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微生物在防治黄曲霉菌及毒素中的应用

安徽农业大学学报 2017年第3期44卷 502-507页

作者：宫安东孔宪巍方海宾王天文信阳师范学院生命科学学院信阳464000 信阳师范学院大别山农业生物资源保护与利用研究院信阳464000

黄曲霉菌及其黄曲霉毒素对人类的严重危害是世界性难题,给粮食生产和人类健康带来了极大的损害。在对黄曲霉菌及毒素的防治研究中,微生物资源已被证明具有高效的抑菌作用。近年来,多种新颖的微生物资源被筛选和应用于防治田间或储藏期... 详细信息

黄曲霉菌及其黄曲霉毒素对人类的严重危害是世界性难题,给粮食生产和人类健康带来了极大的损害。在对黄曲霉菌及毒素的防治研究中,微生物资源已被证明具有高效的抑菌作用。近年来,多种新颖的微生物资源被筛选和应用于防治田间或储藏期作物黄曲霉病害,取得了高效的应用价值。研究对近期报道的各类功能微生物在防治田间和储藏期黄曲霉菌及毒素的最新进展进行了综述,微生物通过竞争抑制、拮抗作用、毒素的吸附和降解、储藏期呼吸抑制、以及新发现的微生物挥发气体抑菌等方式发挥拮抗作用,为田间和储藏期作物的合理防控、食品安全和人类健康等提供重要的参考依据。

关键词：黄曲霉菌黄曲霉毒素生物防治田间防治:储藏期防治

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禾谷镰刀菌拮抗菌的筛选与鉴定

华中农业大学学报 2013年第3期32卷 28-32页

作者：蔺国强廖玉才宫安东李和平华中农业大学生命科学技术学院武汉430070 华中农业大学麦类作物分子生物技术实验室武汉430070 华中农业大学植物科学技术学院武汉430070

从土壤中分离获得1株具有较强拮抗作用的细菌菌株X-42,经形态特征、16S rDNA序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌可产生一系列具有抑菌功能的代谢物,抑制禾谷镰刀菌生长。从X-42菌株发酵液中分离纯化代谢物,经硫酸铵沉淀的脂肽类... 详细信息

从土壤中分离获得1株具有较强拮抗作用的细菌菌株X-42,经形态特征、16S rDNA序列分析,将其鉴定为解淀粉芽孢杆菌。该菌可产生一系列具有抑菌功能的代谢物,抑制禾谷镰刀菌生长。从X-42菌株发酵液中分离纯化代谢物,经硫酸铵沉淀的脂肽类物质用于抑菌分析,结果表明,来自X-42的脂肽物,既能直接破坏禾谷镰刀菌菌丝结构,也能影响分生孢子萌发,导致菌丝及孢子局部膨大。小麦开花期的田间赤霉病防治研究表明,在接种禾谷镰刀菌前和接种后施用拮抗菌X-42代谢物,均可有效防治赤霉病,其防治效果高达79%～88%,与化学杀菌剂多菌灵相当。

关键词：拮抗解淀粉芽孢杆菌生物防治禾谷镰刀菌小麦赤霉病

枯草芽胞杆菌WY8-7的溶磷、抑菌及促生长作用

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南京农业大学学报 2019年第4期42卷 697-705页

作者：宫安东孔宪巍翟新可路亚南文淑婷张静柏信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000 华中农业大学植物科学技术学院湖北武汉430070

[目的]本文旨在筛选兼有溶磷和抑菌作用的微生物菌株,分析其在水体和土壤中的溶磷效果以及对植物生长的作用,同时分析其抑菌活性,鉴定其抑菌物质。[方法]采用稀释涂平板法,从茶园土壤中分离具有溶磷和抑菌作用的菌株WY8-7,通过形态学、... 详细信息

[目的]本文旨在筛选兼有溶磷和抑菌作用的微生物菌株,分析其在水体和土壤中的溶磷效果以及对植物生长的作用,同时分析其抑菌活性,鉴定其抑菌物质。[方法]采用稀释涂平板法,从茶园土壤中分离具有溶磷和抑菌作用的菌株WY8-7,通过形态学、生理生化和分子生物学分析,确定菌株WY8-7的分类地位;检测菌株WY8-7在土壤和培养液中对难溶性无机磷的降解作用;检测其对苗期玉米植株生长的影响;对峙培养法分析菌株WY8-7对不同病原真菌的抑菌作用;超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱鉴定抑菌功能物质。[结果]经鉴定,菌株WY8-7为枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis),在固体培养基、液体培养基和土壤中均可转化难溶性无机磷,提升可溶性磷含量;液体振荡培养20d后,可溶性磷含量达512.77mg·L^-1,为对照的174倍;菌株WY8-7可提升土壤中可溶性磷含量,并促进苗期玉米的生长,与对照组相比,在叶长、叶宽、单叶叶面积、株高和鲜质量等指标均有显著增长(P<0.05),增长率分别达17.68%、22.08%、42.62%、20.34%和20.59%;质谱分析表明,菌株WY8-7可产生伊枯草菌素A和丰原素A两类抑菌物质,对3种真菌具有高效广谱抑菌作用,对禾谷炭疽菌的抑菌率最高,达87.34%。[结论]分离自茶园的枯草芽胞杆菌WY8-7,在土壤和液体振荡培养中可高效转化难溶性无机磷为可溶性磷,促进苗期玉米植株生长,同时WY8-7还可产生伊枯草菌素A和丰原素A两种脂肽类物质,抑制多种病原真菌生长。WY8-7具有高效溶磷和抑菌作用,为新型微生物菌肥的研发提供重要材料。

关键词：枯草芽胞杆菌溶磷抑菌活性促生长伊枯草菌素A 丰原素

吡咯伯克霍尔德菌WY6-5产二甲基二硫对储藏期花生黄曲霉及毒素的抑制作用

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中国农业科学 2019年第17期52卷 2972-2982页

作者：宫安东董飞燕吴楠楠孔宪巍赵倩闫建丽 Cheelo DIMUNA 信阳师范学院生命科学学院/河南省茶树生物学重点实验室

【目的】验证吡咯伯克霍尔德菌（Burkholderia pyrrocinia）WY6-5的抑菌作用,评价其对储藏期花生黄曲霉（Aspergillus flavus）及毒素的防治效果,分析抑菌作用机制,鉴定活性物质,并检测其最低抑菌浓度,为储藏期真菌病害及毒素的防控提... 详细信息

【目的】验证吡咯伯克霍尔德菌（Burkholderia pyrrocinia）WY6-5的抑菌作用,评价其对储藏期花生黄曲霉（Aspergillus flavus）及毒素的防治效果,分析抑菌作用机制,鉴定活性物质,并检测其最低抑菌浓度,为储藏期真菌病害及毒素的防控提供新材料。【方法】采用非接触培养皿对扣培养法,检测菌株WY6-5对黄曲霉的抑制效果,添加活性炭,验证挥发性物质的抑菌作用;密闭储藏环境,检测WY6-5产二甲基二硫对花生黄曲霉及毒素的抑制效果;收集处理后的花生籽粒,锇酸固定,并进行扫描电镜观察,检测黄曲霉细胞显微结构变化,通过透射电镜观察,检测黄曲霉细胞内部结构的显微差异;购买活性物质标准品,梯度稀释,与黄曲霉菌丝和孢子对扣培养,分析最低抑菌浓度。【结果】吡咯伯克霍尔德菌WY6-5分离自茶园根际土壤,可产生挥发性物质二甲基二硫,并高效抑制黄曲霉的生长,抑菌率达95%以上;同时,在高水活度（aw）条件下,WY6-5还可抑制储藏期花生黄曲霉和毒素污染;两种水活度下,对照组中发病率高达100%,黄曲霉毒素总含量分别为399.32μg·kg-1（aw 0.859）和3 143.19μg·kg-1（aw 0.923）;WY6-5添加组,花生黄曲霉发病率降为2%（aw 0.859）与21%（aw 0.923）,毒素含量降为4.86μg·kg-1（aw 0.859）和121.37μg·kg-1（aw 0.923）,与对照组相比,对毒素的抑制率达98.78%和96.14%。扫描电镜观察显示,WY6-5产生的挥发性气体能抑制黄曲霉孢子的萌发,透射电镜显示,黄曲霉细胞结构未呈现明显损伤。挥发性物质二甲基二硫抑菌作用明显,对黄曲霉菌丝生长的最低抑菌浓度为100μL·L-1（物质体积/培养体积）,对孢子萌发的最低抑菌浓度为50μL·L-1（物质体积/培养体积）。【结论】吡咯伯克霍尔德菌WY6-5可产生高效抑菌挥发物二甲基二硫,在低浓度下即可完全抑制黄曲霉菌丝生长和孢子萌发,并能抑制储藏期花生黄曲霉的侵染和黄曲霉毒素的产生,为储藏期真菌病害及毒素的防控提供了新型生物材料。

关键词：吡咯伯克霍尔德菌黄曲霉黄曲霉毒素二甲基二硫抑菌储藏期

氧酰基载体蛋白还原酶基因FgOAR1对禾谷镰孢生长、发育和致病的影响

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中国农业科学 2023年第24期56卷 4854-4865页

作者：宫安东雷银玉吴楠楠刘景榕宋梦鸽张艺美杨光杨鹏信阳师范大学生命科学学院

【背景】禾谷镰孢(Fusarium graminearum)是引起小麦赤霉病(Fusarium head blight)的主要病原真菌，侵染后导致作物品质和产量下降，同时产生多种真菌毒素，严重危害粮食生产和人类健康。氧酰基载体蛋白还原酶(3-oxoacyl ACP reductase,... 详细信息

【背景】禾谷镰孢(Fusarium graminearum)是引起小麦赤霉病(Fusarium head blight)的主要病原真菌，侵染后导致作物品质和产量下降，同时产生多种真菌毒素，严重危害粮食生产和人类健康。氧酰基载体蛋白还原酶(3-oxoacyl ACP reductase,OAR1)催化羧酰基载体蛋白还原成氧酰基载体蛋白，在脂肪酸的生物合成过程中具有重要作用。【目的】构建FgOAR1基因缺失突变体，研究其表型、显微结构、孢子产量、有性生殖和致病力等的变化，探究FgOAR1的生物学功能，揭示其对禾谷镰孢生长、发育和致病的影响，为新型抑菌作用靶点的筛选及小麦赤霉病的防控提供科学依据。【方法】以禾谷镰孢野生型菌株PH-1为材料，应用Split-Marker基因敲除技术，构建FgOAR1基因缺失突变体(ΔFgOAR1),Gap-repair技术获得缺失基因的回补突变体(ΔFgOAR1-C)；将PH-1、ΔFgOAR1和ΔFgOAR1-C菌株分别接种到常规培养基，观察菌落表型变化并测定脂肪酸含量差异；接种到含刚果红(Congo-Red)、SDS、NaCl和H2O2的压力筛选培养基中，观察菌丝在压力培养条件下的生长状况；接种CMC培养基，比较分生孢子产量差异；接种胡萝卜培养基，观察有性生殖及孢子性状；分别进行小麦胚芽鞘和穗部接种，统计发病率和毒素产量，比较突变体与野生型菌株的致病力差异。【结果】与野生型PH-1菌株相比，在PDA、YEG和CM培养基中ΔFgOAR1突变体未呈现明显表型变化，在0.7 mol·L-1NaCl、0.03%H2O2、0.01%SDS和300μg·m L-1Congo-Red等压力培养条件下，突变体菌落直径显著低于野生型PH-1，表明FgOAR1与禾谷镰孢细胞膜和细胞壁的合成相关；ΔFgOAR1突变体在液体培养基中的分生孢子产量(8.1×105个/mL)显著低于PH-1(1.26×106个/mL)，接种小麦胚芽鞘和麦穗后，ΔFgOAR1突变体的致病力显著低于野生型菌株PH-1。【结论】禾谷镰孢中FgOAR1参与脂肪酸的生物合成，对细胞膜合成具有重要作用，该基因缺失导致突变体抗逆性降低，分生孢子产量下降，且致病力显著降低，FgOAR1对禾谷镰孢的生长、发育和致病具有重要作用。

关键词：禾谷镰孢小麦赤霉病基因敲除 FgOAR1 致病力

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茶树内生菌的应用性研究进展

信阳师范学院学报（自然科学版） 2017年第1期30卷 168-172页

作者：宫安东韩萌真孔宪巍魏彦博王磊程琳信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000 信阳师范学院大别山农业生物资源保护与利用研究院河南信阳464000 信阳市高级中学河南信阳464000

茶树为多年生植物,在长期的自然选择和进化过程中,已形成种群类型丰富且功能多样的内生微生物菌群.在茶树的不同生长阶段中,其内生菌的种群类型、数量、分布及生物学功能等均存在明显差异.内生菌在防治病害、促进生长、降解有机农药、... 详细信息

茶树为多年生植物,在长期的自然选择和进化过程中,已形成种群类型丰富且功能多样的内生微生物菌群.在茶树的不同生长阶段中,其内生菌的种群类型、数量、分布及生物学功能等均存在明显差异.内生菌在防治病害、促进生长、降解有机农药、促进风味形成,以及改善Al 3+毒耐受性等方面发挥了重要作用.

关键词：茶树内生菌生物多样性应用性

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蒲公英根多糖的体外抗炎作用研究

动物医学进展 2019年第5期40卷 75-78页

作者：李欢许艳艳高进勇余炎炎宫安东信阳学院理工学院河南信阳464000 平煤神马医疗集团总医院麻醉科河南平顶山467000 信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000

从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一... 详细信息

从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,反转录-聚合酶链反应(PCR)检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平。结果表明,TRP在50μg/mL～200μg/mL的剂量范围内对RAW264.7细胞无明显细胞毒作用,TRP可以显著抑制小鼠单核巨噬细胞NO的分泌,且IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量下调。结果表明,TRP具有一定的体外抗炎作用,体外抗炎效果与质量浓度呈现出剂量依赖关系。

关键词：蒲公英根多糖小鼠单核巨噬细胞一氧化氮炎症因子

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黄芪中黄芪多糖的提取工艺研究进展

信阳师范学院学报（自然科学版） 2022年第1期35卷 168-172页

作者：宫安东宋梦鸽王高瞻郜振雷银玉孙美鹤信阳师范学院生命科学学院河南信阳464000 河南黑马动物药业有限公司河南禹州461670

黄芪(Astragalus licentianus)是名贵的中药材植物,富含皂苷、多糖和蛋白质等多种活性物质,其中以黄芪多糖的应用最为广泛。黄芪多糖的不同工艺提取效率参差不齐,对黄芪多糖生产中常用的提取工艺进行了综述,比较了不同方法的提取效率及... 详细信息

黄芪(Astragalus licentianus)是名贵的中药材植物,富含皂苷、多糖和蛋白质等多种活性物质,其中以黄芪多糖的应用最为广泛。黄芪多糖的不同工艺提取效率参差不齐,对黄芪多糖生产中常用的提取工艺进行了综述,比较了不同方法的提取效率及优缺点,进一步明确了高效的黄芪多糖提取方案,为黄芪多糖的提取效率再提升和工业化推广提供参考。

关键词：黄芪黄芪多糖提取工艺生物发酵

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茶树炭疽病拮抗内生细菌贝莱斯芽胞杆菌的筛选与鉴定

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信阳师范学院学报（自然科学版） 2021年第2期34卷 201-207页

作者：代亚锋吴楠楠郜振王高瞻宫安东张艺美信阳师范学院生命科学学院/河南省茶树生物学重点实验室河南信阳464000

从祥云茶业基地信阳10号母本园中采摘信阳10号茶树(Camellia sinensis)健康叶片,分离纯化得到茶树内生细菌7株,平板对峙法筛选得到4株拮抗菌,均对茶树炭疽菌(Colletotrichum fructicola)具有抑制作用,其中X10-03抑菌效果最好,其代谢产... 详细信息

从祥云茶业基地信阳10号母本园中采摘信阳10号茶树(Camellia sinensis)健康叶片,分离纯化得到茶树内生细菌7株,平板对峙法筛选得到4株拮抗菌,均对茶树炭疽菌(Colletotrichum fructicola)具有抑制作用,其中X10-03抑菌效果最好,其代谢产物对茶树炭疽病病菌的抑菌率达到52.7%.光学显微镜观察发现,X10-03菌株代谢产物可有效抑制茶树炭疽菌分生孢子萌发和菌丝的生长.稀释3倍的发酵液对茶树炭疽菌菌丝生长的抑菌率达到70.4%;经过16S rDNA和gyrA基因序列分析,将内生拮抗细菌X10-03鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis).

关键词：信阳10号茶树炭疽菌贝莱斯芽胞杆菌抑菌作用鉴定