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b型流感嗜血杆菌结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性

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中国生物制品学杂志 2006年第3期19卷 295-297页

作者：杜琳谭小梅宣俊文蒋奕刘月萍谢贵林兰州生物制品研究所兰州730046

目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性。方法制备的Hib结合物经SepharoseCL4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性。结果1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经... 详细信息

目的分析Hib结合物纯化过程不同部分的生化及免疫学特性。方法制备的Hib结合物经SepharoseCL4B层析柱纯化,从中选5个不同位点取样,检测其生化特性及免疫原性。结果1、2和3部分多糖蛋白质比例在0.4左右,高分子结合物含量均在80%以上,经高压液相分析,这3部分的相对分子质量均在1400000以上,免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答。第4部分高分子结合物含量在70%左右,相对分子质量约在670000,免疫小鼠后也能产生较好的免疫应答。第5部分高分子结合物含量为23.7%,相对分子质量在50000左右,基本是以游离状态存在的多糖和载体蛋白,免疫小鼠后仅能产生很低的免疫应答。结论1、2和3部分是Hib结合物纯化中需收集的部分,第4部分虽也以结合状态存在,但相对分子质量相对较低,第5部分主要是游离的多糖和蛋白质。

关键词： b型流感嗜血杆菌结合物生化特性免疫学特性

脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素检查方法的建立及系统验证

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中国新药杂志 2013年第24期22卷 2878-2887,2908页

作者：吴兵刘方蕾宣俊文于旭博王轶峰孔素娟袁菲谢贵林赵志强兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046

目的:建立用于脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量的检测方法,研究其在脑膜炎球菌结合疫苗不同生产阶段应用的可行性,并对方法进行系统验证,以确保检查结果的真实性和准确性。方法:参考《中华人民共和国药典》2010年版三部附录,建立动... 详细信息

目的:建立用于脑膜炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量的检测方法,研究其在脑膜炎球菌结合疫苗不同生产阶段应用的可行性,并对方法进行系统验证,以确保检查结果的真实性和准确性。方法:参考《中华人民共和国药典》2010年版三部附录,建立动态浊度法测定细菌内毒素含量,并验证生产过程中相关原辅材料本身对方法可靠性的影响,参考相关指导原则完成方法的系统验证。结果:方法的线性符合验证要求,测定范围为0.03～10 EU·mL-1;相关原辅料中的细菌内毒素含量均低于0.01 EU·mL-1,方法的专属性符合验证要求;添加实验结果显示标准品回收率均在80%～130%,表明方法准确性良好,样品本身对方法检定无影响;方法精密度和耐用性验证实验结果均能达到方法验证要求;方法定量限度为0.03 EU·mL-1。多次检查疫苗原液和成品多批次结果差异较小,细菌内毒素含量检定准确可靠。结论:经方法验证显示方法的线性、特异性、灵敏度和准确性等技术参数达到了相关验证要求,结果稳定可靠;各种原辅材料对细菌内毒素检查无影响。本研究为该疫苗细菌内毒素检查提供了更为快捷有效的质量控制手段,验证结果为进一步方法再验证提供了数据和应用支持。

关键词：细菌内毒素检查脑膜炎球菌结合疫苗方法建立方法验证

O1/O139新型霍乱疫苗口服免疫动物后的自动免疫保护及被动保护试验研究

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微生物学免疫学进展 2003年第3期31卷 18-21页

作者：陈翠萍宣俊文王永谦杨朝晖兰州生物制品研究所兰州730046

O1/O139霍乱口服疫苗是一种新型疫苗。本文通过 2种不同途径免疫动物 ,检测血清抗菌抗体和肠道分泌性IgA抗体以及保护力试验 ,并探讨了它们之间的关系。通过家兔肠袢试验和细胞四甲基偶氮唑盐 (MTT)试验检测免疫后抗血清的被动保护作用... 详细信息

O1/O139霍乱口服疫苗是一种新型疫苗。本文通过 2种不同途径免疫动物 ,检测血清抗菌抗体和肠道分泌性IgA抗体以及保护力试验 ,并探讨了它们之间的关系。通过家兔肠袢试验和细胞四甲基偶氮唑盐 (MTT)试验检测免疫后抗血清的被动保护作用。试验提示 :在霍乱的保护性免疫应答中 ,除粘膜免疫可能占主导作用外。

关键词：霍乱疫苗保护性免疫粘膜免疫

脑膜炎球菌结合疫苗制备过程中各阶段产物的细菌内毒素含量分析

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中国新药杂志 2014年第11期23卷 1252-1259页

作者：吴兵于旭博刘方蕾孔素娟袁菲范锋锋李燕婷宣俊文赵庆萱吕存女谢贵林赵志强兰州生物制品研究所有限责任公司兰州730046

目的:以细菌内毒素检查法(动态浊度法)对脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中各阶段产物进行细菌内毒素含量分析,观察疫苗生产过程细菌内毒素来源及其变化,为今后疫苗生产过程中细菌内毒素质量控制提供依据。方法:在对供试品处理和方法的标准... 详细信息

目的:以细菌内毒素检查法(动态浊度法)对脑膜炎球菌结合疫苗生产过程中各阶段产物进行细菌内毒素含量分析,观察疫苗生产过程细菌内毒素来源及其变化,为今后疫苗生产过程中细菌内毒素质量控制提供依据。方法:在对供试品处理和方法的标准化的基础上,以《中华人民共和国药典》2010年版三部所录动态浊度法对疫苗不同生产阶段的过程产物和疫苗成品进行全面监控。结果:影响脑膜炎球菌结合疫苗细菌内毒素含量的主要来源为原料多糖和载体蛋白质,疫苗制备过程可以很好控制细菌内毒素含量。结论:疫苗生产过程可以有效控制疫苗的细菌内毒素含量,降低疫苗中的细菌内毒素含量可从原料着手,对多糖和载体蛋白质纯化工艺改进,进而控制疫苗的细菌内毒素含量至更低水平以提高疫苗的安全性。

关键词：脑膜炎球菌结合疫苗生产各阶段产物细菌内毒素含量分析

肝源性肝细胞再生刺激因子(HSS)的制备及鉴定

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微生物学免疫学进展 1998年第3期26卷 57-60页

作者：张宏吴兵李玉如宣俊文阮峰王祖森卫生部兰州生物制品研究所

本文采用新鲜乳牛肝脏作为原料。经酸处理、超滤、分离得到肝源性肝细胞再生刺激因子（ＨＳＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＨＳＳ的蛋白质分子量为１２，０００～１５，０００Ｄａ。经动物试验和生物学活性鉴定，表明本法制备的ＨＳＳ符合... 详细信息

本文采用新鲜乳牛肝脏作为原料。经酸处理、超滤、分离得到肝源性肝细胞再生刺激因子（ＨＳＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得ＨＳＳ的蛋白质分子量为１２，０００～１５，０００Ｄａ。经动物试验和生物学活性鉴定，表明本法制备的ＨＳＳ符合《中国生物制品规程》（１９９５版）的有关要求，且工艺简便。

关键词： HSS 乳牛肝脏制备鉴定

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消毒剂对环境菌株抑制作用的研究

微生物学免疫学进展 2019年第5期47卷 44-48页

作者：于佳宣俊文余心怡魏然高雪军兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗工程技术研究中心

目的研究企业常用消毒剂对于洁净室环境监测分离的菌株样本的抑制作用。方法通过VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定收集到的环境菌株。对3种消毒剂(碘伏、无水乙醇和苯扎溴铵)进行梯度稀释,利用打孔法研究3种消毒剂在... 详细信息

目的研究企业常用消毒剂对于洁净室环境监测分离的菌株样本的抑制作用。方法通过VITEK2-COMPACT全自动细菌鉴定及药敏分析系统鉴定收集到的环境菌株。对3种消毒剂(碘伏、无水乙醇和苯扎溴铵)进行梯度稀释,利用打孔法研究3种消毒剂在不同含量下对环境菌株的抑制作用。结果共检出革兰阳性菌8种、革兰阴性菌2种、酵母菌1种、芽孢杆菌2种;苯扎溴铵对革兰阳性菌的抑菌能力都较强,随着含量的降低,抑菌作用逐渐减弱;碘伏对革兰阴性菌及酵母菌的抑制作用都非常强,随着含量降低,抑菌作用逐渐降低。3种消毒剂对2种芽孢杆菌的抑制作用均有限。结论用1.00%苯扎溴铵和0.50%的碘伏抑菌作用都非常强。另外,应配合使用杀孢子剂,避免芽孢杆菌孢子在空气中传播。

关键词：环境菌株消毒剂抑菌作用

重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌的高密度发酵与表达

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微生物学免疫学进展 2011年第1期39卷 24-27页

作者：董勇前宣俊文冯宜扬丁浩范锋锋胡海涛赵志强兰州生物制品研究所兰州730046

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行... 详细信息

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行诱导。重组菌最终发酵液光密度(A600)未诱导时达到44,诱导时达到36,在上清液中表达的rEPA蛋白的含量占总蛋白的28.1%,在菌体中表达蛋白含量占总蛋白的4.7%。本实验为rE-PA的大规模生产奠定了基础。

关键词：铜绿假单胞菌外毒素A 高密度培养表达

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支原体菌株低温保存活力稳定性研究

微生物学免疫学进展 2019年第2期47卷 36-39页

作者：魏然傅元欣于佳宣俊文高雪军兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗工程技术研究中心甘肃兰州730046

目的研究低温冻存时间及温度对支原体菌种保存稳定性和菌种活力的影响。方法用固体平板计数法计算不同冻存时间、温度下的口腔支原体、肺炎支原体菌落数差异,分析这2个因素对口腔支原体、肺炎支原体菌种活力的影响。结果口腔支原体在生... 详细信息

目的研究低温冻存时间及温度对支原体菌种保存稳定性和菌种活力的影响。方法用固体平板计数法计算不同冻存时间、温度下的口腔支原体、肺炎支原体菌落数差异,分析这2个因素对口腔支原体、肺炎支原体菌种活力的影响。结果口腔支原体在生长48 h后达到生长高峰,肺炎支原体生长较为缓慢,在103 h到达生长高峰。口腔支原体在-70℃冻存1个月时,菌落数由10^(12) cfu/mL下降至10^(11) cfu/mL,冻存1个月的菌落数和冻存3个月、12个月的菌落数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。肺炎支原体在-70℃的冻存条件下,菌落数一直处于稳定水平;比较-35℃与-70℃的冻存条件下肺炎支原体的菌落数,差异无统计学意义(P>0.05),口腔支原体在-70℃冻存条件下的菌种活力明显高于-35℃(P<0.05)。结论口腔支原体生长迅速,但对于储存温度的敏感性较高,肺炎支原体相较口腔支原体生长缓慢,停滞期较长,菌株对冻存温度和时间的敏感度较低,稳定性高。菌种冻存温度应选择较低温度,冻存周期在1年内较为稳定。

关键词：肺炎支原体口腔支原体菌种冻存活力

工程菌种子制备方法对rEPA表达量影响的研究

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微生物学免疫学进展 2006年第2期34卷 12-14页

作者：王永谦赵志强宣俊文谢贵林王燕杜琳兰州生物制品研究所 730046

由重组***553D所表达的基因缺失突变脱毒的重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA),目前大量以载体蛋白用于多种细菌多糖蛋白结合疫苗研究。rEPA的表达量受众多因素的影响,种子的制备方式就是重要因素之一。本文用长期冷冻保存的和新鲜提取的质... 详细信息

由重组***553D所表达的基因缺失突变脱毒的重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA),目前大量以载体蛋白用于多种细菌多糖蛋白结合疫苗研究。rEPA的表达量受众多因素的影响,种子的制备方式就是重要因素之一。本文用长期冷冻保存的和新鲜提取的质粒分别转化宿主菌***21(λDE3)后制备种子,并将它们和冻干保存的***553D在相同条件下培养和诱导,经SDS-PAGE分析表明长期保存的质粒转化宿主后的重组工程菌生长速度较慢,但rEPA的表达量和新鲜质粒转化制备的工程菌基本相同,而冻干保存的工程菌***553D几乎丧失了表达rEPA的能力。

关键词：重组铜绿假单胞菌外毒素A 种子制备表达量工程菌