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云南省土杂鸡呼吸系统疫病病因分析

黑龙江畜牧兽医 2018年第13期 142-145页

作者：王建聂宋建领文山市柳井彝族乡农业综合服务中心云南文山663012 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

为了分析云南省土杂鸡呼吸系统疫病病因,分别在云南省楚雄、安宁和石林等地采集出现呼吸系统疫病土杂鸡的喉气管、肺脏、脾脏等组织样品57份,采用RT-PCR或PCR方法对采集的样品进行新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传... 详细信息

为了分析云南省土杂鸡呼吸系统疫病病因,分别在云南省楚雄、安宁和石林等地采集出现呼吸系统疫病土杂鸡的喉气管、肺脏、脾脏等组织样品57份,采用RT-PCR或PCR方法对采集的样品进行新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、鼻气管鸟杆菌、副鸡嗜血杆菌和支原体等传染性疫病病原核酸检测。结果表明：有3份样品检测显示新城疫病毒核酸呈阳性,阳性率为5.26%;4份样品检测显示禽流感病毒核酸呈阳性,阳性率为7.02%;1份样品检测显示鸡传染性支气管炎病毒核酸呈阳性,阳性率为1.75%;11份样品检测显示鸡传染性喉气管炎病毒核酸呈阳性,阳性率为19.30%;19份样品检测显示鼻气管鸟杆菌核酸呈阳性,阳性率为33.33%;28份样品检测显示副鸡嗜血杆菌核酸呈阳性,阳性率为49.12%;48份样品检测显示支原体核酸呈阳性,阳性率为84.21%;9份样品未检测到上述病原核酸,占检测总数的15.79%。说明云南省土杂鸡呼吸系统疫病由多种病原引起,其中以支原体和副鸡嗜血杆菌感染为主。

关键词：土杂鸡呼吸系统新城疫病毒禽流感病毒传染性喉气管炎病毒鼻气管鸟杆菌副鸡嗜血杆菌支原体

一株蛋鸡新城疫病毒的分离鉴定及全基因组序列分析

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中国畜牧兽医 2020年第1期47卷 221-228页

作者：李佳佳宋建领西南林业大学昆明650224 云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

为研究云南新城疫病毒(NDV)分子流行特性和致病性,对云南省1个蛋鸡场的组织样品进行病原分离,通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR检测分离毒株,证明为NDV。通过病毒最小致死量(MLD)、鸡胚半数感染量(EID 50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、脑内... 详细信息

为研究云南新城疫病毒(NDV)分子流行特性和致病性,对云南省1个蛋鸡场的组织样品进行病原分离,通过血凝、血凝抑制试验和RT-PCR检测分离毒株,证明为NDV。通过病毒最小致死量(MLD)、鸡胚半数感染量(EID 50)、鸡胚平均死亡时间(MDT)、脑内接种致病指数(ICPI)和静脉接种致病指数(IVPI)测定病毒毒力,结果EID 50为10-4.4,MLD为10-4,MDT为97.5 h,ICPI为0,IVPI为0,显示分离株为弱毒株。高通量测序及遗传进化分析发现,分离毒株基因组全长为15198 bp,从3′端到5′端有6个结构基因依次为NP-P-M-F-HN-L,各基因之间有1~48个核苷酸间隔。全基因组、F和HN基因遗传进化分析证明分离毒株属于ClassⅠ分支,F基因ORF全长为1662 bp,编码553个氨基酸,F蛋白裂解位点氨基酸序列为112-ERQERL-117,符合NDV弱毒裂解位点特征,HN基因ORF全长为1851 bp,编码616个氨基酸,在HN基因保守区域234-NRKSCS-239位氨基酸序列没有发生变异。F蛋白有6个糖基化位点比较保守,HN蛋白有6个潜在的糖基化位点,但与LaSota相比存在缺失的和多出的糖基化位点。F蛋白半胱氨酸残基分布在76、199、338、347、362、370、394、399、401、424、514、523位氨基酸,F蛋白中性抗原位点在72、75、79和170位氨基酸发生了变异,HN蛋白受体结合部位和NA活性位点氨基酸为174R、401E、416R、526Y,未发生变异。本研究首次报道了云南省蛋鸡新城疫ClassⅠ毒株的全基因序列特征,为新城疫病毒ClassⅠ毒株研究奠定了基础。

关键词：新城疫病毒(NDV) 高通量测序 ClassⅠ F基因 HN基因进化分析

蓝舌病1型病毒VP2蛋白的原核表达及免疫反应性分析

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中国畜牧兽医 2017年第7期44卷 2119-2125页

作者：宋建领李华春云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室昆明650224

试验旨在研究蓝舌病1型病毒(bluetongue virus serotype 1,BTV-1)VP2蛋白体外表达产物免疫反应性。根据已发表的BTV-1Y863毒株L2基因序列设计合成特异性BTV-1PCR引物,通过RT-PCR方法扩增L2基因,将纯化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表达... 详细信息

试验旨在研究蓝舌病1型病毒(bluetongue virus serotype 1,BTV-1)VP2蛋白体外表达产物免疫反应性。根据已发表的BTV-1Y863毒株L2基因序列设计合成特异性BTV-1PCR引物,通过RT-PCR方法扩增L2基因,将纯化的L2基因克隆至pEASY-Blunt E1表达载体,对重组质粒进行鉴定,将阳性重组质粒L2克隆至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行表达,对获得的纯化的BTV-1 VP2重组蛋白进行Western blotting、ELISA、阻断ELISA分析。结果显示,BTV-1VP2蛋白在pEASY-Blunt E1载体上以包涵体形式表达,通过Ni-NTA亲和层析,160和200mmol/L咪唑是洗脱BTV-1VP2蛋白表达产物的最佳浓度。纯化获得N末端携带多聚组氨酸标签的BTV-1VP2重组蛋白,分子质量约105ku,Western blotting、ELISA、阻断ELISA结果显示,重组BTV-1VP2蛋白能与BTV-1型特异性抗体发生特异性结合,且此结合能被BTV-1阻断。本试验结果表明,通过原核表达载体pEASY-Blunt E1表达的BTV-1VP2重组蛋白具有良好的免疫反应性,为BTV-1VP2蛋白型特异性表位定位研究奠定了基础。

关键词：蓝舌病 VP2蛋白表达免疫反应性

猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医学报 2012年第4期32卷 497-500页

作者：宋建领高华峰信爱国李华春云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室云南昆明650224

根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmo... 详细信息

根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmol/L)各0.5μL,探针prrsv-p(10μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR RNA标准品北美型毒株欧洲型毒株

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对三大改造的认识

中学政史地（初中适用） 2012年第4期 94-96页

作者：宋建领不详

三大改造是新中国经济建设中非常重要的一件大事,然而课本中对其描述得过于简单,不能使学生全面深入地了解其积极作用、不足之处。笔者根据资料、结合自己的理解,谈谈自己对三大改造的认识。

关键词：改造经济建设新中国

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高三艺术生历史有效教学初探

中学政史地（教学指导） 2018年第5期 85-88页

作者：宋建领河南省平顶山市第八中学

随着社会的发展,国家对文化产业的重视程度不断加大,从事文化艺术的人员越来越多,选择艺术方向的学生也在逐年增多,但艺术专业毕业生的文化素质却参差不齐。如何既提高艺术生的艺术修养,又提升其文化素养,现在已经成为时代的需要,社会... 详细信息

随着社会的发展,国家对文化产业的重视程度不断加大,从事文化艺术的人员越来越多,选择艺术方向的学生也在逐年增多,但艺术专业毕业生的文化素质却参差不齐。如何既提高艺术生的艺术修养,又提升其文化素养,现在已经成为时代的需要,社会的要求。然而,高中艺术生文化课的学习成绩却不太理想。我们知道,高三是各科知识复习、巩固、提高的阶段,高三课堂的教学效果如何将起到至关重要的作用。历史学科有其内在的规律和特点。

关键词：文化艺术历史学科有效教学高三文化产业文化素质艺术专业艺术修养

鸽新城疫病毒分离株的部分生物学特性鉴定及疫苗免疫试验

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中国兽医科技 2001年第3期31卷 21-22页

作者：许信刚李勇张耀相宋建领李健强西北农林科技大学畜牧兽医学院陕西杨凌712100 云南热带亚热带动物病毒重点实验室云南昆明650224

从暴发疑似鸽新城疫的某赛鸽场分离到 1株病毒 ,通过血凝 (HA)试验、血凝抑制 (HI)试验及鸡胚中和试验初步鉴定为鸽新城疫病毒 ,进而进行了鸡胚半数感染量 (EID50 )、鸡胚平均死亡时间 (MDT )测定和对不同动物红细胞的凝集试验 ,证明该... 详细信息

从暴发疑似鸽新城疫的某赛鸽场分离到 1株病毒 ,通过血凝 (HA)试验、血凝抑制 (HI)试验及鸡胚中和试验初步鉴定为鸽新城疫病毒 ,进而进行了鸡胚半数感染量 (EID50 )、鸡胚平均死亡时间 (MDT )测定和对不同动物红细胞的凝集试验 ,证明该分离株属新城疫强毒力毒株。将该毒株经鸡胚尿囊液增殖后用甲醛灭活 ,制成油佐剂灭活苗 ,对鸽免疫后检测其血清抗体水平并进行攻毒试验 ,结果在免疫后 2 1d抗体达到高峰 ,攻毒试验表明油佐剂灭活苗对鸽新城疫病毒感染有较强的保护力。

关键词：鸽新城疫病毒生物学特性灭活苗免疫试验

睡眠嗜组织菌可视化LAMP现场检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2024年

作者：李富祥高华峰赵文华宋建领云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

为建立睡眠嗜组织菌(***)可视化LAMP检测方法，笔者根据*** 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物，优化反应体系和反应程序，评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率，建立了***可视化LAMP现场检测方法。反... 详细信息

为建立睡眠嗜组织菌(***)可视化LAMP检测方法，笔者根据*** 16S rRNA基因的特异性序列设计了1对LAMP内引物和1对LAMP外引物，优化反应体系和反应程序，评价特异性、敏感性及其与PCR方法的符合率，建立了***可视化LAMP现场检测方法。反应程序优化结果显示，本研究建立LAMP方法的最佳反应程序为58 ℃反应70 min。特异性试验结果显示，该方法能特异性地检测***，与溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌等14种牛、绵羊和山羊常见细菌无交叉反应，特异性较强。敏感性试验结果显示，该方法能检出最低浓度为4.7 copies/μL的重组质粒标准品pMD19T-His，敏感性较高。临床样品检测结果显示，LAMP方法和普通PCR方法检测***的阳性率分别为11.49%（10/87）和9.20%（8/87），LAMP方法与PCR方法的总符合率、阳性符合率和阴性符合率分别为97.70%（85/87）、100%（8/8）和97.47%（77/79）。结果表明，本研究建立的LAMP方法为牛、山羊和绵羊***感染的快速可视化现场检测提供技术支撑。

关键词：睡眠嗜组织菌环介等温扩增现场检测牛山羊绵羊

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一起赛鸽腹泻病的诊断分析

黑龙江畜牧兽医（下半月） 2017年第10期 228-230,299页

作者：王建聂王艳芬李富祥宋建领文山市柳井彝族乡农业综合服务中心云南文山663012 陆良县畜禽改良站云南陆良6556001 云南省畜牧兽医科学院昆明650224

为了确定一起赛鸽腹泻病病原及敏感药物,采用细菌分离鉴定和新城疫病毒RT-PCR检测方法对腹泻赛鸽的5份粪便进行检测,并对分离的细菌进行生物学特性研究。结果表明:新城疫病毒RT-PCR检测为阴性;分离到6株革栏氏阴性小杆菌,经生化鉴定为... 详细信息

为了确定一起赛鸽腹泻病病原及敏感药物,采用细菌分离鉴定和新城疫病毒RT-PCR检测方法对腹泻赛鸽的5份粪便进行检测,并对分离的细菌进行生物学特性研究。结果表明:新城疫病毒RT-PCR检测为阴性;分离到6株革栏氏阴性小杆菌,经生化鉴定为大肠杆菌,分离株对小白鼠具有较强致病性,对头孢克罗、头孢唑啉、卡那霉素和氟苯尼考高度敏感,对磺胺甲唑耐药。

关键词：新城疫大肠杆菌分离鉴定药敏试验致病性