检索结果-南通市图书馆

一种提高口蹄疫抗原和灭活疫苗热稳定性缓冲液的研制

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2022年第9期52卷 1130-1136页

作者：武永淑张荣常艳燕李菁安芳兰刘学荣中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

为提高口蹄疫(FMD)抗原和疫苗的稳定性,采用正交试验设计L18(37),以溶液pH值和氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钠、葡萄糖、精氨酸和氯化钙6种组分的质量浓度作为考察因素,以口蹄疫抗原或疫苗在37℃条件下146S抗原降解为0时保存的时间作为评... 详细信息

为提高口蹄疫(FMD)抗原和疫苗的稳定性,采用正交试验设计L18(37),以溶液pH值和氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钠、葡萄糖、精氨酸和氯化钙6种组分的质量浓度作为考察因素,以口蹄疫抗原或疫苗在37℃条件下146S抗原降解为0时保存的时间作为评价指标,以PBS(pH值8.0)作为对照,筛选对FMD146S抗原具有热稳定性作用的化学试剂。结果显示:在4℃条件下,用研制的缓冲液重悬的抗原和配制的疫苗可长期保存;在37℃条件下,与PBS比较,FMDV/OM抗原可保存63 d,FMDV/AF-72抗原可保存84 d,疫苗分别可以保存56和96 d,说明该缓冲液对FMDV抗原和疫苗具有很好的热稳定性。另外,该缓冲液配制方法简单,化学试剂易溶解,可用于大规模生产。研制的缓冲液能提高FMD抗原和疫苗在运输和保存过程中的稳定性,为保证FMD灭活疫苗质量提供了技术支撑。

关键词：口蹄疫 146S抗原灭活疫苗热稳定性缓冲液

口蹄疫病毒P12A基因在BHK-21细胞中的表达及其产物的免疫原性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

口蹄疫病毒P12A基因在BHK-21细胞中的表达及其产物的免疫原性研究

作者：安芳兰甘肃农业大学

学位级别：硕士

本研究通过分子生物学技术对口蹄疫基因工程亚单位疫苗的研制新途径进行了研究,取得了以下研究成果:1.构建了pBABE-P12AEGFP载体。以牛源A型FMDV XJ99流行株P12X阳性克隆质粒和PEGFP-N1阳性克隆质粒为模板,依据表达载体的多克隆位点,分... 详细信息

本研究通过分子生物学技术对口蹄疫基因工程亚单位疫苗的研制新途径进行了研究,取得了以下研究成果:1.构建了pBABE-P12AEGFP载体。以牛源A型FMDV XJ99流行株P12X阳性克隆质粒和PEGFP-N1阳性克隆质粒为模板,依据表达载体的多克隆位点,分别设计带有酶切位点的两条引物从P12X和PEGFP-N1上用PCR法扩增P12A与EGFP;将P12A与EGFP酶切回收产物插入与经同样酶切处理的表达载体pBABE-puro上,转化大肠埃希氏菌JM109,在含氨苄青霉素的琼脂糖平板上筛选,采用酶切方法和PCR扩增鉴定Pl2AEGFP阳性重组pBABE表达质粒。命名为pBABE-P12AEGFP.送到大连宝生物工程有限公司进行测序,测序结果经DNAstar软件分析,发现目的基因片段的主要抗原位点没有发生核苷酸序列突变,整个读码框正确,表明成功构建了含绿色荧光蛋白和P12A基因的逆转录病毒表达载体。2.通过假病毒感染靶细胞BHK-21,筛选获得阳性细胞,进行了绿色荧光蛋白和P12A的表达研究。将重组逆转录病毒载体与水泡性口炎病毒载体(PVSV-G)在脂质体介导下共转染GP2-293细胞,收获经GP2-293包装的假病毒并在Polybrene的介导下感染靶细胞BHK-21,嘌呤霉素抗性与EGFP双标记筛选稳定表达P12A基因的阳性细胞。收集不同代次细胞,通过PCR法检测目的基因的整合以及稳定传代情况、用间接免疫荧光及EGFP自身荧光检测目的基因在靶细胞中的表达情况,结果表明口蹄疫P12A基因已整合到BHK-21细胞的染色体上,同时能稳定持续表达;与空载体转染的对照细胞比较,SDS-PAGE结果可见阳性细胞多一条约82kD的条带(大小与P1蛋白的分子量接近);Westen blotting结果显示阳性细胞的表达产物(82kD蛋白)能够和A型FMDV抗体发生特异性反应;双抗夹心ELISA测得的各代OD值与阴性对照值的比值在2.6～4.2间,代次间无明显差异;以上结果表明目的蛋白被稳定表达,且具有较好的免疫反应性。3.通过血清学方法,进行了P1表达蛋白的动物免疫研究。大量收获阳性细胞培养物,用弗氏佐剂乳化并免疫Balb/C小鼠,液相阻断ELISA对制备的抗原免疫效力进行了评价。结果显示,免疫组小鼠从首免后的第2周开始出现明显的特异性FMDV抗体,抗体滴度均达到1∶8,甚至超过1∶8,二免后,个别动物抗体达到1:64,其水平随免疫蛋白浓度的增加呈上升趋势而空白对照组血清抗体滴度始终全部小于1∶4,说明制备的P1表达蛋白免疫动物具有良好的免疫原性。综合上述研究表明:利用逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将P12AEGFP基因组合整合进BHK-21细胞基因组中,可作为抗原的P1表达蛋白获得了稳定表达且具有较好的免疫反应性和免疫原性,为进一步开展口蹄疫基因工程亚单位疫苗的研究提供了新思路。

关键词： A型口蹄疫病毒结构蛋白基因绿色荧光蛋白基因逆转录病毒载体基因表达免疫原性 BHK细胞

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

整合应激反应及其对病毒复制调控研究进展

动物医学进展 2023年第3期44卷 94-98页

作者：张荣武永淑李菁常艳燕安芳兰刘学荣中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

整合应激反应(ISR)是一种适应性信号传导途径,可响应不同应激而被激活,例如未折叠和错误折叠蛋白质的积累,缺氧,氨基酸饥饿,病毒感染和紫外线照射等。病毒感染可激活ISR,但是ISR在病毒感染过程中的作用仍不清楚。在某些情况下,ISR可保... 详细信息

整合应激反应(ISR)是一种适应性信号传导途径,可响应不同应激而被激活,例如未折叠和错误折叠蛋白质的积累,缺氧,氨基酸饥饿,病毒感染和紫外线照射等。病毒感染可激活ISR,但是ISR在病毒感染过程中的作用仍不清楚。在某些情况下,ISR可保护宿主细胞免受病毒感染,而在另一些情况下,ISR可能会被病毒劫持以促进其复制。论文介绍了宿主细胞被病毒感染后诱导ISR信号通路的最新进展,讨论了ISR调节病毒复制的分子机制,以及病毒如何对抗由ISR引起的这种细胞应激反应,为阐明ISR在病毒感染中的作用及病毒与宿主相互作用的分子机制提供理论依据。

关键词：整合应激反应真核翻译起始因子2α 未折叠蛋白反应病毒复制宿主

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

不同佐剂对口蹄疫灭活疫苗稳定性的影响

甘肃畜牧兽医 2022年第4期52卷 27-30页

作者：张荣武永淑李菁安芳兰刘学荣中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

为了进一步提高口蹄疫疫苗的稳定性并打破国外佐剂垄断现象,研究近年来市面上不断出现的新型佐剂的性能,给口蹄疫疫苗生产厂家筛选国产新型疫苗佐剂提供数据支持,试验以南京威尔药业集团股份有限公司的Well佐剂和SEPPIC公司的ISA 201佐... 详细信息

为了进一步提高口蹄疫疫苗的稳定性并打破国外佐剂垄断现象,研究近年来市面上不断出现的新型佐剂的性能,给口蹄疫疫苗生产厂家筛选国产新型疫苗佐剂提供数据支持,试验以南京威尔药业集团股份有限公司的Well佐剂和SEPPIC公司的ISA 201佐剂为研究对象,以目前口蹄疫疫苗生产厂家常规使用的ISA 206佐剂为对照,配制口蹄疫灭活疫苗后检测其物理性状、免疫效果及稳定性,从而评价佐剂效果。结果表明,Well佐剂和ISA 201佐剂的疫苗稳定性和免疫效果均低于ISA 206佐剂。

关键词：佐剂物理性状免疫效果稳定性口蹄疫

无血清全悬浮培养Vero细胞系的建立及生物反应器培养参数优化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2023年第1期44卷 54-59页

作者：杨惠清武发菊葛玉凤刘小刚安芳兰刘学荣胡永浩甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730000 中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046

为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系,并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进贴壁培养型Vero细胞,通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞,扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库... 详细信息

为建立无血清全悬浮培养Vero细胞系,并使其在反应器中高密度生长。从美国典型培养物保藏中心(ATCC)引进贴壁培养型Vero细胞,通过降低血清浓度和改变培养液的方式获得1株无血清全悬浮培养型Vero细胞,扩增培养后液氮冻存,建立相应的细胞库;复苏细胞后对活力、形态、生长曲线、微生物污染、染色体核型等特性进行检定;通过Box-Behnken试验对生物反应器pH、溶氧和搅拌转速等3个培养参数进行优化,确定最优培养参数。结果显示,筛选的Vero悬浮细胞形态呈圆形、饱满、透亮,大小均匀,呈现较好的悬浮生长状态;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体及外源病毒检查均为阴性;染色体数目为58或60的占75%;用响应面分析法得出的最优培养参数培养Vero细胞,细胞最高密度可达4.5×10^(6)cells/mL。结果表明,成功筛选出了适应无血清悬浮培养的Vero细胞,通过优化培养参数,可在生物反应器中高密度生长。

关键词： Vero细胞细胞驯化细胞库生物反应器

牛结节性皮肤病的流行概况、防控及疫苗研究进展

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

甘肃畜牧兽医 2023年第6期53卷 21-24页

作者：潘玉平邓瑞雪胡小慧贾怀杰安芳兰刘学荣中农威特生物科技股份有限公司甘肃兰州730046 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)已在全世界广泛流行,自2019年在我国新疆首次暴发以来,已经扩散蔓延至多个省份,给我国养牛业造成了重大经济损失。本文介绍了牛结节性皮肤病的流行概况,并对其防控措施及疫苗研究情况进行了概述... 详细信息

牛结节性皮肤病(Lumpy skin disease,LSD)已在全世界广泛流行,自2019年在我国新疆首次暴发以来,已经扩散蔓延至多个省份,给我国养牛业造成了重大经济损失。本文介绍了牛结节性皮肤病的流行概况,并对其防控措施及疫苗研究情况进行了概述,以期为牛结节皮肤病的防控和疫苗研发提供新思路。

关键词：牛结节性皮肤病流行防控疫苗

共表达口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因牛肾细胞株的筛选及稳定性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2008年第11期48卷 1520-1525页

作者：李炯刘艳红刘湘涛尚佑军刘俊林安芳兰殷宏中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室国家口蹄疫参考实验室兰州730046

【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和... 详细信息

【目的】筛选稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney,MDBK)株。【方法】采用聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)方法从重组质粒pMD-P1-2A和pMD-3C中分别扩增口蹄疫病毒衣壳前体蛋白P1-2A基因和蛋白酶3C基因,将两基因依次插入逆转录病毒载体pBABE-puro。重组逆转录病毒载体pBABE-puro/P1-2A-3C和pVSV-G质粒载体用脂质体介导共转染GP2-293包装细胞。产生的重组逆转录病毒感染MDBK细胞后使用嘌呤霉素筛选抗性细胞。利用克隆环套取法得到单克隆细胞。经间接免疫荧光和酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测MDBK细胞中衣壳蛋白的表达,并在电镜下观察口蹄疫病毒空衣壳。【结果】成功筛选到稳定表达口蹄疫病毒衣壳蛋白的MDBK细胞株,衣壳前体蛋白P1-2A在蛋白酶3C裂解作用下正确组装成空衣壳。【结论】该研究为口蹄疫亚单位疫苗的研制提供了实验材料。

关键词：逆转录病毒载体口蹄疫病毒衣壳蛋白 MDBK细胞

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

非智力因素对初中学生学习英语的影响

科学教育 2012年第1期18卷 92-93页

作者：安芳兰甘肃省陇西县古城九年制学校 748102

英语学习需要有智力因素，但同时也需要有学习的意向一兴趣、情感、意志、性格等非智力因素。由于智力因素与非智力因素是相辅相成、相互促进的，在智力因素相似的情况下，初中学生的成材与否，非智力因素也是起决定作用的条件之一。

关键词：非智力因素学习英语初中学生学习需要

猪瘟疫苗中BVDV污染一步法RT-PCR检测方法的建立与应用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2018年第2期 94-97页

作者：葛玉凤崔治亮高广仁刘学荣武发菊安芳兰中农威特生物科技股份有限公司

为建立一种快速检测猪瘟(CSF)疫苗中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的方法,试验根据GenBank上登录的BVDV 5’端非编码区基因组序列设计1对引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了检测猪瘟疫苗中BVDV污染的一步法RT-PCR。结果表明:该方... 详细信息

为建立一种快速检测猪瘟(CSF)疫苗中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的方法,试验根据GenBank上登录的BVDV 5’端非编码区基因组序列设计1对引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了检测猪瘟疫苗中BVDV污染的一步法RT-PCR。结果表明:该方法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV基因组RNA的检测灵敏度达0.1 ng,与细胞培养法的符合率达100%。应用该方法对猪瘟疫苗、牛血清等138份样品进行BVDV污染的检测,阳性污染率达11.59%。该一步法RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、准确性和适用性,可用于猪瘟疫苗生产中血清、细胞、毒种、半成品等的质量控制及猪瘟疫苗临床应用中的质量检验。

关键词：猪瘟(CSF)疫苗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染一步法RT-PCR 检测方法方法建立