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文蛤体液抗肿瘤蛋白的分离纯化与作用方式研究

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文蛤体液抗肿瘤蛋白的分离纯化与作用方式研究

作者：宁璇璇中国科学院研究生院（海洋研究所）

学位级别：硕士

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病,目前的抗肿瘤药物虽然具有一定疗效,但存在选择性差、毒副作用大等缺点,药物治疗期待着新的突破。因此,寻找高效低毒的抗肿瘤药物已经成为当前肿瘤研究的重要内容。传统抗肿瘤天然药物的来源局限在陆... 详细信息

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病,目前的抗肿瘤药物虽然具有一定疗效,但存在选择性差、毒副作用大等缺点,药物治疗期待着新的突破。因此,寻找高效低毒的抗肿瘤药物已经成为当前肿瘤研究的重要内容。传统抗肿瘤天然药物的来源局限在陆地,近年来在海洋来源的具有抗肿瘤活性物质的开发上取得了很多成果,获得了多种高活性、毒副作用小、作用机制新颖的活性化合物,为新型抗肿瘤药物的研发提供了新思路。本研究采用硫酸铵分级沉淀、弱阳离子交换层析、疏水层析、强阴离子交换层析等分离技术,结合MTT活性追踪方法,从海洋软体动物文蛤体液中纯化得到单一蛋白组份MML,SDS-PAGE检测其分子量约为40kD。该蛋白在体外具有显著的抗人肝癌细胞BEL-7402的活性,其IC50达到52μg/mL。相差显微镜下观察发现,MML起效较快,细胞处理半小时后,形态开始发生改变,细胞膜逐渐与胞内物质分离,最终形成明显的空泡状结构。为进一步研究MML的作用方式,分别从细胞膜毒性、细胞周期阻滞及诱导肿瘤细胞凋亡的角度开展了相关研究。在细胞膜毒性方面,采用扫描电镜观察、Hoechst33342/ PI双染色和乳酸脱氢酶漏出率检测的方法,初步证明了MML对BEL-7402具有细胞膜毒性。结合流式细胞仪、微管蛋白免疫荧光检测技术,研究了MML作用后的细胞周期及微管蛋白的变化情况,结果发现MML的抗肿瘤作用方式可能是通过改变肿瘤细胞膜通透性,进而破坏微管蛋白聚合、阻滞细胞周期,产生抑制肿瘤细胞增殖的活性。DNA Ladder琼脂糖凝胶电泳分析发现,MML作用后的细胞出现一定程度的凋亡,这种凋亡现象的产生是由于MML的直接诱导,还是间接作用产生,尚有待于深入研究。

关键词：文蛤抗肿瘤蛋白分离纯化 MTT比色法作用方式

2009年莱州湾近岸海域浮游植物群落的结构特征

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海洋湖沼通报 2011年第3期 97-104页

作者：宁璇璇纪灵王刚夏炳训国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006

根据2009年5、8、10月莱州湾近岸海域的调查数据,对浮游植物的群落结构进行了初步研究。共鉴定浮游植物3门30属58种,主要为温带近岸性和广布性种。其中,硅藻门占总种数的87.9%,以角毛藻属(Chaetoceros)和圆筛藻属(Coscinodiscus)的种类... 详细信息

根据2009年5、8、10月莱州湾近岸海域的调查数据,对浮游植物的群落结构进行了初步研究。共鉴定浮游植物3门30属58种,主要为温带近岸性和广布性种。其中,硅藻门占总种数的87.9%,以角毛藻属(Chaetoceros)和圆筛藻属(Coscinodiscus)的种类最多;甲藻门占总种数的10.3%,以角藻属(Ceratium)为主。金藻门只有小等刺硅鞭藻(Dictyocha fibula)一种。群落优势种组成存在季节性演替的现象。细胞数量上,硅藻占浮游植物总量的99.8%。经Shannon-Winner指数、Margalef指数、均匀度指数分析,该海域浮游植物多样性和种丰富度总体较好,群落结构较为稳定。本年度调查共发现赤潮生物38种,建议在夏季加强海域赤潮防范。

关键词：浮游植物群落结构多样性莱州湾

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甲状腺激素在鱼类繁殖中的作用

海洋科学 2010年第7期34卷 106-110页

作者：于道德宁璇璇任贵如刘洪军山东省海水养殖研究所山东青岛266071 国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006 滨州市海洋与渔业局山东滨州256600

甲状腺激素（Thyroid hormone，TH），包括三碘甲状腺原氨酸（T3）和四碘甲状腺原氨酸（T4），存在于所有的脊椎动物中。研究表明，TH对哺乳类和两柄类的早期发育和变态过程发挥着至关重要的作用，

关键词：甲状腺激素鱼类繁殖脊椎动物早期发育哺乳类氨酸三碘

加速溶剂萃取法提取海洋贝类体中石油烃的方法

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海洋环境科学 2013年第2期32卷 300-303页

作者：夏炳训宁璇璇姜军成曲琳吴翠翠国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006

建立了用加速溶剂萃取技术提取海洋贝类体中石油烃的方法。从萃取溶剂、温度、压力、静态时间、循环次数等方面对提取条件进行了优化:萃取剂为石油醚,萃取温度125℃,压力10.34 MPa,静态提取时间5 min,循环1次。在确定的条件下,对ASE方... 详细信息

建立了用加速溶剂萃取技术提取海洋贝类体中石油烃的方法。从萃取溶剂、温度、压力、静态时间、循环次数等方面对提取条件进行了优化:萃取剂为石油醚,萃取温度125℃,压力10.34 MPa,静态提取时间5 min,循环1次。在确定的条件下,对ASE方法的回收率和精密度进行了验证,并与国标GB17378.6-2007中的方法进行比较。结果显示,ASE法的回收率为92.0%～101.3%,相对标准偏差为2.1%;国标法的回收率为88.0%～95.3%,相对标准偏差为3.7%。t-检验表明ASE法与国标法之间不存在显著性差异,ASE法适合于贝类体内石油烃的提取。

关键词：加速溶剂萃取海洋贝类体石油烃

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浅谈海水溶解氧污染指数计算中的有关问题

环境污染与防治 2013年第4期35卷 107-109页

作者：夏炳训宁璇璇杨鲁宁曲琳国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006

分别采用《环境影响评价技术导则地面水环境》(HJ/T 2.3—1993)和《海洋调查规范》(GB 12763.4—2007)中两种不同的公式计算海水饱和溶解氧,探讨了海水溶解氧污染指数计算中存在的问题。结果表明,饱和溶解氧随盐度的增加而逐渐增大,在... 详细信息

分别采用《环境影响评价技术导则地面水环境》(HJ/T 2.3—1993)和《海洋调查规范》(GB 12763.4—2007)中两种不同的公式计算海水饱和溶解氧,探讨了海水溶解氧污染指数计算中存在的问题。结果表明,饱和溶解氧随盐度的增加而逐渐增大,在正常海水盐度范围(25～35)内,两种公式计算所得的饱和溶解氧的相对偏差平均值为10.1%,而由此引起的溶解氧污染指数相对偏差的平均值则高达49.2%。因此,饱和溶解氧的求算公式对溶解氧污染指数的计算结果具有显著影响,海水饱和溶解氧的计算应采用GB 12763.4—2007中的公式,而不能简单套用HJ/T 2.3—1993中的公式。

关键词：海水溶解氧污染指数计算

2013年夏季千里岩岛水产种质资源保护区浮游生物的生态特征

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海洋通报 2014年第5期33卷 592-598页

作者：宁璇璇夏炳训陈权文丁琳国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006

分析了2013年7月千里岩岛水产种质资源保护区海域浮游生物的种类组成、数量分布、优势种类、生态类型与物种多样性等生态特征参数。共发现浮游植物21种,由硅藻和甲藻组成,平均丰度为2.29×104个/m3,角毛藻为主要优势种类,生态类型以温... 详细信息

分析了2013年7月千里岩岛水产种质资源保护区海域浮游生物的种类组成、数量分布、优势种类、生态类型与物种多样性等生态特征参数。共发现浮游植物21种,由硅藻和甲藻组成,平均丰度为2.29×104个/m3,角毛藻为主要优势种类,生态类型以温带近岸性和广温、广布性沿岸种为主。浮游动物19种,包括桡足类、枝角类、端足类、樱虾类、毛颚类和各种浮游幼虫。丰度均值为146.90个/m3,平均生物量为6.44 mg/m3,桡足类和毛颚类为优势类群,生态类型以温带近岸种为主。与2012年同期调查数据相比,浮游生物的种类数量与丰度均有增大,群落结构趋于稳定。

关键词：千里岩岛保护区浮游生物生态特征

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文蛤体液蛋白体内外抗肿瘤作用的研究

中国新药杂志 2009年第18期18卷 1787-1792页

作者：张玉艳张胜华宁璇璇王翠翠刘明林秀坤中国科学院海洋研究所青岛266071 中国科学院研究生院北京100039 中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所北京100050

目的:由文蛤体液中获得一种新的抗肿瘤蛋白。方法:采用电镜技术、流式细胞仪技术、微管蛋白α-tubulin的荧光染色技术、电泳技术,研究了MML作用后细胞凋亡、细胞周期及微管蛋白的变化情况;建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察MML的体内抗... 详细信息

目的:由文蛤体液中获得一种新的抗肿瘤蛋白。方法:采用电镜技术、流式细胞仪技术、微管蛋白α-tubulin的荧光染色技术、电泳技术,研究了MML作用后细胞凋亡、细胞周期及微管蛋白的变化情况;建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模型,观察MML的体内抗肿瘤活性。结果:发现MML可显著抑制肿瘤细胞生长,IC50达到52.2μg·mL-1。作用机制的研究表明MML可以增加肿瘤细胞膜通透性、抑制微管蛋白聚合、使肿瘤细胞停滞在G2/M期;MML对人肝癌BEL-7402移植性肿瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用。结论:文蛤体液蛋白是一种新型的抗肿瘤蛋白,主要通过增加细胞膜的通透性、引起细胞凋亡、抑制微管蛋白聚合产生抗肿瘤作用。

关键词：文蛤体液抗肿瘤蛋白流式细胞仪微管蛋白α-tubulin的荧光人肝癌BEL-7402细胞裸鼠

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烟台套子湾海域秋季浮游植物群落的初步研究

海洋通报 2011年第4期30卷 425-429页

作者：宁璇璇纪灵王刚夏炳训丁琳国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006

根据2010年11月的调查数据,对套子湾海域浮游植物的群落结构进行了初步研究。共鉴定浮游植物3门24属43种,主要为温带近岸性和广布性种。其中,硅藻门20属35种,占总种数的81.40%,以圆筛藻属(Coscinodiscus)和角毛藻属(Chaetoceros)的种类... 详细信息

根据2010年11月的调查数据,对套子湾海域浮游植物的群落结构进行了初步研究。共鉴定浮游植物3门24属43种,主要为温带近岸性和广布性种。其中,硅藻门20属35种,占总种数的81.40%,以圆筛藻属(Coscinodiscus)和角毛藻属(Chaetoceros)的种类为主;甲藻类3属7种,占总种数的16.28%,由角藻属(Ceratium)、多甲藻属(Peridinium)及夜光藻(Noctiluca scintillans)组成;金藻门只有小等刺硅鞭藻(Dictyocha fibula)1种。浮游植物细胞丰度的平面分布主要由浮游硅藻的分布决定,其高值区位于套子湾北部湾口和西北部区域。多样性分析表明,该海域浮游植物群落结构比较稳定。聚类分析发现浮游植物基本可归为4大类群,不同群落类型间的组成呈显著性差异。

关键词：浮游植物群落结构套子湾

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牛磺酸在鱼类中的生物学功能

海洋科学 2010年第2期34卷 86-91页

作者：于道德郑永允宁璇璇官曙光任贵如刘洪军山东省海水养殖研究所山东青岛266002 国家海洋局烟台海洋环境监测中心站山东烟台264006 滨州市海洋与渔业局山东滨州2566000

牛磺酸（Taurine），又称为牛胆酸，是一种非蛋白氨基酸，无遗传密码子，不组成蛋白质和酶类，因最早于1827年从牛胆汁中分离而得名。牛磺酸系小分子含硫氨基酸，化学名为2．氨基乙磺酸，结构式为H2N-CH2-CH2-S03H，相对分子质量为125．... 详细信息

牛磺酸（Taurine），又称为牛胆酸，是一种非蛋白氨基酸，无遗传密码子，不组成蛋白质和酶类，因最早于1827年从牛胆汁中分离而得名。牛磺酸系小分子含硫氨基酸，化学名为2．氨基乙磺酸，结构式为H2N-CH2-CH2-S03H，相对分子质量为125．4，常温常压下牛磺酸纯品为无色四面针状结晶，无臭，

关键词：牛磺酸生物学功能鱼类非蛋白氨基酸相对分子质量遗传密码子含硫氨基酸氨基乙磺酸