检索结果-南通市图书馆

人肌红蛋白基因合成、原核表达及单克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人肌红蛋白基因合成、原核表达及单克隆抗体制备

作者：安星兰东北林业大学

学位级别：硕士

为了制备用于临床心脑血管疾病监测的高特异性、高敏感性的抗肌红蛋白单克隆抗体,本研究利用两步法合成人肌红蛋白(myoglobin,Myo)全基因的基础上,构建原核表达载体并通过BL21(DE3)表达其融合蛋白;将获得的融合蛋白进行His标签特异性亲... 详细信息

为了制备用于临床心脑血管疾病监测的高特异性、高敏感性的抗肌红蛋白单克隆抗体,本研究利用两步法合成人肌红蛋白(myoglobin,Myo)全基因的基础上,构建原核表达载体并通过BL21(DE3)表达其融合蛋白;将获得的融合蛋白进行His标签特异性亲和纯化。与此同时,利用血清提纯的人肌红蛋白抗原筛选出高亲和力的单克隆抗体,最终利用所表达的融合蛋白筛选最具特异性并且能够进行夹心配对的一组单克隆抗体。本研究结果和结论如下：***全基因合成：在NCBI查询得到Myo氨基酸序列,并将Myo密码子经过优化得到大肠杆菌惯用的密码子,反转录后得到Myo全序列,并利用两步法合成Myo全基因;2.表达载体构建：将Myo片段并与pMD18-T Simple载体相连,得到重组质粒Myo-pMD18-T Simple。利用Myo-pMD18-T Simple上特异性酶切位点,将Myo片段进行酶切胶回收,并与原核表达载体pET-28a连接,获得可用于原核表达的重组质粒Myo-pET-28a;3.重组蛋白的表达和纯化：利用Myo-pET-28a转化表达型感受态细胞BL21(DE3),获得表达菌株,并对表达条件进行优化。在最佳诱导温度、时间、浓度下进行IPTG诱导表达,最终得到Myo-His融合蛋白。利用镍柱对Myo-His融合蛋白进行纯化,经透析浓缩得到纯化蛋白;4.单克隆抗体制备：用血清提纯的人肌红蛋白抗原免疫小鼠,经过细胞融合及筛选得到22株分泌特异性抗体的细胞株。再经亚克隆筛选,最终获得5株抗体分泌量高亲和力强的细胞株;5.单克隆抗体鉴定：利用本实验中得到的Myo纯化抗原经Western Blot检测结果显示,所筛选的5株抗体中,除一株抗体(编号为#16-3.3)与Myo表达纯抗原反应较弱以外,其他4株抗体(编号为#14-4.3、#17-1.2、#18.2和#19-2.3)皆能与Myo表达纯抗原反应,以此筛选获得高亲和力和高特异性的单克隆抗体：经夹心ELISA检测,#17-1.2可分别与其它3株抗体进行夹心对配。上述研究表明,本研究成功筛选获得高敏感性及特异性的Myo单克隆抗体。该项研究为建立检测人类心脏疾病,尤其是急性心肌梗塞的临床检测试剂盒的制备奠定了基础。此外,上述单克隆抗体可进行夹心配对实验,适用于未来抗体芯片的研发制备中,为一种新的联合快速诊断心脏疾病方法的建立提供了科学依据。

关键词：人肌红蛋白全基因合成原核表达单克隆抗体制备

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

利用自然发酵初乳培育犊牛试验

兽医大学学报 1990年第2期10卷 203-204,165页

作者：裴相元安星兰兽医大学军事兽医研究所吉林省兽药饲料监察所

犊牛在哺乳期的发育决定未来生产力。我国很多奶牛场培育犊牛仍然采用哺乳期3～4个月,喂乳量500～600 kg的古典方法。据报道,这种高奶量培育犊牛,前期发育较好,但后期采食粗饲料能力差,影响犊牛消化器官的发育和终生产奶量。为此,国外... 详细信息

犊牛在哺乳期的发育决定未来生产力。我国很多奶牛场培育犊牛仍然采用哺乳期3～4个月,喂乳量500～600 kg的古典方法。据报道,这种高奶量培育犊牛,前期发育较好,但后期采食粗饲料能力差,影响犊牛消化器官的发育和终生产奶量。为此,国外多采用早期断奶,提前补料的方法。自70年代英国首次用发酵初乳培育犊牛获得成功以来,许多国家相继开展了这方面的研究。我国80代年初也做了一些研究,但未见有系统的报道。为降低饲养成本,培育高产奶牛。

关键词：犊牛发酵初乳

n-3、n-6PUFA高脂饮食对大鼠血脂及胰岛素敏感性的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

营养学报 2012年第6期34卷 613-615,618页

作者：张涛刘源赵爽马兰芝安星兰李微军事医学科学院实验动物中心北京100071

脂肪肝、肥胖、胰岛素抵抗的产生与脂肪摄入过量及n-6PUFA/n-3PUFA比增大密切相关[1]。研究证实长期脂肪（尤其是饱和脂肪）能量摄入过量可作为独立的诱发因素导致胰岛素抵抗及肥胖[2]。大量研究表明不同类型脂肪酸对血脂代谢及胰岛素... 详细信息

脂肪肝、肥胖、胰岛素抵抗的产生与脂肪摄入过量及n-6PUFA/n-3PUFA比增大密切相关[1]。研究证实长期脂肪（尤其是饱和脂肪）能量摄入过量可作为独立的诱发因素导致胰岛素抵抗及肥胖[2]。大量研究表明不同类型脂肪酸对血脂代谢及胰岛素敏感性的影响存在差异[3],适量摄入PUFA能改善血脂异常及胰岛素抵抗[4]。

关键词：多不饱和脂肪酸血脂胰岛素敏感性

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2013年第3期33卷 481-485页

作者：秦莹安星兰张学明岳占碰李子义吉林大学动物医学学院动物胚胎工程吉林省重点实验室吉林长春130062

Nramp1(Slc11a1)表达于晚期吞噬溶酶体中,能够抵抗多种细胞内病原体的感染。Nramp1主要是通过调节巨噬细胞的免疫功能和细胞铁代谢发挥抗菌作用。为了研究山羊天然抵抗力相关巨噬细胞蛋白的功能,寻找一种在山羊中抵抗胞内菌感染的新途... 详细信息

Nramp1(Slc11a1)表达于晚期吞噬溶酶体中,能够抵抗多种细胞内病原体的感染。Nramp1主要是通过调节巨噬细胞的免疫功能和细胞铁代谢发挥抗菌作用。为了研究山羊天然抵抗力相关巨噬细胞蛋白的功能,寻找一种在山羊中抵抗胞内菌感染的新途径。通过RT-PCR的方法从山羊脾脏中克隆Nramp1基因,连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,命名为pcDNA3.1(+)-Nramp1。取60d小尾寒羊胎儿,建立胎儿成纤维细胞系,将线性化的载体转染胎儿成纤维细胞,获得稳定转染的细胞系,在基因组和转录水平分别对转基因细胞系进行鉴定,结果显示外源基因成功整合到基因组中并且在转录水平检测到基因表达,最后获得阳性转基因细胞系2株,为Nramp1蛋白的功能研究和抗菌试验奠定了基础。

关键词：山羊 Nramp 1基因真核表达原核注射

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

肉鸡脂肪沉积的控制

中国饲料 1991年第3期 38-39页

作者：安星兰

脂肪沉积过多是肉鸡饲养集约化中的一大难题。为了解决这二问题,科技人员探讨了饲料中添加羽毛粉对脂肪沉积以及生产性能的影响。供试肉用仔鸡共1800只,饲养于全封

关键词：脂肪沉积饲料转化率腹脂重

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

4℃保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

四川动物 2008年第6期27卷 1136-1138页

作者：张秋婷安星兰王春生安铁洙东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发... 详细信息

为了探明雌性动物死亡后GV期卵的可利用性,本研究将ICR系雌性小鼠处死,尸体在4～6℃下分别保存16h、24h和48h,取其卵巢GV期卵,体外成熟后,应用常规法进行体外受精或透明带切割法体外受精,获得2细胞期胚,通过体外培养或胚胎移植观察其发育能力。结果显示,4～6℃下保存16h和24h处理组的体外受精率(分别为31%、33%和21%、24%)与来自新鲜的带有颗粒细胞卵的体外受精率(33%)相比无显著差异。与其相比,保存48h处理组的GV卵已丧失发育能力。此外,体外受精中获得的2细胞胚经体外培养,16h处理组和24h处理组的囊胚率(60%、61%和72%、83%)与新鲜GV期卵处理组的囊胚率(72%)相比差异不显著。获得的2细胞胚经胚胎移植可得到正常幼鼠。上述结果表明,如果雌性小鼠死亡后立即在冷藏温度下(4～6℃)保存,其体内的GV卵在24h以内仍保持发育能力。

关键词：小鼠 4℃保存 GV期卵体外成熟体外受精

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力

四川动物 2009年第6期28卷 856-858页

作者：杜文敬安星兰王春生朴善花安铁洙东北林业大学生命科学学院哈尔滨150040

将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力。其结果,在10℃下保存24h、15℃下保存14... 详细信息

将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力。其结果,在10℃下保存24h、15℃下保存14h、20℃下保存8h和25℃下保存4h后,其体内附有卵丘细胞的GV卵的体外成熟-体外受精后的2细胞率分别为14%、9%、10%和10%,随着保存温度的提高和保存时间的延长,带有颗粒细胞GV期卵的比率明显降低,同时其GV期卵经体外成熟及体外受精后的2细胞率明显降低。在20℃下保存24h和25℃下保存14h时,难以获得形态正常的GV期卵;体外受精获得的2细胞期胚经体外培养,总体上有64%的胚胎发育至扩张囊胚,未见有保存温度和保存时间的显著影响,且利用在15℃保存8h后的GV卵获得2细胞期胚的移植获得正常新生小鼠。上述结果表明,雌性动物室温条件下死亡后,若能短时间及时采集其体内GV期卵并体外成熟、体外受精,体外培养及胚胎移植技术,就有可能获得新生后代。

关键词：小鼠室温保存 GV期卵体外成熟体外受精

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

李子义:生物工程强国的追梦人

中国科技产业 2019年第2期 64-65页

作者：白文龙安星兰不详

李子义现为吉林大学第一医院转化医学研究院教授、博士生导师、人类疾病动物模型国家地方联合工程实验室副主任。1979年考入原中国人民解放军兽医大学,1994年在东北农业大学生物工程系攻读博士学位期间与生物工程结缘。

关键词：生物工程中国人民解放军东北农业大学吉林大学博士生导师动物模型人类疾病博士学位

抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体的研制与鉴定

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

军事医学科学院院刊 1996年第1期20卷 55-56,59页

作者：史燕燕刘宏伟陈娟安星兰刘会君高秀亮焦有烈军事医学科学院实验动物中心

利用常规杂交瘤技术制备了２株抗人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ结果表明，单克隆抗体ＩＤ５和４Ｄ５均与人ｈＣＧ有特异性反应，腹水效价分别为３．２×１０－５、６．４×１０－５，均属于ＩｇＧ１亚类。与人... 详细信息

利用常规杂交瘤技术制备了２株抗人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）的杂交瘤细胞。ＥＬＩＳＡ结果表明，单克隆抗体ＩＤ５和４Ｄ５均与人ｈＣＧ有特异性反应，腹水效价分别为３．２×１０－５、６．４×１０－５，均属于ＩｇＧ１亚类。与人促卵泡激素（ｈＦＳＨ）和人促黄体激素（ｈＬＨ）的交叉反应呈阴性。免疫转印结果显示能识别相对分子质量为２４×１０３ｕ的ｈＣＧ－β链条带。亲和常数分别为１．０１×１０７Ｌ／ｍｏｌ、４．４３×１０７Ｌ／ｍｏｌ。

关键词：绒毛膜促性腺激素单克隆抗体