供参考。方法以“水蛭”“鉴定”“鉴别”以及“质量评价”等为关键字,在中国知网、维普网、万方数据、PubMed、Science Direct、Web of science等数据库... 详细信息

目的通过进一步完善水蛭的真伪鉴别与质量评价方法,为保障水蛭临床用药安全有效提供参考。方法以“水蛭”“鉴定”“鉴别”以及“质量评价”等为关键字,在中国知网、维普网、万方数据、PubMed、Science Direct、Web of science等数据库中查询2000年1月—2022年8月发表的相关研究论文,并以“真伪鉴定”和“质量评价”为主旨进行文献综述。结果水蛭真伪鉴别方法包括性状鉴别、理化鉴别、分子鉴别、蛋白质电泳鉴别和毛细管电泳鉴别等多种方法,其中分子鉴别和蛋白质电泳鉴别两种方法客观性强、准确性高,应用广泛;而质量评价方法较为丰富,包括抗凝血酶评价法、高效液相色谱法、蛋白质电泳法、红外光谱分析法、气相色谱质谱联用技术、指纹图谱技术等。结论分子鉴别是水蛭目前最准确的鉴别方法,在中药材及中成药中均可适用;由于药效物质并不十分明确,因此以抗凝血酶评价法的生物评价技术和宏观评价的指纹图谱技术在质量评价中更具优势。

关键词：水蛭真伪鉴定质量评价研究进展

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无声的号角——长征途中的红色报刊

中国档案 2024年第10期 8-9页

作者：史玉洁中央档案馆

长征是中国共产党历史上一次惊天动地的伟大远征。长征途中，尽管战斗频繁、物资短缺、印刷设备简陋，但红军仍然坚持编辑出版报刊，如《红星》报、《前进》报、《战士》报等。这些红色报刊不仅是传播信息的重要载体，更是鼓舞军心、凝...

长征是中国共产党历史上一次惊天动地的伟大远征。长征途中，尽管战斗频繁、物资短缺、印刷设备简陋，但红军仍然坚持编辑出版报刊，如《红星》报、《前进》报、《战士》报等。这些红色报刊不仅是传播信息的重要载体，更是鼓舞军心、凝聚人心的无声号角，为红军胜利完成长征提供强大的精神动力。

关键词：

数字技术如何提升价值链稳定性——兼论不同投入来源数字技术的影响

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上海财经大学学报（哲学社会科学版） 2024年第3期26卷 79-92页

作者：王彬宋玉洁山东财经大学国际经贸学院山东济南250014 山东师范大学经济学院山东济南250358

在数字经济快速发展及国内价值链面临“断链”“卡链”风险的双重背景下,数字技术如何赋能中国价值链稳定性值得探讨。文章在构建嵌入式投入产出表的基础上分别从生产要素投入、增加值波动视角构建指标体系,测算省份—行业层面的数字技... 详细信息

在数字经济快速发展及国内价值链面临“断链”“卡链”风险的双重背景下,数字技术如何赋能中国价值链稳定性值得探讨。文章在构建嵌入式投入产出表的基础上分别从生产要素投入、增加值波动视角构建指标体系,测算省份—行业层面的数字技术、价值链稳定性水平,并实证检验了数字技术对价值链稳定性的影响及机制。研究发现:数字技术可显著赋能价值链稳定性,主要通过提升生产效率、中间品供应多元化两条途径实现;中西部省份数字技术更能提升价值链稳定性,在制造业领域数字技术更能促进价值链稳定性;投入省外的数字技术及来自服务业的数字技术对价值链稳定性的提升作用更强。研究结论对于统筹经济发展与安全,加快构建新发展格局,推动经济高质量稳步发展具有重要的现实意义。

关键词：数字技术价值链稳定性生产要素增加值波动投入产出表

重述“技术公益主义”:人工智能立法的一般理论与实践

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法治研究 2024年第4期154卷 123-133页

作者：张玉洁广州大学党内法规研究中心

随着人工智能技术的不断发展,具有人文价值精神的“技术公益主义”理论正在全方位地渗透到人工智能立法之中。该理论既是对“技术中立论”“技术决定论”的批判,又推动了人工智能立法由“公众权益保障”框架向“公共风险规制”框架的转... 详细信息

随着人工智能技术的不断发展,具有人文价值精神的“技术公益主义”理论正在全方位地渗透到人工智能立法之中。该理论既是对“技术中立论”“技术决定论”的批判,又推动了人工智能立法由“公众权益保障”框架向“公共风险规制”框架的转型。这种转型在欧盟、中国以及美国立法上展现出不同的形态:欧盟人工智能立法对“技术公益主义”理论采取了“半开放性”修正;中国以地方立法试验为主,并展现出强烈的包容性“技术公益主义”倾向;美国则更加注重“技术公益主义”的软法之治。然而,上述实践也表明,当前人工智能立法中“技术公益主义”忽视了市场驱动力(私利)保护,导致了权利义务责任的配置失衡,进而影响了人工智能立法的适用范围。综合上述理论发展与实践探索,“技术公益主义”的理论发展应当更加注重技术价值与法律价值的相互构建、技术公益与责任公益的紧密衔接、立法与软法的协同推进,从而进一步为全人类的可持续发展凝聚出人工智能立法共识。

关键词：人工智能立法技术中立论技术公益主义软法