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结核分支杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制及其耐药基因检测方法的研究

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结核分支杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制及其耐药基因检测方法的研...

作者：安慧茹中国人民解放军军医进修学院

学位级别：硕士

为阐明结核分支杆菌耐喹诺酮(quinolones)的分子机制并建立对其耐药基因的快速检测方法，本文采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析法(polymerase chain reaction—single-stranded conformation polymorphism，PCR-SSCP)对30株经过药... 详细信息

为阐明结核分支杆菌耐喹诺酮(quinolones)的分子机制并建立对其耐药基因的快速检测方法，本文采用聚合酶链反应—单链构象多态性分析法(polymerase chain reaction—single-stranded conformation polymorphism，PCR-SSCP)对30株经过药物敏感性试验鉴定的喹诺酮敏感株和47株耐药株的16S rRNA基因进行了初步的分子菌种鉴定，除2株耐药株为非结核分支杆菌外，余75株均与结核分支杆菌标准菌株SSCP图谱相同，判定为结核分支杆菌。用gyrA基因引物扩增结核分支杆菌株gyrA基因，其产物为285 bp片段，敏感性为1 pg。对19株分支杆菌及5株非分支杆菌标准株的gyrA基因进行扩增，结果显示该引物具有分支杆菌属特异性。以结核分支杆菌标准株HRv和卡介苗做对照，通过PCR-SSCP方法分析75株结核分支杆菌临床分离株的gyrA基因285 bp片段。在30株喹诺酮敏感株SSCP图谱中，发现11株与HRv相同，19株与卡介苗相同;45株喹诺酮耐药株SSCP图谱中，4株与HRv相同，7株与卡军医进修学院硕士研究生论文介苗相同，34株(75.6%)gyrA基因的sscP图谱与两者均不相同。经对产物进一步测序(DNA一sequencing，DS) 分析显示，5株喳诺酮敏感株及45株耐药株中，与卡介苗 gyrA基因SSCP图谱相同者，其gyrA基因扩增片段碱基序列与卡介苗相同，95位密码子为AcC;与H37Rv sscP 图谱相同的菌株，其扩增片段的碱基序列也与之相同，95 位密码子为AGC;45株喳诺酮耐药分离株中，10株90位密码子有碱基突变，24株94位密码子有碱基突变，与 PCR一SSCP方法检测结果完全一致。对45株喳诺酮耐药分离株进行氧氟沙星和左旋氧氟沙星药物浓度梯度测定，进一步研究了氧氟沙星和左旋氧氟沙星耐药程度与gyrA基因突变的关系。发现所有存在 gyrA基因突变的分离株，氧氟沙星4ug/ml《MlcS《32 ug/ml，左旋氧氟沙星Zug/ml《Mles《1 6 ug/ml;氧氟沙星Mles>4ug/ml，左旋氧氟沙星Mles》Zugzml的临床分离株gyrA基因突变率均为1 00%。电压、凝胶交联度和浓度等因素均会影响SSCP的分析。本文对PcR一sscP方法的实验条件进行了探索，发现对gyrA基因285 bp片段扩增产物采用8%(29:1)非变性聚丙烯酞胺凝胶在12Ov稳压下泳动6小时效果较理想。 gyrA基因突变，尤其90位和94位密码子突变是结核分支杆菌耐喳诺酮类药物的主要分子学机制。PcR一sscP 可快速检测出部分结核分支杆菌喳诺酮耐药株，与DNA 测序结果的符合率为100%，但较便于临床推广应用。PCR一SSCP DNA测序法简便、快捷，有可能成为测定结核分支军医进修学院硕士研究生论文杆菌对喳诺酮耐药的快速方法，并有望直接用于临床标本的检测。

关键词：结核分支杆菌喹诺酮 gyrA基因药物敏感性聚合酶链反应单链构象多态性 DNA测序

基因突变与结核分支杆菌对喹诺酮类药物耐药性的研究进展

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中国防痨杂志 2004年第1期26卷 53-56页

作者：安慧茹王巍解放军第309医院北京100091

随着喹诺酮类药物研制的发展，一些新的喹诺酮类药物在耐多药结核病（MDR-TB）的治疗中已发挥了重要作用。但随着用药时间的延长和使用人群的增多，部分结核分支杆菌已对喹诺酮耐药。像其他细菌的耐药机制一样，结核分支杆菌对喹诺酮耐... 详细信息

随着喹诺酮类药物研制的发展，一些新的喹诺酮类药物在耐多药结核病（MDR-TB）的治疗中已发挥了重要作用。但随着用药时间的延长和使用人群的增多，部分结核分支杆菌已对喹诺酮耐药。像其他细菌的耐药机制一样，结核分支杆菌对喹诺酮耐药也与靶基因突变有关。但确切机制还不是很清楚，本文复习了相关文献，就结核分支杆菌耐喹诺酮类药物的分子机制进行综述。

关键词：基因突变结核分支杆菌喹诺酮类药物耐药性抗菌药

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治疗多重耐药结核病新药的发展史及临床特点

中国抗生素杂志 2024年第10期49卷 1131-1137页

作者：王心静安慧茹解放军总医院第八医学中心结核病医学部结核科北京100091

近20年,在世界卫生组织(WHO)的推动下,先后有20余种新药或再利用药物进入临床试验,针对多重耐药结核病,WHO推荐了包含新药贝达喹啉和普托马尼/德拉马尼组成的方案。国内应用正起步,本文就这2类新药的历史背景、作用机制、药物代谢特点... 详细信息

近20年,在世界卫生组织(WHO)的推动下,先后有20余种新药或再利用药物进入临床试验,针对多重耐药结核病,WHO推荐了包含新药贝达喹啉和普托马尼/德拉马尼组成的方案。国内应用正起步,本文就这2类新药的历史背景、作用机制、药物代谢特点和临床应用等内容进行综述讨论,以促进临床医生对新药的正确应用。

关键词：多重耐药结核病贝达喹啉普托马尼德拉马尼

半导体光电涂层的制备及其光电协同处理染料废水的研究

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半导体光电涂层的制备及其光电协同处理染料废水的研究

作者：马安慧茹大连工业大学

学位级别：硕士

近些年,电催化氧化技术因具有较高的能量效率,反应条件温和,可控性强,降解过程中没有或很少产生二次污染物等优点而被广泛研究。但同时也存在一定的局限性,如电流效率低,耗电量较大等问题。光电催化技术是通过光辅助来进行电催化的,在... 详细信息

近些年,电催化氧化技术因具有较高的能量效率,反应条件温和,可控性强,降解过程中没有或很少产生二次污染物等优点而被广泛研究。但同时也存在一定的局限性,如电流效率低,耗电量较大等问题。光电催化技术是通过光辅助来进行电催化的,在进行电催化时,外加一个光源进而提高电极的降解能力。光电催化过程中单一的电极材料存在光生电子效率低、光生电子成活率不高、以及半导体的光稳定性不好等缺点。克服上述缺点的有效途径是通过催化剂修饰或多技术联用来增强电极的光电降解效率,进而提高电极的催化效率。本文重点研究复合电极的制备及其光电协同效应,并通过XRD、SEM、EDS、CV、LSV、EIS、PL、UV-Vis等方法进行表征。主要研究内容如下:(1)GO-Pb O电极的共沉积制备与特性分析以草酸刻蚀后的钛片为基底,使用Hummer法制备氧化石墨烯,硝酸铅为铅源,通过电沉积方法制备电极。并通过改变引入的氧化石墨烯的量,探寻最优条件。实验表明,共沉积并未改变Pb O晶体的金字塔结构,但比表面积增大。共沉积电极平带电位更负,催化过程中产生更多的羟基自由基。其中最佳降解效果是标记为6GO-Pb O的电极,在降解电流为20m A/cm,降解时间为三小时,脱色率可达91.5%。(2)GO/Pb O复合膜电极的制备与性能分析以硝酸铅作为铅源,通过电沉积方法先制备纯Pb O电极。再采用电泳沉积的方法将GO膜沉积于Pb O涂层之上。通过改变电泳沉积电压来调节GO膜厚度,以获得高性能复合膜电极。实验表明,电泳沉积GO不会改变Pb O晶体的结构。复合电极因为GO膜的负载增强了光催化特性,光电性能更好。同时复合电极也具有更高的光电协同效应。当电泳沉积电压为15v,降解电流为20m A/cm,降解时间为两小时,脱色率可达93.7%。(3)Bi修饰Pb O膜电极的结构与性能分析首先在钛基底上通过电沉积法制备Pb O中间层。再在Pb O中间层上,以硝酸铋为铋源,采用共沉积法制备Bi/Pb O活性层。实验表明,共沉积并未改变Pb O晶体的金字塔结构,同时SEM表征有明显的棒状氧化铋形貌。Bi/Pb O由于引入Bi增强了光催化性能,具有更高的光电性能和光电协同能力。当电沉积时间为30min时所制备的电极具有最佳的光电性能,在降解电流30m A/cm,降解时间为两小时,脱色率可达90.9%。(4)Ag修饰Pb O膜电极的制备与特性分析首先在钛基底上通过电沉积法制备Pb O层。之后在制备好的Pb O层上,以硝酸银为银源,使用光沉积法制备Ag/Pb O电极。实验表明,光沉积不会改变Pb O晶体形貌,通过SEM表征可以观察到银粒子分布在Pb O层上。Ag的引入增强了电极的光催化性能,Ag/Pb O电极催化过程中产生更多羟基自由基,光电协同性能更高。在光沉积时间为20 min时,Ag/Pb O电极的光电催化能力最佳,在降解电流30m A/cm,降解时间为两小时,脱色率可达79.2%。(5)电催化活化过硫酸盐处理染料废水研究以电沉积的Pb O膜电极为研究对象。通过优化电场参数,考察电催化,电场活化对过硫酸盐性能影响。研究发现,随着降解电流的增大,降解率随之变大,在180m A处达到峰值。横向比较实验中,加入过硫酸盐将大幅度提高电极的降解能力。其中在加入过硫酸盐的活性测试中,当降解电流为180m A,活性艳兰浓度为120mg/L时,两个小时内,脱色率可达到97.3%。综上实验结果表明,通过共沉积、电泳沉积、光沉积法修饰Pb O电极,并未改变Pb O晶体的金字塔型结构。修饰后的电极具有Pb O电极的良好导电性,同时由于光催化剂的引入,增强了光催化性能,使得电极具有更高的光电降解效率与光电协同能力。通过本次实验研究,在光电催化领域中光辅助电催化,为在难降解有机污染物处理中的应用提供了有吸引力的前景。

关键词：二氧化铅氧化石墨烯光电协同活性艳蓝

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奴卡菌病误诊为多脏器结核病一例

中华结核和呼吸杂志 2012年第8期35卷 621-622页

作者：安慧茹王仲元王坤解放军第三〇九医院全军结核病研究所北京100091

患者女，46岁，咳嗽、咳痰9个月，胸痛8个月，发热5个月，皮下脓肿4个月，咯血1个月，于2011年8月10日收入解放军第三〇九医院。患者于2010年11月无明显诱因出现咳嗽，咯少量痰。2011年1月间断出现胸背部疼痛，PPD试验阴性，痰涂片抗酸... 详细信息

患者女，46岁，咳嗽、咳痰9个月，胸痛8个月，发热5个月，皮下脓肿4个月，咯血1个月，于2011年8月10日收入解放军第三〇九医院。患者于2010年11月无明显诱因出现咳嗽，咯少量痰。2011年1月间断出现胸背部疼痛，PPD试验阴性，痰涂片抗酸染色阴性，胸部CT示右肺下叶团片影，周围无播散灶，外院诊断为肺结核，给予异烟肼、乙胺丁醇和左氧氟沙星治疗半个月，症状缓解停药。

关键词：奴卡菌病结核病多脏器误诊胸背部疼痛 PPD试验左氧氟沙星皮下脓肿

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结核分支杆菌耐喹诺酮分子机制的研究

中国抗生素杂志 2005年第2期30卷 103-106页

作者：安慧茹王巍李洪敏何珂刘真李素梅解放军309医院北京100091

目的了解结核分支杆菌耐喹诺酮药物的分子机制,建立快速的药敏的方法。方法通过16SrRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分支杆菌临床分离株;通过PCR-SSCP和直接测序技术(PCR-DS)分析结核分支杆菌的gyrA基因突变的情... 详细信息

目的了解结核分支杆菌耐喹诺酮药物的分子机制,建立快速的药敏的方法。方法通过16SrRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分支杆菌临床分离株;通过PCR-SSCP和直接测序技术(PCR-DS)分析结核分支杆菌的gyrA基因突变的情况。结果75株为结核分支杆菌复合群。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv和卡介苗为对照,30株喹诺酮敏感株的gyrA基因的SSCP图谱均泳动正常,测序分析与对照株相同。45株耐喹诺酮的菌株中,34株(75.6%)gyrA基因SSCP图谱泳动异常;测序证实10株为90位密码子的突变,24株为94位密码子突变,所有gyrA突变株的氧氟沙星4μg/ml≤MICs≤32μg/ml,左氧氟沙星2μg/ml≤MICs≤16μg/ml。结论gyrA基因突变,尤其90位和94位密码子突变是结核分支杆菌耐喹诺酮的主要分子机制,PCR-SSCP可能成为测定部分结核分支杆菌喹诺酮耐药基因型的简便、快速的方法,并有望直接用于临床标本喹诺酮敏感性试验。

关键词：结核分支杆菌喹诺酮 gyrA基因药物耐受性聚合酶链反应单链构象多态性 DNA直接测序

MnSOD的基因多态性与抗结核药物性肝损害关系的研究

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中国抗生素杂志 2012年第11期37卷 I0001-I0004页

作者：安慧茹吴雪琼王仲元解放军第309医院全军结核病研究所北京100091

目的研究药物代谢酶锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的基因多态性与抗结核药物肝损害的关系,阐明抗结核药物诱导肝损害的分子机制。方法通过聚合酶链反应-直接测序(PCR-DS)方法分析101例有抗结核药物性肝损害的结核病患者(病例组)及107例无抗... 详细信息

目的研究药物代谢酶锰超氧化物歧化酶(MnSOD)的基因多态性与抗结核药物肝损害的关系,阐明抗结核药物诱导肝损害的分子机制。方法通过聚合酶链反应-直接测序(PCR-DS)方法分析101例有抗结核药物性肝损害的结核病患者(病例组)及107例无抗结核药物性肝损害的结核病患者(对照组)的MnSOD的基因多态性,并分析它们与抗结核药物性肝损害之间的关系。结果与MnSOD编码基因47位碱基T/T基因型(OR:0.68,P>0.05)、T/C基因型(OR:1.03,P>0.05)比较,47位碱基C/C基因型患者更易发生抗结核药物性肝损害,OR值为5.77(P<0.05)。结论 MnSOD编码基因的47位碱基CC基因型有可能是发生抗结核药物性肝损害的易感基因。

关键词：抗结核药物肝损害 MNSOD 基因多态性

《活动性结核病患者免疫功能状态评估和免疫治疗专家共识(2021年版)》的免疫辅助治疗解读

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中国防痨杂志 2022年第6期44卷 539-543页

作者：安慧茹吴雪琼中国人民解放军总医院第八医学中心结核病医学部/全军结核病防治重点实验室/结核病诊疗新技术北京市重点实验室北京100091

结核病的发生、发展及转归与患者的抗结核免疫功能密切相关。结核病患者常常存在抗结核免疫功能的异常,对结核病患者应用免疫制剂进行免疫干预,可提高治愈率、降低复发率,但对活动性结核病患者免疫干预的指征、免疫制剂的选择尚未达成... 详细信息

结核病的发生、发展及转归与患者的抗结核免疫功能密切相关。结核病患者常常存在抗结核免疫功能的异常,对结核病患者应用免疫制剂进行免疫干预,可提高治愈率、降低复发率,但对活动性结核病患者免疫干预的指征、免疫制剂的选择尚未达成一致意见。发表于《中国防痨杂志》2022年第1期的《活动性结核病患者免疫功能状态评估和免疫治疗专家共识(2021年版)》就抗结核免疫辅助治疗提出了具体建议并达成共识。本文主要对共识中结核病患者免疫异常因素、活动性结核病患者免疫辅助治疗概念、应用免疫制剂进行免疫干预的临床应用及存在问题和建议等进一步解读,以供我国结核病临床工作者借鉴和参考。

关键词：结核免疫疗法总结性报告(主题) 评论

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Ag/PbO2电极的制备及其光电协同性能

大连工业大学学报 2020年第5期39卷 339-343页

作者：马安慧茹马红超大连工业大学轻工与化学工程学院辽宁大连116034

制备了一种新型Ag/PbO2复合电极,并采用X射线衍射、扫描电子显微镜、X射线能谱分析、紫外可见吸收光谱、电化学工作站等对其进行了系统表征。结果表明,相较于纯氧化铅电极,该复合电极具有大的电活性面积、低的电荷转移阻抗和较高的羟基... 详细信息

制备了一种新型Ag/PbO2复合电极,并采用X射线衍射、扫描电子显微镜、X射线能谱分析、紫外可见吸收光谱、电化学工作站等对其进行了系统表征。结果表明,相较于纯氧化铅电极,该复合电极具有大的电活性面积、低的电荷转移阻抗和较高的羟基自由基生成效率。采用染料(活性艳蓝)溶液脱色考察了Ag/PbO2复合电极的光电化学性能。光电催化降解实验显示纯PbO2电极的染料降解率仅为59.4%,而Ag/PbO2复合电极对染料的降解率达到79.2%。Ag/PbO2复合电极光电化学能力的提高可归因于Ag的引入改善了PbO2电极的电化学性能和反应活性物的生成效率。本研究为Ag/PbO2电极在难降解有机污染物处理中的应用提供了理论实验基础。

关键词：银二氧化铅光电协同电沉积