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猪札幌病毒荧光定量RT-PCR检测方法建立及遗传进化分析

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病毒学报 2024年第4期 811-822页

作者：杜松舒相华姚俊袁红张雪宋春莲云南农业大学云南省畜牧兽医科学院

猪札幌病毒（Porcine sapovirus,PoSaV）是一种引起猪急性胃肠炎的肠道病毒，对于生猪养殖业造成严重威胁。PoSaV感染猪只表现出的症状与其他腹泻病毒引起的症状相似，难以区分。为了检测该病毒并了解其在猪场中的流行情况，我们建立了... 详细信息

猪札幌病毒（Porcine sapovirus,PoSaV）是一种引起猪急性胃肠炎的肠道病毒，对于生猪养殖业造成严重威胁。PoSaV感染猪只表现出的症状与其他腹泻病毒引起的症状相似，难以区分。为了检测该病毒并了解其在猪场中的流行情况，我们建立了一种PoSaV检测方法。本研究根据GenBank中GIII基因型，设计引物，优化反应条件，通过特异性评价，灵敏度和重复性检测，建立荧光定量RT-PCR方法。本试验从贵州省获取20份腹泻母猪肛拭子样品，通过RT-PCR进行检测，并进行VP1全基因扩增测序，使用MEGA7.0进行系统进化树构建和同源性分析。结果显示，建立的荧光定量RT-PCR检测方法具有较强特异性和高灵敏度，在拷贝值为1×101·μL-1时可以达到普通RT-PCR方法 100倍以上的检出限。此外，该方法具有良好的重复性和稳定性，批内变异系数与批间变异系数均小于1%；在检测猪腹泻临床样本中发现阳性率为85%(17/20)。将获得的17条VP1全基因序列与国内外14条参考毒株进行比对，结果显示：所有测序毒株与参考序列核苷酸同源性介于81.0%-99.2%，氨基酸同源性介于80.8%-97.6%，并且均与美国经典Cowden毒株亲缘性较远。所有测序毒株与YNAN、YNAN2020亲缘性较近，其中5株（GZ-VP1-3、GZ-VP1-5、GZ-VP1-6、GZ-VP1-9、GZ-VP1-11）与云南省分离株YNAN核苷酸及氨基酸同源性为99.2%、96.9%-97.6%，亲缘性最为亲近，表明可能由一个原始毒株进化而来。测序毒株均在同一分支上亲缘性较近，但核苷酸及氨基酸同源性在91.8%-100%，显示VPl基因存在一定程度变异。本研究成功建立一种PoSaV检测方法，深入分析了当前毒株的遗传变异情况，对PoSaV防控有着一定的启示作用。

关键词：猪札幌病毒荧光定量PCR VP1基因遗传进化分析

伪狂犬病病毒感染小鼠基质金属蛋白酶-9介导紧密连接蛋白损伤血脑屏障的研究

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畜牧兽医学报 2024年第5期55卷 2186-2194页

作者：张颖宋春莲张莹沈鸿舒相华杨洪贵云南农业大学动物医学院昆明650201 昆明伟牧得生物科技有限公司昆明650051 云南省红河哈尼族彝族自治州泸西县畜牧技术推广站泸西652499

旨在探究伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)对小鼠血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)通透性的影响及基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)与紧密连接(tight junction, TJ)的相关性。将昆明SPF小鼠96只,随机平均分为对照组和3个试验组,24只对照组小鼠滴鼻生理盐水,72只试验组小鼠滴鼻感染PRV,将试验组分为感染24 h组、感染48 h组和感染72 h组,每组24只。观察临床症状并采用H&E染色观察病理损伤情况;通过改良型神经学评分和脑组织病毒载量测定评价PRV感染后神经损伤情况与病毒载量的关系;通过干湿重法和伊文斯蓝染色法探究血脑屏障的通透性;通过mRNA和蛋白表达差异水平探究MMP-9和TJ的相关性。结果显示,攻毒后脑组织病变程度随时间延长而加剧,在攻毒48 h后,脑组织病毒载量出现显著性差异;神经功能损伤评分在第72小时达到最高;干/湿重值及脑组织伊文斯蓝浓度呈时间依赖性;MMP-9与TJ的相关性结果表明,PRV攻毒后MMP-9表达量增加,TJ表达量减少。结果表明,PRV感染通过MMP-9介导的TJ蛋白表达量的降低损害BBB的完整性及通透性。综上所述,PRV感染可能通过MMP-9介导的破坏来损害BBB,为进一步阐明PRV入侵机制奠定基础。

关键词： MMP-9 伪狂犬病病毒血脑屏障 TJ蛋白

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黄芩茎叶发酵黄酮的体外抑菌及抗炎作用研究

饲料研究 2024年第1期47卷 61-66页

作者：林钧艺宋春莲张莹张智慧全伟舒相华云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省农村科技服务中心云南昆明6650021

试验旨在探究黄芩茎叶发酵黄酮的抗菌抗炎效果,以大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌为试验菌种,测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及抑菌圈大小。50只SPF级昆明小鼠随机分为5组,每组10只,除对照组(Con组)各组小鼠... 详细信息

试验旨在探究黄芩茎叶发酵黄酮的抗菌抗炎效果,以大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌为试验菌种,测定最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)及抑菌圈大小。50只SPF级昆明小鼠随机分为5组,每组10只,除对照组(Con组)各组小鼠均腹腔注射脂多糖(LPS,4 mg/kg),Con组灌胃相同剂量的生理盐水,阳性药物组(LPS+DM组)灌喂0.5 mg/kg地塞米松,原药组(LPS+SBSL组)和发酵药物组(LPS+FSBSL组)灌喂8 mg/kg原药和发酵黄酮。试验期7 d。结果显示,发酵黄酮MIC、MBC值最低的分别是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌;在250 g/L条件下,发酵黄酮对大肠杆菌、痢疾志贺氏菌和金黄色葡萄球菌具有中等敏感性。与LPS组相比,LPS+FSBSL组小鼠死亡率明显降低;LPS+SBSL组小鼠肝脏指数极显著高于LPS+FSBSL组(P<0.01),LPS组脾脏指数极显著高于Con组(P<0.01)。与LPS组比,LPS+DM组和LPS+SBSL组小鼠血清白细胞介素-6(IL-6)含量极显著升高(P<0.01);与LPS+DM组比,LPS+SBSL组和LPS+FSBSL组小鼠血清IL-6含量极显著升高(P<0.01)。与Con组比,LPS组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,LPS+FSBSL组小鼠肺脏组织中IL-6含量显著升高(P<0.05)。与LPS+SBSL组相比,LPS+FSBSL组小鼠肺脏组织中白细胞介素-1β(IL-1β)含量显著升高(P<0.05)。研究表明,黄芩茎叶发酵黄酮对痢疾志贺氏菌和金黄色葡萄球菌均有较好的抑菌效果,安全剂量为8 mg/kg,对LPS感染后小鼠的死亡率具有抑制作用,同时可以调节LPS感染后小鼠血清和肺脏中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α含量。

关键词：黄芩茎叶发酵黄酮体外抑菌炎症反应

树鼩感染HEV致中枢神经损伤与IL-4和IL-5表达相关性研究

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中国兽医科学 2024年第3期54卷 403-409页

作者：朱培英杨国琴宋春莲付忠海孙以鑫武鑫柴俊李文贵云南农业大学动物医学院云南昆明650201 滇西科技师范学院生物技术与工程学院云南临沧677000

戊型肝炎病毒(HEV)感染人可引起神经系统等肝外损伤,其机理尚不清楚。本研究经腹腔注射建立HEV树鼩实验感染模型后,采用RT-PCR法检测粪便、肝和脑等组织中HEV负链RNA,实时荧光定量PCR检测感染树鼩脑、粪便、小肠以及肝中病毒的消长,测... 详细信息

戊型肝炎病毒(HEV)感染人可引起神经系统等肝外损伤,其机理尚不清楚。本研究经腹腔注射建立HEV树鼩实验感染模型后,采用RT-PCR法检测粪便、肝和脑等组织中HEV负链RNA,实时荧光定量PCR检测感染树鼩脑、粪便、小肠以及肝中病毒的消长,测定谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平。组织病理学观察各组织的损伤情况以及炎症因子IL-4、IL-5在不同感染时间段的表达水平。结果显示,感染第7天全部组织均能检测到病毒负链RNA的复制;AST、ALT与对照组相比明显升高。组织病理学观察发现肝等组织出现不同程度的损伤,脑膜扩张充血,胶质细胞浸润,小脑出现大量空泡样结构、白质充血,脊髓内各类神经元形状大小不一,神经元广泛变性坏死、胞核崩解固缩,伴有胶质细胞增生。IL-4和IL-5 m RNA转录水平在感染早期和中期均有明显的升高。结果表明,HEV可突破血脑屏障进入脑和脊髓等实质组织,并引起脑和脊髓的病理损伤,感染早期IL-4和IL-5在不同组织有不同程度的升高,与HEV感染引起的脑和脊髓等组织的损伤有关联。

关键词：戊型肝炎树鼩中枢神经损伤 IL-4 IL-5

基于SWOT—PEST模型探究云南省威信县畜牧业高质量发展路径

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畜牧业环境 2024年第2期 151-153页

作者：江婧华起建凌王安奎宋春莲云南农业大学经济管理学院云南昆明650201 云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省草地动物科学研究院云南昆明650212

随着国家“西部大开发”“扶贫攻坚”“乡村振兴”战略的开展,给威信县这个著名的革命胜利转折地畜牧业的发展带来了发展机遇。文章运用SWOT—PEST矩阵分析模型探究威信县畜牧业发展现状进行分析,提出科学引导畜牧业发展,提升良种化水平... 详细信息

随着国家“西部大开发”“扶贫攻坚”“乡村振兴”战略的开展,给威信县这个著名的革命胜利转折地畜牧业的发展带来了发展机遇。文章运用SWOT—PEST矩阵分析模型探究威信县畜牧业发展现状进行分析,提出科学引导畜牧业发展,提升良种化水平,提升疫病防控水平,重点规模养殖场达到标准化生产,促进畜牧业现代化和高质量发展。

关键词： SWOT—PEST分析模型现代化畜牧威信县

维持性血液透析患者营养素养现状及其影响因素分析

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邵阳学院学报（自然科学版） 2024年第3期21卷 98-107页

作者：刘炎灵宋春莲苏铭钰方艳春杨李梅田娟南华大学护理学院湖南衡阳421001 邵阳市中心医院湖南邵阳422000 邵阳学院附属第一医院湖南邵阳422000

目的调查维持性血液透析(maintenance hemodialysis, MHD)患者营养素养的现状,并分析其影响因素,为制定营养素养干预方案提供参考依据。方法采用便利抽样法选取2023年10月至12月在邵阳市区3家三级甲等医院血液净化中心行MHD的患者。... 详细信息

目的调查维持性血液透析(maintenance hemodialysis, MHD)患者营养素养的现状,并分析其影响因素,为制定营养素养干预方案提供参考依据。方法采用便利抽样法选取2023年10月至12月在邵阳市区3家三级甲等医院血液净化中心行MHD的患者。采用一般人口学资料调查表、MHD患者营养素养测评问卷、医院焦虑抑郁量表、社会支持评定量表、慢性病自我效能量表、GLIM营养不良诊断标准进行调查,分析MHD患者营养素养的现状及影响因素。结果共纳入555名MHD患者,营养素养平均得分为92.823±13.643分,5个维度中营养态度得分为3.814±0.681,营养知识平均分为3.783±0.647,营养技能平均分为3.647±0.682,信息互动平均分为3.596±0.773,信息评判得分为3.630±0.691。多元线性回归分析结果显示居住地、文化程度、个人月收入、焦虑、抑郁、社会支持、自我效能是MHD患者营养素养的主要影响因素(P<0.05)。结论 MHD患者营养素养处于中等水平,需要重点关注来自农村、文化程度低、月收入低和患有焦虑抑郁的MHD患者,鼓励医护、病友和家人多支持和互动,提高其自我效能,不断提升其营养素养水平。

关键词：维持性血液透析营养素养影响因素

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猕猴桃品牌文化建设的思考

现代园艺 2024年第3期47卷 56-58,62页

作者：段兴云赵星宇杨荣萍宋春莲杨荣松吴兴恩云南农业大学园林园艺学院云南昆明650500 云南农业大学动物医学院云南昆明650500 德宏州芒市农业技术推广中心云南德宏678400

农业品牌文化是农业产业高质量、可持续发展的内生动力。我国自1955年人工引种猕猴桃以来,已经发展为猕猴桃生产和消费第一大国,但行业的话语权依然被“佳沛”所牢牢掌握。从品牌文化的物质、精神、行为3个维度出发,理清“佳沛”品牌建... 详细信息

农业品牌文化是农业产业高质量、可持续发展的内生动力。我国自1955年人工引种猕猴桃以来,已经发展为猕猴桃生产和消费第一大国,但行业的话语权依然被“佳沛”所牢牢掌握。从品牌文化的物质、精神、行为3个维度出发,理清“佳沛”品牌建设的百年历程,结合我国猕猴桃产业和品牌的现状,就我国猕猴桃品牌文化发展提出建议,为我国猕猴桃品牌文化建设提供参考。

关键词：猕猴桃产业品牌文化

PRV感染PK-15细胞后相关炎性通路及炎症因子表达变化

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现代畜牧兽医 2024年第2期 9-14页

作者：张王芝舒相华张莹杨广佳全伟储宗秀宋春莲云南农业大学动物医学院云南昆明650201 云南省农村科技服务中心云南昆明650021 昆明金航辰生物科技有限公司云南昆明650501

试验旨在了解猪伪狂犬病毒(PRV)感染宿主后炎症动态变化,以猪肾细胞为宿主,选用炎性通路中Toll样受体4(TLR4)、骨髓分化一级反应蛋白88(MyD88)、核因子kB(NF-kB)和炎症因子干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-... 详细信息

试验旨在了解猪伪狂犬病毒(PRV)感染宿主后炎症动态变化,以猪肾细胞为宿主,选用炎性通路中Toll样受体4(TLR4)、骨髓分化一级反应蛋白88(MyD88)、核因子kB(NF-kB)和炎症因子干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)为研究指标。通过PRV感染PK-15细胞和BHK-21细胞,对比分析两者细胞感染量(TCID_(50))、细胞病变(CPE)和病毒载量;选取PRV较敏感细胞,设计炎性通路因子特异性引物,用实时荧光定量PCR检测不同时间点TLR4、MyD88和NF-kB表达量,ELISA测定IFN-α、IFN-β、TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子含量。结果显示,PK-15细胞、BHK-21细胞的TCID_(50)分别为10^(-8.98)/0.1 mL和10^(-8.58)/0.1 mL;在感染PRV第18 h均见典型CPE。PK-15细胞病毒载量较高,且18 h内PK-15的CPE程度与病毒载量呈正相关。与未感染的PK-15细胞相比,PRV感染PK-15细胞后TLR4、MyD88和NF-kB表达量均在感染后0~6 h时升高,感染后第12 h时极显著降低(P<0.01);除IFN-β外的炎症因子含量总体呈先下降后上升趋势。研究表明,PRV感染宿主过程中可引起TLR4-MyD88-NF-kB通路表达量升高,促进炎症因子变化抵抗病毒感染,TLR4-MyD88-NF-kB炎症通路在抗PRV感染过程中发挥重要作用。

关键词： PRV PK-15细胞炎症通路炎症因子 RT-qPCR

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岩陀黄酮与黄芩多糖复合物安全性评价

饲料工业 2022年第23期43卷 33-37页

作者：潘琼王余磊宋春莲卜仕金舒相华云南农业大学动物医学院云南昆明650201 扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为探讨岩陀黄酮与黄芩多糖复合物的药用安全性,为其开发利用提供科学依据。开展了大鼠经口急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、小鼠精子畸形试验和骨髓细胞微核试验,对其进行安全性评价。结果显示,岩陀黄酮与黄芩多糖复合物对... 详细信息

为探讨岩陀黄酮与黄芩多糖复合物的药用安全性,为其开发利用提供科学依据。开展了大鼠经口急性毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验、小鼠精子畸形试验和骨髓细胞微核试验,对其进行安全性评价。结果显示,岩陀黄酮与黄芩多糖复合物对大鼠经口染毒半致死量(LD50)>5 g/kg·BW,为无毒级别,大鼠无临床症状和明显可见的病理变化;两次鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验表明无致突变性;小鼠精子畸形率为1.99%~2.06%,高中低3个剂量组精子畸形率与阴性对照组比较差异不显著(P>0.05);骨髓细胞微核率高、中、低3个剂量组与阴性对照组比较差异不显著(P>0.05)。在本试验条件下,岩陀黄酮与黄芩多糖复合物属实际无毒物质,在2 500 mg/kg·BW内对试验动物未见急性毒性和遗传毒性。

关键词：岩陀黄酮黄芩多糖经口急性毒性试验回复突变试验小鼠精子畸形试验小鼠骨髓细胞微核试验