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碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性分析

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碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性分析

作者：宁长秀南昌大学

学位级别：硕士

目的: 探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药机制及同源性。方法：收集南昌地区四家教学医院耐碳青霉烯类抗生素（亚胺培南和/或美罗培南）的肺炎克雷伯菌29株，双纸片增效法检测ESBLs（超广谱β-内酰胺酶）、三... 详细信息

目的: 探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药机制及同源性。方法：收集南昌地区四家教学医院耐碳青霉烯类抗生素（亚胺培南和/或美罗培南）的肺炎克雷伯菌29株，双纸片增效法检测ESBLs（超广谱β-内酰胺酶）、三维实验检测AmpC酶、改良Hodge实验和双纸片协同法检测碳青霉烯酶，聚合酶链反应(PCR）扩增耐药基因，并对扩增产物测序，确定其基因型。接合试验评价耐药质粒的可转移性。脉冲场凝胶电泳（PFGE）对其进行同源性分析。采用多位点序列分型技术（MLST）对CRKP进行分子遗传学分析,应用eBURST软件对多位点序列分型结果进行其种群结构分析。结果： 29株实验菌中有19株携带碳青霉烯酶基因，占65.5%(19/29)，以blaKPC-2为主（44.8%，13/29），其次为blaNDM-1、blaIPM-26及blaIPM-4，携带率分别为17.2%、10.3%及6.9%，另还有3株同时携带blaKPC-2和blaIPM-26，1株同时携带blaKPC-2和blaIPM-4。17株除携带碳青霉烯酶基因外，还携带ESBLs基因和（或）AmpC基因，占58.6%。未检测到VIM、GES、SPM及OXA等其他碳青霉烯酶基因。PMQR（质粒介导的喹诺酮类耐药基因）检出率为48.3%(14/29)，其中qnrB5株，包括qnrB21株、qnrB43株、qnrB101株;qnrS5株，均为qnrS1;1株同时携带qnrS1和qnrB4;aac(6’)-Ib-cr3株。8株16S rRNA甲基化酶基因阳性，其中7株armA阳性，1株rmtB阳性。KP25外膜蛋白基因Ompk35缺失，其他实验株Ompk35、Ompk36均未缺失。29株实验菌中有27株被PFGE成功分型，分别属于20个不同克隆，其余2株分型不成功，属于同一克隆型且携带blaKPC-2基因的4株菌来源同一医院。29株CRKP被MLST成功分成16个ST型，以ST11和ST15为主（各5株），其次ST395（3株），ST334、ST273、ST147（各2株，），ST1128、ST42、ST1031、ST764、ST629和ST37（各1株）,另有4个新的ST型已被Pubmlst数据库确认收录并分别命名为ST1369、ST1411、ST1412和ST1413。29株实验菌对阿米卡星的耐药率较低外（37.9％）,对其他15种测试抗菌药物的耐药率均大于69％，其中对头孢呋辛、亚胺培南的耐药率为100％，多重耐药肺炎克雷伯菌的检出率为62.1％(18/29)。结论: CRKP耐药及多重耐药性严重，通过29株实验菌对临床常用的16种测试抗菌药物耐药率的筛选，结果显示阿米卡星的耐药率最低（37.9％），提示临床可以把阿米卡星选为治疗CRKP感染最有效的抗生素。携带碳青霉烯酶基因是肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗生素的主要原因65.5%(19/29)，以blaKPC-2为主（44.8%，13/29）;尤为明显的是29株CRKP中有5株携带blaNDM，明显高于国内其他地区，而且有17株除携带碳青霉烯酶基因外，还携带ESBLs基因、AmpC基因、PMQR基因、16S rRNA甲基化酶基因等，可见CRKP耐药机制的复杂。本地区CRKP具有基因多态性，主要克隆系为ST11和ST15，曾有过短暂局部的ST15流行;另外4个新的ST型已被Pubmlst数据库确认收录并分别命名为ST1369、ST1411、ST1412和ST1413。

关键词：碳青霉烯类抗生素肺炎克雷伯菌耐药机制同源性

2015年江西抚州市第一人民医院临床分离菌耐药性分析

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中国感染与化疗杂志 2017年第2期17卷 171-176页

作者：宁长秀邱锡荣胡利民抚州市第一人民医院检验科江西抚州344000

目的了解江西省抚州市第一人民医院2015年临床分离菌分布及耐药状况。方法采用ATB Reader半自动仪器比色法进行菌种鉴定,纸片扩散法进行药敏试验,参照CLSI 2015年版标准判读结果,WHONET5.5软件进行数据分析。结果该院2015年共收集非重... 详细信息

目的了解江西省抚州市第一人民医院2015年临床分离菌分布及耐药状况。方法采用ATB Reader半自动仪器比色法进行菌种鉴定,纸片扩散法进行药敏试验,参照CLSI 2015年版标准判读结果,WHONET5.5软件进行数据分析。结果该院2015年共收集非重复临床分离菌1 215株,其中革兰阴性菌858株,占70.6%,革兰阳性菌357株,占29.4%。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(金葡菌,MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分别占金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌的50.0%和84.1%;MRSA对红霉素高度耐药、对四环素和诺氟沙星耐药率均为80.3%,未见耐万古霉素和替考拉宁葡萄球菌。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBL株分别占52.5%和34.7%;检出碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌10株。铜绿假单胞菌对阿米卡星、头孢哌酮-舒巴坦、美罗培南和妥布霉素的耐药率均低于10%。鲍曼不动杆菌对黏菌素和头孢哌酮-舒巴坦的耐药率分别为2.4%和51.8%,对其他常用抗菌药物的耐药率均在75%以上。结论该院临床分离菌以革兰阴性杆菌为主,细菌耐药性仍是临床重要问题,应引起临床高度重视。

关键词：抗菌药物药敏试验耐药性分析

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本院2014年临床分离菌耐药性分析

中国临床药理学杂志 2015年第11期31卷 1044-1048页

作者：宁长秀邱锡荣胡利民抚州市第一人民医院检验科江西抚州344000

目的了解2014年抚州市第一人民医院临床分离菌对抗菌药的耐药性。方法用ATB reader半自动仪器比色法进行菌种鉴定和药敏试验,参照临床实验室标准化协会(CLSI)2014年版判读结果,WHONET 5.5软件进行数据分析。结果 2014年共收集非重复临... 详细信息

目的了解2014年抚州市第一人民医院临床分离菌对抗菌药的耐药性。方法用ATB reader半自动仪器比色法进行菌种鉴定和药敏试验,参照临床实验室标准化协会(CLSI)2014年版判读结果,WHONET 5.5软件进行数据分析。结果 2014年共收集非重复临床分离菌885株,其中革兰氏阴性菌529株(59.8%),革兰氏阳性菌263株(29.7%),真菌93株(10.5%)。大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌(肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌)中超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的检出率分别为36.3%和19.3%,肠杆菌科细菌对美罗培南和亚胺培南的耐药率均低于10%。铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为17.0%,鲍曼不动杆菌除对多黏菌素E耐药率<10%外,对其他常用抗菌药的耐药率均大于50%,多重耐药鲍曼不动杆菌的检出率为75.9%。甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分别占各自菌株的63.0%和71.4%。未发现对万古霉素耐药的葡萄球菌,检测出1株屎肠球菌对万古霉素耐药。结论我院临床分离菌以革兰氏阴性杆菌为主,细菌耐药性仍是临床重要问题,尤其是MRSA的检出率高于国内其他地区,应引起临床高度重视。

关键词：细菌抗菌药药敏试验耐药性监测

耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药特性的分析

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中国抗生素杂志 2013年第10期38卷 788-790页

作者：宁长秀汪红钟桥石杭亚平胡晓彦章白苓贾坤如胡龙华南昌大学第二附属医院南昌330006

目的探讨耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的临床分布及耐药特性,以便更好地指导临床控制和治疗此类细菌的感染。方法常规方法进行菌株分离,经革兰染色、氧化酶试验等初筛,再经VITEK-32型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定,K-B法进行药... 详细信息

目的探讨耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的临床分布及耐药特性,以便更好地指导临床控制和治疗此类细菌的感染。方法常规方法进行菌株分离,经革兰染色、氧化酶试验等初筛,再经VITEK-32型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定,K-B法进行药物敏感试验。结果 2011年1月至2012年6月共检测到56株耐碳青霉烯类药物的肠杆菌科细菌,主要有肺炎克雷伯菌33株(58.9%)、阴沟肠杆菌10株(17.9%)、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌各5株(8.9%)。以下呼吸道标本痰液为主,占55.4%(31/56),其次为伤口分泌物12.5%(7/56)。病区分布前4位的分别是ICU(30.4%)、神经外科(17.9%)、呼吸内科(12.5%)和肾内科(10.7%)。56株实验菌中有8株泛耐药,泛耐药率达14.3%,耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌对常用16种抗菌药物耐药率>60%的有15种,其中耐药率>90%的也有6种,分别为氨苄西林、氧哌秦青霉素、头孢呋辛、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南。耐药率最低的为阿米卡星(42.9%)。结论耐碳青霉烯类药物的肠杆菌科细菌的多重耐药性严重,甚至泛耐药,临床无经验抗菌药物可选,必须依据药敏试验的结果选用敏感的抗菌药物进行治疗。

关键词：碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药性

引起皮肤软组织及血流感染的金黄色葡萄球菌耐药特性分析

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中华医院感染学杂志 2013年第22期23卷 5572-5574页

作者：宁长秀汪红钟桥石杭亚平胡晓彦章白苓胡龙华南昌大学第二附属医院检验科江西南昌330006

目的调查引起皮肤软组织和血流感染的金黄色葡萄球菌的耐药特征,为临床防治其感染提供帮助。方法采用血浆凝固酶、金黄色葡萄球菌单克隆抗体及VITEK-32型仪进行菌株鉴定,纸片琼脂扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验,E-test条检测金黄色葡... 详细信息

目的调查引起皮肤软组织和血流感染的金黄色葡萄球菌的耐药特征,为临床防治其感染提供帮助。方法采用血浆凝固酶、金黄色葡萄球菌单克隆抗体及VITEK-32型仪进行菌株鉴定,纸片琼脂扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验,E-test条检测金黄色葡萄球菌对万古霉素的MIC,头孢西丁纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,所有数据采用WHONET5.6软件分析。结果 2011年6月-2012年6月从患者皮肤软组织和血流感染标本中共分离获得118株金黄色葡萄球菌,其中检出MRSA 27株,检出率为22.8%,未检出万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药株,对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、阿米卡星、夫西地酸及左氧氟沙星,耐药率分别为4.20%、5.90%、6.70%及8.40%;耐药率最高的是青霉素为92.30%;MRSA与MSSA比较耐药率差异有统计学意义的分别为阿米卡星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、左氧氟沙星、庆大霉素及红霉素。结论导致皮肤软组织和血流感染的金黄色葡萄球菌耐药性较严重,尤其是MRSA的多药耐药性更严重,临床应引起重视并加强对耐药菌的监测。

关键词：皮肤软组织感染血流感染金黄色葡萄球菌耐药性

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无菌体液中鲍曼不动杆菌的分布及耐药性分析

中国感染与化疗杂志 2013年第4期13卷 293-295页

作者：汪红宁长秀钟桥石杭亚萍胡晓彦章白苓贾坤如胡龙华南昌大学第二附属医院检验科南昌330006

目的了解患者无菌体液中分离的鲍曼不动杆菌分布及其耐药特征,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性调查南昌大学第二附属医院2011年9月—2012年8月分离自患者无菌体液中鲍曼不动杆菌的分布和耐药特性。采用K-B法进行药敏试验,依据2... 详细信息

目的了解患者无菌体液中分离的鲍曼不动杆菌分布及其耐药特征,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性调查南昌大学第二附属医院2011年9月—2012年8月分离自患者无菌体液中鲍曼不动杆菌的分布和耐药特性。采用K-B法进行药敏试验,依据2011年度CLSI标准判读结果。采用WHONET5.5软件分析数据。结果共获得鲍曼不动杆菌88株,以重症监护病房多见,占63.6%(56/88),患者年龄≥50岁者占62.5%(55/88),多重耐药鲍曼不动杆菌检出率为81.8%。该菌对12种临床常用抗菌药物中的7种耐药率>75.0%,对头孢哌酮-舒巴坦耐药率最低,为21.6%。结论患者免疫功能低下是鲍曼不动杆菌感染的主要原因,无菌体液中分离的鲍曼不动杆菌耐药及多重耐药性均非常严重,头孢哌酮-舒巴坦可作为经验用药之一。

关键词：无菌体液鲍曼不动杆菌细菌分布耐药特性

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环介导恒温扩增法检测肺炎链球菌的研究

中国微生态学杂志 2013年第7期25卷 845-846,850页

作者：章白苓桂炳东徐轶宁长秀胡龙华贾坤茹胡晓彦南昌大学第二附属医院江西南昌330006 江西省人民医院江西南昌330006

目的建立环介导恒温扩增(LAMP)检测肺炎链球菌的方法。方法用LAMP技术扩增肺炎链球菌菌株,并应用50例临床标本采用传统培养法、PCR法、LAMP法进行检测,比较3种方法的检出率,同时检测方法特异性和灵敏度。结果所测肺炎链球菌均获扩增产物... 详细信息

目的建立环介导恒温扩增(LAMP)检测肺炎链球菌的方法。方法用LAMP技术扩增肺炎链球菌菌株,并应用50例临床标本采用传统培养法、PCR法、LAMP法进行检测,比较3种方法的检出率,同时检测方法特异性和灵敏度。结果所测肺炎链球菌均获扩增产物,对其他非肺炎链球菌无交叉反应。LAMP检测灵敏度可达102CFU/mL。50例临床标本使用LAMP法检出9例肺炎链球菌阳性(18.0%),使用传统培养法检出阳性4例(8.0%)。结论 LAMP法较传统培养检测方法特异性强、灵敏度高、操作方便、快速,适合临床标本的肺炎链球菌检测。

关键词：环介导恒温扩增法肺炎链球菌检测方法

南昌4家教学医院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及同源性分析

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临床检验杂志 2014年第4期32卷 306-310页

作者：宁长秀胡龙华汪红钟桥石杭亚平王小中胡晓彦余方友南昌大学第二附属医院检验科南昌330006 温州医科大学附属第一医院检验科浙江温州325000

目的探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制及同源性。方法收集南昌地区4家教学医院耐碳青霉烯类抗菌药物(亚胺培南和/或美罗培南)的肺炎克雷伯菌29株,双纸片增效法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、三维实验检测Amp... 详细信息

目的探讨临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制及同源性。方法收集南昌地区4家教学医院耐碳青霉烯类抗菌药物(亚胺培南和/或美罗培南)的肺炎克雷伯菌29株,双纸片增效法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、三维实验检测AmpC酶、改良Hodge实验和双纸片协同法检测碳青霉烯酶,PCR扩增耐药基因,并对扩增产物测序,确定其基因型。脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行同源性分析。结果 29株分离菌除对阿米卡星的耐药率较低(37.9%)外,对其他13种抗菌药物的耐药率均大于69%,其中对头孢呋辛、亚胺培南的耐药率为100%,多重耐药肺炎克雷伯菌的检出率为62.1%(18/29)。29株分离菌中有19株携带碳青霉烯酶基因,占65.5%(19/29),以blaKPC-2为主(44.8%,13/29),其次为blaNDM-1、blaIMP-26及blaIMP-4,携带率分别为17.2%(5/29)、10.3%(3/29)及6.9%(2/29),另有3株同时携带blaKPC-2和blaIMP-26,1株同时携带blaKPC-2和blaIMP-4。17株除携带碳青霉烯酶基因外,还携带ESBLs基因和(或)AmpC基因,占58.6%。未检测到VIM、GES、SPM及OXA等其他碳青霉烯酶基因。29株分离菌中有27株被PFGE成功分型,分别属于20个不同克隆,其余2株分型不成功。属于同一克隆型且携带blaKPC-2基因的4株菌来自同一医院。结论 CRKP耐药及多重耐药现象严重;携带碳青霉烯酶基因是肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的主要原因,blaKPC-2携带率高,且在局部有短暂流行。本地区已监测到携带blaNDM的肺炎克雷伯菌,值得关注。

关键词：碳青霉烯类抗菌药物肺炎克雷伯菌耐药机制同源性

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2012年临床分离菌分布及耐药性分析

中国感染与化疗杂志 2014年第1期14卷 63-68页

作者：汪红宁长秀钟桥石杭亚平宋林容张黎明胡晓彦章白苓贾坤如胡龙华南昌大学第二附属医院检验科南昌330006

目的了解南昌大学第二附属医院临床分离菌的分布及耐药特性。方法采用纸片扩散法进行抗菌药物药敏试验,E试验检测葡萄球菌属对万古霉素及肺炎链球菌对青霉素的MIC。参照CLSI 2012年版标准判读药敏结果,用WHONET5.5软件进行数据分析。结... 详细信息

目的了解南昌大学第二附属医院临床分离菌的分布及耐药特性。方法采用纸片扩散法进行抗菌药物药敏试验,E试验检测葡萄球菌属对万古霉素及肺炎链球菌对青霉素的MIC。参照CLSI 2012年版标准判读药敏结果,用WHONET5.5软件进行数据分析。结果 2012年共收集到非重复临床分离菌4 454株,其中革兰阴性菌3 181株(71.4%),革兰阳性菌1 273株(28.6%)。呼吸道分泌物标本占28.5%,其次为血液(26.7%)和脓液(包括伤口分泌物,20.3%)。居前5位的病原菌依次为大肠埃希菌(16.1%)、鲍曼不动杆菌(12.4%)、铜绿假单胞菌(11.8%)、肺炎克雷伯菌(10.3%)和金葡菌(8.8%)。葡萄球菌属中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分别占29.2%和79.0%,未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株。肺炎链球菌中青霉素耐药株占14.2%,β溶血链球菌对红霉素和克林霉素耐药率较高。屎肠球菌对多数抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌,检出2株屎肠球菌和4株粪肠球菌对万古霉素耐药。大肠埃希菌、克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌)和奇异变形杆菌中ESBLs的检出率分别为68.0%、40.4%和34.0%,ESBLs阳性菌株对大多数抗菌药物的耐药率高于ESBLs阴性的菌株。肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均低于10.0%。铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为20.2%。鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦外,对其他常用抗菌药物的耐药率均大于60.0%。结论该院临床分离菌耐药现象严重,尤其是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药率增高较快,应引起重视。

关键词：耐药性细菌细菌分布耐药性监测