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嗜热解烃基因工程菌SL-21的构建

油气地质与采收率 2010年第1期17卷 80-82页

作者：宋永亭中国海洋大学化学化工学院山东青岛266100 中国石化股份胜利油田分公司采油工艺研究院山东东营257000

从以C15—C36直链烷烃为惟一碳源生长的解烃菌——地芽孢杆菌MD-2细胞中获得了1个新的烃降解基因——烷烃单加氧酶基因sladA。将基因sladA克隆到质粒pSTE33上,构建了重组质粒pSTalk。通过电转化将pSTalk转化入嗜热脱氮土壤芽孢杆菌ZJ-3... 详细信息

从以C15—C36直链烷烃为惟一碳源生长的解烃菌——地芽孢杆菌MD-2细胞中获得了1个新的烃降解基因——烷烃单加氧酶基因sladA。将基因sladA克隆到质粒pSTE33上,构建了重组质粒pSTalk。通过电转化将pSTalk转化入嗜热脱氮土壤芽孢杆菌ZJ-3内,构建了基因工程菌SL-21。SL-21兼具嗜热和解烃的功能,在70℃条件下,14d后对原油的降解率达75.08%。研究结果表明,可以通过体外重组的方式向嗜热菌中引入烃降解基因,从而构建嗜热解烃基因工程菌。

关键词：微生物采油烃类降解菌嗜热解烃基因质粒基因工程菌

一株嗜蜡嗜胶质基因工程菌ZH_(20)的构建与评价

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中国石油大学学报（自然科学版） 2012年第4期36卷 172-176页

作者：宋永亭王慧宋欣王静马挺中国海洋大学化学化工学院山东青岛266100 中国石化股份胜利油田分公司采油工艺研究院山东东营257000 南开大学生命科学学院天津300071

利用DNA转化法将嗜胶质菌的功能基因转入嗜蜡菌中,成功构建一株嗜蜡、嗜胶质基因工程菌ZH20,分析此菌株的生物特性及高温下对原油的作用。结果表明:ZH20的生长特性与受体菌基本相同,最高耐受温度为75℃,对pH值的适应范围较广(4～10),对... 详细信息

利用DNA转化法将嗜胶质菌的功能基因转入嗜蜡菌中,成功构建一株嗜蜡、嗜胶质基因工程菌ZH20,分析此菌株的生物特性及高温下对原油的作用。结果表明:ZH20的生长特性与受体菌基本相同,最高耐受温度为75℃,对pH值的适应范围较广(4～10),对盐(NaCl)的最大耐受量为12.5%;基因工程菌ZH20不仅保留受体菌的嗜蜡性能,同时还获得供体菌的嗜胶质性能,能够有效降低原油凝固点和黏度。

关键词：微生物采油基因工程菌生物降解清防蜡降黏

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油藏微生物生态研究

油藏微生物生态研究

作者：宋永亭山东大学

学位级别：硕士

近年来,微生物采油技术在全世界得到迅速的发展,显示出其良好的应用前景,受到各石油生产国的广泛关注。但是整体来看,微生物采油的潜力远未被发挥出来。其中一个重要的原因是对油藏环境中的微生物群落结构、功能缺乏系统认识,从而导致... 详细信息

近年来,微生物采油技术在全世界得到迅速的发展,显示出其良好的应用前景,受到各石油生产国的广泛关注。但是整体来看,微生物采油的潜力远未被发挥出来。其中一个重要的原因是对油藏环境中的微生物群落结构、功能缺乏系统认识,从而导致对油藏微生物的调控还远未达到预期的效果。本论文在建立适合油藏环境的微生物分子生态技术研究体系的基础上,完成低温、中温和高温三类油藏的微生物评价,以此确定微生物驱油技术油藏适用范围;同时应用建立的分子生态技术对微生物驱油现场试验进行跟踪监测分析,为优化区块的现场试验方案提供理论依据。本论文首先针对油藏环境特点,建立了基于16S rDNA,以变性梯度凝胶电泳分析(denaturing gradinent gelelectrophoresis,DGGE)方法、限制性片段长度多态性分析(Terminal-restriction fragment lengthpolymorphism,T-RFLP)方法为主的油藏微生物分子生态研究方法体系。该方法体系可以获得传统技术难以培养和鉴定的油藏种群的DNA信息,更加精确地揭示油藏微生物的种类和遗传多样性。应用建立的方法,对54℃、66℃、78℃和85℃等不同温度的油藏进行微生物生态结构分析。结果表明从低温区块(油藏温度50℃)到超高温区块(油藏温度85℃)各种不同温度类型的油藏,均有微生物活动。微生物数量和种类的多少与油藏温度高低没有直接的相关性。以不同类型油藏的微生物生态分析结果为基础,结合对区块流体性质、储层性质和生产动态等方面的分析,确定了微生物驱油技术的油藏适应范围。对实施过聚合物驱油技术的油藏进行了微生物生态分析。结果表明,聚合物驱后油藏的微生物数量和种类较为丰富,可以考虑将微生物提高采收率技术应用于聚合物驱后的油藏,进一步提高采收率。油藏微生物生态分析结果表明,罗801区块实施微生物驱油技术后,微生物的种类呈下降趋势,但微生物的丰度有所升高,同时现场增油效果明显。说明通过人为的干预,打破了油藏原有的微生物生态平衡系统,逐渐转化为有利于提高采收率的油藏微生物区系结构。这一结果表明,可以通过优化油藏微生物生态结构,提高原油采收率;单12区块在实施微生物采油后,由于注入选择性的激活剂,人为的干预打破了油藏原有的微生物生态平衡。油藏微生物种群为了适应新的营养环境,通过竞争、抑制、共生等途径进行群落结构的重新分布与调整,逐渐形成新的生态体系,保证整个系统的动态平衡。实施微生物采油12个月后,微生物的群落结构中以假单孢菌(Pseudomonas sp.)为优势菌种,该菌种的突出特点是具有特殊的代谢能力,可以降解石油烃类,改变原油的物性,发挥提高采收率作用。

关键词：微生物提高采收率油藏微生物生态 16S rDNA

罗801区块油藏环境厌氧微生物链的形成及其对微生物驱采收率的影响

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油田化学 2004年第2期21卷 182-186页

作者：宋永亭魏斌赵凤敏王静段传慧中国石化胜利油田公司采油工艺研究院山东东营257000

概述了油藏厌氧生境中的厌氧微生物链并给出图解式。根据胜利罗家油田罗 80 1区块微生物驱油试验中的监测数据 ,注入驱油菌BS、FM及营养物质后 ,试验区产出水中水解菌、产氢产乙酸菌、反硝化菌、产甲烷菌、同型产甲烷菌的总菌数由 10 0 ... 详细信息

概述了油藏厌氧生境中的厌氧微生物链并给出图解式。根据胜利罗家油田罗 80 1区块微生物驱油试验中的监测数据 ,注入驱油菌BS、FM及营养物质后 ,试验区产出水中水解菌、产氢产乙酸菌、反硝化菌、产甲烷菌、同型产甲烷菌的总菌数由 10 0 ～ 10 7个 /mL增加到 10 3 ～ 10 4个 /mL ,乙酸根浓度由 2 1.8mg/L增加到 4 0 0mg/L以上。由此推断 ,注入的水解类菌BS和FM及营养物质激发了油藏中各类厌氧菌的活性 ,通过各类菌群的繁殖代谢 ,形成了新的厌氧微生物链。该微生物链的首端为注入油藏的和油藏中原有的水解菌 ,以产氢产乙酸菌、反硝化菌、同型产乙酸菌为中间阶段 ,末端为产甲烷菌 ,给出了该厌氧微生物链的图解式 ,讨论了链中一些微生物的生长代谢、相互作用及驱油作用。介绍了罗 80 1区块微生物驱油试验的结果 :产油量递减率控制在 5 %以内 ,年产油量稳定在4 .4× 10 4t以上 ,平均年增产油量 1.2 7× 10 4t ,采收率已提高 2 .11% ,预计最终可提高采收率 5 .6 6 %。图 7表 1参5。

关键词：厌氧微生物微生物驱采收率地层矿化度食物链

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微生物采油技术与油田化学剂

油田化学 2002年第3期19卷 293-296页

作者：汪卫东宋永亭陈勇中国石化胜利油田公司采油工艺研究院山东东营257000

微生物采油技术研究和现场应用范围不断扩大 ,前景良好。本专论叙述了微生物采油与油田化学剂之间的关系 ,共分 6个部分 :①影响微生物采油的油田化学剂简介 ;②化学剂对微生物的不良作用 ,包括对微生物呼吸作用 ,蛋白质、核酸、结构大... 详细信息

微生物采油技术研究和现场应用范围不断扩大 ,前景良好。本专论叙述了微生物采油与油田化学剂之间的关系 ,共分 6个部分 :①影响微生物采油的油田化学剂简介 ;②化学剂对微生物的不良作用 ,包括对微生物呼吸作用 ,蛋白质、核酸、结构大分子合成及细胞壁功能的直接影响和通过改变环境介质渗透压、氧化还原位 ,pH值对微生物生长的间接影响 ;③化学剂影响的评价 ,包括测定最低影响浓度、作用持续时间 ,并考虑化学剂在地层内的变化 ;④化学剂不利影响的消除 ,包括筛选具有抗某种化学剂的菌种 ,培育具有特定性能的菌种 ,如可用于聚合物驱后油田的可降解聚合物的菌种。⑤微生物采油需要的化学剂 :碳源、氮源、磷源等 ,利用内源微生物的驱油技术。

关键词：微生物采油技术油田化学剂采油微生物微生物生长化学剂菌种选育综述

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高温高矿化度超稠油油藏细菌多样性分析

西安石油大学学报（自然科学版） 2012年第4期27卷 82-86,118页

作者：宋永亭李阳高光军蒋焱包木太中国海洋大学化学化工学院山东青岛266100 中国石化股份胜利油田分公司采油工艺研究院山东东营257000 中国石油化工股份有限公司北京100728

运用16S rDNA克隆文库技术分析研究了塔河油田高温高矿化度超稠油油藏中的细菌多样性.研究结果表明:在油藏温度100～130℃、地层水矿化度26×104mg/L、地面原油黏度10×104mPa.s的油藏环境中,存在丰富的细菌群落,其中包括Candidate divi... 详细信息

运用16S rDNA克隆文库技术分析研究了塔河油田高温高矿化度超稠油油藏中的细菌多样性.研究结果表明:在油藏温度100～130℃、地层水矿化度26×104mg/L、地面原油黏度10×104mPa.s的油藏环境中,存在丰富的细菌群落,其中包括Candidate division OP菌、盐单胞菌(Halomonas sp.)、耐盐芽孢杆菌(Bacillus halodurans)和油杆菌(Petrobacter sp.)等具有耐温、耐盐和降解原油的生理生化特性的菌群,同时还存在大量未培养的微生物.

关键词： 16SrDNA文库超稠油油藏油藏细菌多样性塔河油田

内源微生物提高原油采收率物理模拟驱油实验研究

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西安石油大学学报（自然科学版） 2005年第1期20卷 37-42页

作者：孔祥平包木太汪卫东陈勇宋永亭王修林中国海洋大学化学化工学院山东青岛266003 中国石化胜利油田有限公司采油工艺研究院山东东营257000

在分析国外内源微生物物理模拟驱油实验的基础上 ,采用单 12区块原油和原生水模拟地层条件 ,进行了内源微生物物理模拟驱油实验研究 .对残余油采收率、系统压力、醋酸根含量、生物气产量及组成进行了检测 .结果表明 ,采用空气辅助 (液气... 详细信息

在分析国外内源微生物物理模拟驱油实验的基础上 ,采用单 12区块原油和原生水模拟地层条件 ,进行了内源微生物物理模拟驱油实验研究 .对残余油采收率、系统压力、醋酸根含量、生物气产量及组成进行了检测 .结果表明 ,采用空气辅助 (液气比 1∶10 )激活好氧微生物 ,经过 36d的培养驱替 ,残余油采收率提高了 4 .7% ;依赖于整个油层生态系统的改善 ,在激活的厌氧微生物的主导作用下 ,经过两轮次 77d的培养驱替 ,残余油采收率提高了 8.3% ;实验结果验证了注水油层中好氧微生物—厌氧微生物演替降解石油的两阶段生物过程 ,生物气中甲烷的含量随培养时间的增加而增加 ,最高达 74 .4 % ;而始终未检测出硫化氢。

关键词：内源微生物驱油残余油提高原油采收率驱替油层物理模拟好氧微生物厌氧微生物降解

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产生物表面活性剂菌SP-7发酵液的性能

油田化学 2003年第2期20卷 183-185页

作者：潘永强李强鞠玉芹高光军宋永亭中国石化胜利油田公司采油工艺研究院山东东营257000

从胜利油田井口土壤中分离并培育出一株可产生生物表面活性剂的假单胞菌,命名为SP 7,考察了SP 7发酵液作为微生物采油用剂的相关性能。在含各种营养物的培养基中在37℃培养48h的SP 7菌发酵液,与等体积比的胜利河口油田一口井的原油(50... 详细信息

从胜利油田井口土壤中分离并培育出一株可产生生物表面活性剂的假单胞菌,命名为SP 7,考察了SP 7发酵液作为微生物采油用剂的相关性能。在含各种营养物的培养基中在37℃培养48h的SP 7菌发酵液,与等体积比的胜利河口油田一口井的原油(50℃粘度1019mPa·s)混合,生成O/W乳状液,长时静置后生成下相微乳状液。发酵液的油水界面张力为1.3mN/m。发酵液20℃时生成的泡沫稳定性(半衰期)较商品发泡剂新咪唑啉溶液略差,但50℃时则较好,泡沫体细小致密。发酵液在20～110℃热处理2h后,室温表面张力大体维持恒定(29.7～30.5mN/m);pH值在5.0～10.0范围的发酵液,室温表面张力基本不变(29.7～31.2mN/m);矿化度(NaCl质量浓度)在5.0×103～1.0×105mg/L范围的发酵液,室温表面张力也基本不变(29.7～30.3mN/M),矿化度为1.5×105mg/L时小幅上升至33.3mN/m。从发酵液中提取并纯化的生物表面活性剂,含量为2.1g/L,用IR方法鉴定为脂肽和糖脂,室温时其临界胶束浓度仅为36mg/L。SP 7发酵液可直接用于三次采油。介绍了筛选和培养菌种所用培养基的组成及从发酵液中分离和提纯生物表面活性剂的程序。图3表2参6。

关键词：产生物表面活性剂菌SP-7 发酵液性能胜利油田微生物采油

微生物采油用营养物质在石英砂上的静态和动态吸附规律

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油气地质与采收率 2009年第4期16卷 74-76页

作者：袁长忠宋永亭段传慧中国石化股份胜利油田分公司采油工艺研究院山东东营257000

为了确定微生物采油用营养物质在地层中的损耗情况,在模拟油藏条件下,分别利用浸泡法和物质平衡法研究了微生物采油常用营养物质(葡萄糖、硝酸钾、磷酸二氢钾)在石英砂上的静态和动态吸附规律。实验结果表明,各营养物质的静态吸附量和... 详细信息

为了确定微生物采油用营养物质在地层中的损耗情况,在模拟油藏条件下,分别利用浸泡法和物质平衡法研究了微生物采油常用营养物质(葡萄糖、硝酸钾、磷酸二氢钾)在石英砂上的静态和动态吸附规律。实验结果表明,各营养物质的静态吸附量和动态滞留量相差不大,其中葡萄糖的静态吸附量和动态滞留量最高,其静态吸附量为0.85 mg/g,硝酸钾和磷酸二氢钾的吸附量较小,仅为0.1mg/g左右;在动态吸附实验中,当注入1.5倍孔隙体积营养液时,岩心产出液中各营养物质的质量浓度与注入时的质量浓度接近,转水驱后,随着注入体积的增加,产出液中营养物质的质量浓度逐渐降低,当转水驱2倍孔隙体积时,产出液中各营养物质的质量浓度接近0,说明动态驱替时吸附作用较弱。

关键词：静态吸附动态吸附石英砂微生物采油营养物质