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人釉原蛋白基因转导对人骨髓基质细胞增殖和碱性磷酸酶合成的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2011年第5期31卷 538-542页

作者：胡景超束蓉宋忠臣程岚上海交通大学医学院附属第九人民医牙周科上海市口腔医学研究所上海市口腔医学重点实验室上海200011

目的观察慢病毒介导的人釉原蛋白(hAm)基因转导对人骨髓基质细胞(hBMSCs)增殖及细胞成骨分化标志物碱性磷酸酶(ALP)合成的影响。方法采用RT-PCR技术获取hAm编码基因,扩增产物与携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体质粒(FUGW)连接构建重... 详细信息

目的观察慢病毒介导的人釉原蛋白(hAm)基因转导对人骨髓基质细胞(hBMSCs)增殖及细胞成骨分化标志物碱性磷酸酶(ALP)合成的影响。方法采用RT-PCR技术获取hAm编码基因,扩增产物与携带绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体质粒(FUGW)连接构建重组慢病毒载体质粒FUAmW,以聚乙烯亚胺(PEI)法三质粒共转染293T细胞组装获取慢病毒,并感染hBMSCs(目的基因转导组);以感染FUGW和未感染病毒的hBMSCs分别作为对照基因转导组和空白对照组。流式细胞仪测定慢病毒感染效率,RT-PCR鉴定细胞hAm表达;MTT比色法检测细胞增殖;慢病毒感染后第7天,倒置相差显微镜观察各组细胞ALP染色情况;感染后第4、7、10天,采用RT-PCR技术检测各组hBMSCs内ALP mRNA表达。结果目的基因转导组细胞FUAmW的感染效率达40.29%,RT-PCR检测到540 bp的目的基因产物条带;细胞增殖水平显著高于对照基因转导组和空白对照组(P<0.05);慢病毒感染后第7天,目的基因转导组ALP染色阳性细胞数量明显少于对照基因转导组和空白对照组;感染后第4、7、10天,目的基因转导组细胞ALP mRNA表达显著低于对照基因转导组和空白对照组。结论导入外源性Am基因能刺激hBMSCs增殖,但细胞内ALP mRNA表达下调。

关键词：骨髓基质细胞重组慢病毒载体釉原蛋白基因转导

伴阿尔茨海默病牙周炎患者血清Th17/Treg相关细胞因子水平变化研究

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上海交通大学学报（医学版） 2023年第5期43卷 600-605页

作者：谢欣宜周薇邱澈沈慧宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011

目的·观察血清Th17/Treg水平的变化对阿尔茨海默病与牙周炎的影响。方法·纳入2020年6月—2021年12月就诊于上海交通大学医学院附属精神卫生中心老年科共18位伴阿尔茨海默病的牙周炎患者与同时期就诊于上海交通大学医学院附属第九人民... 详细信息

目的·观察血清Th17/Treg水平的变化对阿尔茨海默病与牙周炎的影响。方法·纳入2020年6月—2021年12月就诊于上海交通大学医学院附属精神卫生中心老年科共18位伴阿尔茨海默病的牙周炎患者与同时期就诊于上海交通大学医学院附属第九人民医院共15位认知功能正常的牙周炎患者,检查并记录患者探诊深度(probing depth,PD)、附着丧失(clinical attachment loss,CAL)及探诊出血位点比例(percentage of bleeding on probing,BOP%)。使用酶联免疫吸附法检测血清中Th17相关细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-17、IL-22及Treg相关细胞因子IL-4、IL-10、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)水平。采用样本独立t检验比较2组牙周指标与细胞因子水平的差异,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果·伴阿尔茨海默病的牙周炎患者PD(P=0.021)、CAL(P=0.023)及BOP%(P=0.018)均显著高于认知功能正常的牙周炎患者。伴阿尔茨海默病的牙周炎患者血清IL-6(P=0.010)、IL-17(P=0.022)、IL-22(P=0.031)水平均显著高于认知功能正常的牙周炎患者;同时,组中IL-4(P=0.002)及IL-10(P=0.049)、TGF-β(P=0.006)水平相较于认知功能正常的牙周炎患者显著降低。结论·伴阿尔茨海默病牙周炎患者的牙周状况比认知功能正常的牙周炎患者差,Th17相关促炎细胞因子升高,而Treg相关抗炎因子降低,说明牙周炎可能通过介导Th17/Treg相关的慢性炎症反应影响阿尔茨海默病的发生发展。

关键词：阿尔茨海默病牙周炎细胞因子 Th17细胞 Treg细胞

炎症微环境下重组人釉原蛋白对人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2016年第1期36卷 33-37页

作者：廖蔚文宋忠臣束蓉董家辰上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科口腔医学院上海市口腔医学重点实验室上海200011

目的观察在炎症微环境下,重组人釉原蛋白(rhAm)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)炎症因子表达的影响。方法体外培养hPDLCs,采用免疫组织化学染色法鉴定hPDLCs。用10μg/m L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)脂多糖(LPS)... 详细信息

目的观察在炎症微环境下,重组人釉原蛋白(rhAm)对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)炎症因子表达的影响。方法体外培养hPDLCs,采用免疫组织化学染色法鉴定hPDLCs。用10μg/m L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)脂多糖(LPS)模拟炎症微环境,选取20μg/m L rhAm作用于hPDLCs,运用实时荧光定量PCR和ELISA技术检测炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6和IL-8的表达。结果免疫组织化学染色结果证实,培养细胞为hPDLCs。在所检测的4个时间点(6、12、24、72 h),10μg/m L *** LPS均可诱导IL-1β、IL-6和IL-8的表达;加入20μg/mL rhAm后,各因子表达均有所降低。结论 rhAm可以抑制炎症微环境下h PDLCs炎症因子的表达。

关键词：牙周膜成纤维细胞炎症微环境重组人釉原蛋白炎症因子

原花青素B2对人牙周膜细胞炎症介质表达的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2019年第2期39卷 120-125页

作者：顾丽芬杨涛高颖周薇宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔医学院牙周病科国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所中国人民解放军93313部队中国人民解放军第208医院461临床部

目的·观察原花青素B2对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)炎症介质表达的影响。方法·组织块法体外培养hPDLCs;噻唑蓝比色法观察原花青素B2对hPDLCs活性的影... 详细信息

目的·观察原花青素B2对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)炎症介质表达的影响。方法·组织块法体外培养hPDLCs;噻唑蓝比色法观察原花青素B2对hPDLCs活性的影响;原花青素B2预处理hPDLCs 1 h后,予以LPS,实时荧光定量PCR和ELISA检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6及IL-8的mRNA和蛋白的表达;荧光显微镜下观察细胞内活性氧的变化;Griess法检测培养上清液中一氧化氮(NO)的水平。结果·当原花青素B2浓度达到100.00μg/mL时可增强hPDLCs的活性。原花青素B2可抑制LPS诱导的IL-1β、IL-6及IL-8的mRNA和蛋白的表达,降低活性氧和NO的水平。结论·原花青素B2可抑制牙龈卟啉单胞菌LPS诱导的hPDLCs炎症介质的表达,发挥一定的抗炎作用。

关键词：牙周膜细胞原花青素B2 脂多糖炎症介质

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重组釉原蛋白的研究进展

牙体牙髓牙周病学杂志 2011年第1期21卷 48-51页

作者：林智恺(综述束蓉(审校) 宋忠臣(审校) 上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院牙周科上海市口腔医学研究所上海200011

重组釉原蛋白(recombinant amelogenin,rAm)是通过生物工程技术得到的一类纯化蛋白,许多研究结果证实其可以促进牙周组织再生。而目前对于rAm的结构功能和促进牙周组织再生的具体机制尚不完全清楚,因此近年来有许多关于rAm各方面的研究... 详细信息

重组釉原蛋白(recombinant amelogenin,rAm)是通过生物工程技术得到的一类纯化蛋白,许多研究结果证实其可以促进牙周组织再生。而目前对于rAm的结构功能和促进牙周组织再生的具体机制尚不完全清楚,因此近年来有许多关于rAm各方面的研究。该文从rAm的分类、表达纯化、结构及其对牙周组织再生的促进作用和机制等方面的研究进展作一综述。

关键词：重组釉原蛋白牙周组织再生结构功能

硫酸吲哚酚对人牙周膜细胞增殖及炎症因子表达的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2020年第4期40卷 437-442页

作者：夏欣怡陈慧文胡苡宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院牙周病科国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所上海200011

目的·探索硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)增殖、炎症因子和活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达的影响。方法·采用组织块培养法体外培养hPDLCs;采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察IS(按0、62.5、125、250、500、1000μmol/L分组)对hPDLCs增殖活性的影响;采用实时荧光定量PCR和ELISA检测各组炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA和蛋白的表达;采用2',7'-二氯荧光素二乙酸盐(2',7'-dichlorofluorescin diacetate,DCFDA)荧光探针检测各组hPDLCs胞内ROS的表达。结果·在24、48、72 h时,125μmol/L的IS可抑制hPDLCs增殖,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05),且抑制作用呈浓度和时间依赖性;其可促进hPDLCs炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA和蛋白的表达,上调胞内ROS水平。结论·IS可通过抑制hPDLCs活性、促进炎症因子表达和提高胞内ROS水平,从而在慢性肾病与牙周炎的相互关联中起重要作用。

关键词：牙周炎慢性肾衰竭硫酸吲哚酚

重组全长人釉原蛋白对人成纤维细胞黏附、增殖、迁移的影响

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上海口腔医学 2013年第1期22卷 7-12页

作者：林智恺束蓉程岚宋忠臣郭秋曼张秀丽上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院牙周科上海200011 上海市口腔医学研究所、上海市口腔医学重点实验室上海200011

目的：比较重组25kDa全长人釉原蛋白（recombinanthumanamelogenin，rhAm）和提取的猪釉基质蛋白（enamelmatrixproteins，EMPs）对人牙周膜成纤维细胞（***）和人包皮成纤维细胞（foreskinfibroblasts，HFF）生物学特性的影响，初步探讨rhAm促进牙周组织再生的可能机制。方法：选择BL21／pET28a—His—SUMO—rhAm表达系统，在适宜的条件下，经诱导表达和酶切纯化．得到25kDa全长rhAm．采用SDS—PAGE和Western印迹鉴定，乙酸法提纯EMPs。体外培养HPDLF和HFF．采用不同浓度的rhAm和EMPs分别刺激HPDLF、HFF，观察并比较2种蛋白对细胞黏附、增殖和迁移能力的影响。采用SAS5．0软件包对数据进行统计学分析。结果：10—20μg／mLrhAm能显著促进人牙周膜成纤维细胞和人包皮成纤维细胞的黏附、增殖和迁移（P〈0．05），其作用效果与200μg／mLEMPs相似（P〉0．05）。结论：25kDarhAm和EMPs对成纤维细胞具有相似的生物学作用。rhAm和EMPs可通过增强牙周膜成纤维细胞的生物学活性．从而促进牙周组织再生。

关键词：重组人釉原蛋白猪釉基质蛋白成纤维细胞增殖黏附迁移

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慢性牙周炎中淀粉样前体蛋白家族的表达研究

上海交通大学学报（医学版） 2016年第9期36卷 1282-1286页

作者：周薇张璇李笑甜张静宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院上海市口腔医学研究所上海市口腔医学重点实验室上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院药剂科上海200011 上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海200011

目的·观察淀粉样前体蛋白(APP)家族在慢性牙周炎牙龈组织中的表达情况,及其在炎症微环境下人牙龈成纤维细胞(HGF)中的表达。方法·采用real-time PCR技术和免疫组化法分别检测健康成人和慢性牙周炎病例牙龈组织中APP家族基因和蛋白表... 详细信息

目的·观察淀粉样前体蛋白(APP)家族在慢性牙周炎牙龈组织中的表达情况,及其在炎症微环境下人牙龈成纤维细胞(HGF)中的表达。方法·采用real-time PCR技术和免疫组化法分别检测健康成人和慢性牙周炎病例牙龈组织中APP家族基因和蛋白表达变化。体外培养HGF细胞,用1μg/m L牙龈卟啉单胞菌脂多糖(P.g-LPS)模拟炎症微环境,运用real-time PCR技术检测APP家族基因表达。结果·慢性牙周炎组与健康组相比,APP和APLP2基因和蛋白表达均显著升高,APLP1无明显变化。HGF细胞在P.g-LPS刺激后APP、APLP1和APLP2基因表达均升高。结论·APP家族可能在慢性牙周炎发生发展过程中发挥一定作用。

关键词：淀粉样前体蛋白家族慢性牙周炎人牙龈成纤维细胞炎症微环境

隧道技术联合上皮下结缔组织移植术治疗下前牙舌侧牙龈退缩1例

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中华口腔医学杂志 2022年第12期57卷 1243-1246页

作者：董家辰廖悦陈慧文宋忠臣上海交通大学医学院附属第九人民医院牙周病科上海交通大学口腔医学院国家口腔医学中心国家口腔疾病临床医学研究中心上海市口腔医学重点实验室上海市口腔医学研究所中国医学科学院口腔颌面再生医学创新单元上海200011

舌侧牙龈退缩虽较少见, 但可能给患者带来牙齿敏感等不适。下颌牙齿舌侧的解剖结构较特殊, 膜龈手术治疗难度大。本文介绍1例下前牙舌侧牙龈退缩的病例, 患者接受了隧道技术联合上皮下结缔组织移植术, 术后舌侧退缩的根面得到很好的覆... 详细信息

舌侧牙龈退缩虽较少见, 但可能给患者带来牙齿敏感等不适。下颌牙齿舌侧的解剖结构较特殊, 膜龈手术治疗难度大。本文介绍1例下前牙舌侧牙龈退缩的病例, 患者接受了隧道技术联合上皮下结缔组织移植术, 术后舌侧退缩的根面得到很好的覆盖, 且软组织稳定, 牙龈厚度增加明显。术后随访1年效果良好, 证实隧道技术联合上皮下结缔组织移植术可以很好地治疗舌侧牙龈退缩。

关键词：牙龈退缩牙齿敏感上皮下结缔组织移植术隧道技术牙龈厚度膜龈手术解剖结构软组织