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三磷酸腺苷敏感性钾离子通道在外源性硫化氢抑制高糖诱导的成骨细胞损伤中的作用

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华西口腔医学杂志 2017年第5期35卷 473-478页

作者：刘媛媛官秀梅成敏李鑫潘岳阳郭志良潍坊医学院口腔医学院潍坊医学院附属医院口腔科潍坊医学院临床医学院解放军89医院骨科潍坊261053

目的研究三磷酸腺苷敏感性钾离子通道(KATP)在硫化氢(H2S)抑制高糖(HG)诱导的成骨细胞损伤中的作用。方法原代培养大鼠下颌骨成骨细胞并鉴定,将成骨细胞给予HG、H2S、KATP通道开放剂吡拉地尔(Pia)、阻断剂格列本脲(Gli)处理后,用Western... 详细信息

目的研究三磷酸腺苷敏感性钾离子通道(KATP)在硫化氢(H2S)抑制高糖(HG)诱导的成骨细胞损伤中的作用。方法原代培养大鼠下颌骨成骨细胞并鉴定,将成骨细胞给予HG、H2S、KATP通道开放剂吡拉地尔(Pia)、阻断剂格列本脲(Gli)处理后,用Western blot检测KATP通道蛋白的表达水平,同时采用CCK8、实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、茜素红S染色分析方法检测其对成骨细胞增殖、分化及矿化的影响。结果细胞KATP通道蛋白的表达水平在HG的影响下明显降低,H2S预处理明显抑制HG对KATP通道蛋白的下调作用和对成骨细胞增殖的影响,并防止HG引起的成骨细胞分化和矿化的减少;相反,KATP通道阻断剂能明显阻断H2S对成骨细胞的上述保护作用。结论 H2S通过KATP通道抑制了HG诱导的成骨细胞损伤。

关键词：硫化氢高糖成骨细胞三磷酸腺苷敏感性钾离子通道

金雀异黄素对MCP-1诱导人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及c-fos mRNA转录的影响

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中国药理学通报 2005年第8期21卷 943-946页

作者：官秀梅冯赞杰钱民章潍坊医学院生物化学教研室山东潍坊261042 遵义医学院生物化学教研室贵州遵义563003

目的研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)增殖及cfosmRNA转录的影响。方法用不同浓度(10,30,90μmol·L-1)金雀异黄素预作用hUVSMC2h后加入终浓度为10μg·L-1的MCP1作用30min;采用逆转录聚... 详细信息

目的研究金雀异黄素对单核细胞趋化蛋白1(MCP1)诱导的人脐静脉血管平滑肌细胞(hUVSMC)增殖及cfosmRNA转录的影响。方法用不同浓度(10,30,90μmol·L-1)金雀异黄素预作用hUVSMC2h后加入终浓度为10μg·L-1的MCP1作用30min;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfos基因的表达;作用48h,用细胞计数检测细胞增殖的情况。结果金雀异黄素在低剂量(10μmol·L-1)即能抑制平滑肌细胞的增殖(P<0.05),在高剂量(30,90μmol·L-1)才能抑制细胞内cfosmRNA的表达(P<0.01,P<0.01)。结论金雀异黄素能抑制MCP1诱导的hUVSMC增殖,其机制可能与降低cfos的表达有关。

关键词：金雀异黄素 MCP-1 c-fos基因动脉粥样硬化

miR-296-5p靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化

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医学分子生物学杂志 2022年第4期19卷 287-294页

作者：孟爱霞官秀梅李桂芝孙风祥潍坊医学院生物化学与分子生物学实验室山东省潍坊市261053

目的探讨miR-296-5p靶向PLK1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞自噬及抑制上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-296-5p在OS细胞中的表达.采用生物信息学分析预测miR-296-5p的靶基因,验证miR-296-5p对靶基因PLK1的直接靶向调... 详细信息

目的探讨miR-296-5p靶向PLK1对骨肉瘤(osteosarcoma,OS)细胞自噬及抑制上皮-间质转化(EMT)的作用机制.方法 qRT-PCR检测miR-296-5p在OS细胞中的表达.采用生物信息学分析预测miR-296-5p的靶基因,验证miR-296-5p对靶基因PLK1的直接靶向调控;细胞转染构建miR-296-5p过表达和干扰细胞,CCK-8、克隆形成、Transwell小室、流式、蛋白免疫印迹实验检测miR-296-5p的不同表达对U2OS细胞中PTBP1表达水平及细胞增殖、侵袭、凋亡、自噬及EMT的影响.结果与对照组比较,miR-296-5p在OS中表达降低,而PLK1则升高(P<0.05);与miR-NC组比较,mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05);与PLK1组比较,PLK1+mimic组的克隆形成率、侵袭细胞数目及PTBP1、p62、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT水平降低,细胞凋亡率、Bec-lin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、E-cadherin水平升高(P<0.05).结论 miR-296-5p可能能够靶向PLK1调控PI3K/AKT通路诱导OS细胞中的自噬并抑制EMT.

关键词：骨肉瘤 miR-296-5p PLK1 PI3K/AKT通路细胞自噬上皮-间质转化

单核细胞趋化蛋白1对人脐静脉平滑肌细胞增殖的影响

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中国动脉硬化杂志 2005年第3期13卷 309-312页

作者：官秀梅钱民章遵义医学院生物化学教研室贵州省遵义市563003

目的研究单核细胞趋化蛋白1对人脐静脉平滑肌细胞增殖的影响。方法用不同浓度单核细胞趋化蛋1(0.1、1.0、10及100μg/L)作用于人脐静脉平滑肌细胞,采用细胞计数、MTT、流式细胞术检测细胞增殖情况;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfo... 详细信息

目的研究单核细胞趋化蛋白1对人脐静脉平滑肌细胞增殖的影响。方法用不同浓度单核细胞趋化蛋1(0.1、1.0、10及100μg/L)作用于人脐静脉平滑肌细胞,采用细胞计数、MTT、流式细胞术检测细胞增殖情况;采用逆转录聚合酶链反应检测细胞中cfos基因的表达。结果单核细胞趋化蛋白1能诱导人脐静脉平滑肌细胞的增殖,呈剂量依赖关系,100μg/L单核细胞趋化蛋白1对人脐静脉血管平滑肌细胞的增殖作用强于平滑肌细胞增殖因子血小板源生长因子的作用(P<0.001),单核细胞趋化蛋白1在诱导血管平滑肌细胞增殖的同时引起cfos基因的高表达(P<0.001)。结论单核细胞趋化蛋白1不仅是趋化激活剂,而且是人脐静脉平滑肌细胞的促增殖因子,并且其促增殖的功能可能与增强c-fos基因的表达有关。

关键词：细胞生物学单核细胞趋化蛋白1对血管平滑肌细胞的作用流式细胞术单核细胞趋化蛋白1 动脉粥样硬化 c-fos基因基因表达

流体剪切应力对晚期内皮祖细胞生物学功能的影响

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医用生物力学 2014年第1期29卷 60-65页

作者：成敏尹青令崔晓栋张晓芸李鑫李宏官秀梅王建英潍坊医学院基础医学院山东潍坊261053

目的研究流体剪切应力处理对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)体外及体内生物学功能的影响。方法密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2MV进行体外培养。以3~4代的EPCs,即晚期EPCs为靶细胞,对其施以1.2 Pa剪... 详细信息

目的研究流体剪切应力处理对晚期内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)体外及体内生物学功能的影响。方法密度梯度离心法分离大鼠骨髓单核细胞,应用EGM-2MV进行体外培养。以3~4代的EPCs,即晚期EPCs为靶细胞,对其施以1.2 Pa剪切应力处理。采用EdU标记技术、黏附能力测定实验、改良的Boyden小室、Annexin V/PI、β-半乳糖苷酶检测法、Matrigel法、荧光定量RT-PCR等方法分别检测剪切应力对晚期EPCs增殖、黏附、迁移、凋亡、衰老、体外成血管及VEGF mRNA表达等生物学功能的影响。应用大鼠颈动脉损伤模型及细胞原位移植等实验手段检测剪切应力预处理对晚期EPCs修复受损内皮的影响。结果 1.2 Pa剪切应力处理可不同程度提高晚期EPCs的增殖、黏附、迁移及成血管能力(P<0.01),上调VEGF的基因表达,抑制晚期EPCs的衰老及凋亡(P<0.01);移植经剪切应力预处理的晚期EPCs可加速损伤内皮的修复,减缓内膜的增生。结论流体剪切应力可改善晚期EPCs的功能活性,提高晚期EPCs修复损伤血管内皮的能力,这为EPCs的临床应用及剪切应力介导的细胞疗法提供了实验依据。

关键词：剪切应力内皮祖细胞细胞黏附再内皮化

细胞骨架F-actin在层流剪切应力诱导EPCs内皮分化中的作用

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医用生物力学 2012年第5期28卷 548-555页

作者：崔晓栋官秀梅张晓芸李宏李鑫王建英成敏潍坊医学院基础医学院山东潍坊261053

目的探讨细胞骨架F-actin在层流剪切应力促内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)向内皮分化中的作用。方法对大鼠骨髓来源的EPCs施以层流剪切应力(1.2 Pa),以荧光定量RT-PCR及流式细胞术检测特异性内皮细胞标记分子vWF、CD31 ... 详细信息

目的探讨细胞骨架F-actin在层流剪切应力促内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)向内皮分化中的作用。方法对大鼠骨髓来源的EPCs施以层流剪切应力(1.2 Pa),以荧光定量RT-PCR及流式细胞术检测特异性内皮细胞标记分子vWF、CD31 mRNA及蛋白的表达来反映EPCs分化程度;以免疫荧光染色观测F-actin的排列情况;应用Ras GTPase Pull-Down方法检测Ras活性。结果层流剪切力处理后,EPCs分化标记vWF及CD31的基因及蛋白表达较静止组明显升高(P<0.05),细胞骨架F-actin发生重排,Ras活性明显增高。细胞骨架稳定剂Jasplakinolide(JAS)及细胞骨架松弛剂Cytochalasin D(CytoD)预处理均不同程度地抑制了层流剪切应力所致的细胞骨架的重排、Ras活性的上调及EPCs分化效应(P<0.05),而过表达Ras则对层流剪切应力诱导的EPCs分化有明显促进作用(P<0.05)。结论一定大小的层流剪切应力可促进EPCs向内皮细胞分化,其机制可能与层流剪切应力重塑细胞骨架F-actin,进而影响Ras活性有关;这对于揭示受损血管内皮修复的具体机制、阐明动脉粥样硬化等心血管疾病的发病机理及临床防治此类疾病具有一定的意义。

关键词：层流剪切应力内皮祖细胞细胞骨架细胞培养细胞分化

釉成熟蛋白真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

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牙体牙髓牙周病学杂志 2009年第6期19卷 338-341,367页

作者：魏亚红郝建忠孙岩高玉光官秀梅潍坊医学院口腔医学院.口腔医学研究所山东潍坊261042

目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括... 详细信息

目的:构建釉成熟蛋白真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,并观察其在293T细胞中的表达情况。方法:以出生后6 d的昆明小鼠下颌磨牙中提取的总RNA为模板,设计合成特异性引物,通过RT-PCR法扩增小鼠的釉成熟蛋白[Amelotin(GeneID:71421)],包括编码区全长在内的部分cDNA序列,克隆到pMD18-T克隆载体,酶切鉴定正确;然后亚克隆至pcDNA3.1真核表达载体中,双酶切鉴定及测序正确。将构建的重组载体磷酸钙法转染293T细胞,检测Amelotin的表达情况。结果:成功克隆了Amelotin基因编码区全长序列;构建出重组真核表达载体pcDNA3.1-Amelotin,磷酸钙法转染后可检测到Amelotin基因在293T细胞中的表达。结论:构建了重组pcDNA3.1-Amelotin真核表达载体,并成功表达,为进一步研究该蛋白的生物学活性奠定了基础。

关键词：釉成熟蛋白重组真核表达载体pcDNA3.1 磷酸钙法转染

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气象卫星资料传输系统的优化

电信技术 2003年第1期 75-77页

作者：赵立成官秀梅国家卫星气象中心北京100081

1现有资料传输系统概述1.1现有资料传输系统的架构国家卫星气象中心是国家级的气象卫星资料接收处理与应用部门,负责接收、传输、处理和应用国内外的气象卫星资料.

关键词：气象卫星资料传输系统 ATM网光纤通信

剪切应力环境下的内皮祖细胞对肝星状细胞增殖和生物功能的影响

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中国应用生理学杂志 2018年第5期34卷 404-407页

作者：陈信信张晓芸丁玉真李鑫官秀梅李宏成敏崔晓栋潍坊医学院生物科学与技术学院山东潍坊261053 潍坊医学院临床医学院山东潍坊261053

目的:研究流体剪切应力条件下的内皮祖细胞(EPCs)对肝星状细胞(HSCs)增殖、粘附、迁移、凋亡等生物学功能以及成纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原I(Col-I)、胶原Ⅲ(Col-Ⅲ)表达的影响。方法:将HSCs与EPCs分别接种于共培养小... 详细信息

目的:研究流体剪切应力条件下的内皮祖细胞(EPCs)对肝星状细胞(HSCs)增殖、粘附、迁移、凋亡等生物学功能以及成纤维化因子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原I(Col-I)、胶原Ⅲ(Col-Ⅲ)表达的影响。方法:将HSCs与EPCs分别接种于共培养小室的上层和下层,共培养24 h后,给EPCs细胞施加12 dyne/cm^2剪切应力,持续24 h。消化细胞,采用CCK-8法检测HSCs的增殖;流式细胞术检测HSCs的凋亡率;细胞贴壁法检测HSCs的粘附功能; Boyden小室检测HSCs的迁移;荧光定量PCR法及Western blot分别检测HSCs的α-SMA、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA和蛋白质的表达情况。结果:在剪切应力条件下,EPCs生态小境能明显抑制HSCs的增殖、粘附和迁移能力,促进HSCs凋亡,下调HSCs中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA和蛋白质的表达。结论:在剪切应力条件下,EPCs生态小境对HSCs纤维化的发展具有一定抑制作用。

关键词：内皮祖细胞肝星状细胞剪切应力共培养生态小境