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重组酶聚合酶扩增结合侧向流动试纸条技术快速可视化检测嗜麦芽窄食单胞菌方法的建立与应用

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南京医科大学学报（自然科学版） 2024年第1期44卷 24-31页

作者：季拓高玉芝王彦高绪柱江苏大学附属连云港市第二人民医院中心实验室江苏连云港222000 南京医科大学康达学院附属连云港市第二人民医院中心实验室江苏连云港222000

目的:建立一种基于重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification,RPA)和侧向流动试纸条(lateral flow strips,LFS)的嗜麦芽窄食单胞菌快速可视化检测方法。方法:以嗜麦芽窄食单胞菌特异性序列(NC_010943.1)为模板,设计RPA引... 详细信息

目的:建立一种基于重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification,RPA)和侧向流动试纸条(lateral flow strips,LFS)的嗜麦芽窄食单胞菌快速可视化检测方法。方法:以嗜麦芽窄食单胞菌特异性序列(NC_010943.1)为模板,设计RPA引物。通过基础型RPA反应和琼脂糖凝胶电泳,根据候选引物对的扩增性能及引物二聚体的形成情况筛选最佳引物对。根据最佳引物对,设计探针和修饰引物。在引物和探针中引入碱基错配以消除假阳性信号,建立RPA-LFS反应体系。根据检测线的显色情况,优化RPA-LFS的最佳反应条件。使用临床常见的12种致病菌和12个临床来源的嗜麦芽窄食单胞菌检测该方法的特异性。以10倍梯度稀释的嗜麦芽窄食单胞菌基因组为模板,检测该方法的灵敏度。收集108例临床样本,将该方法与qPCR检测法和生化培养法对比,对RPA-LFS检测法进行kappa一致性检验及临床应用评价。结果:RPA-LFS检测法在37℃恒温条件下8 min即可完成扩增反应,1 min内可在LFS上观察到结果。该方法灵敏度高,最低检出限为1.107 CFU,并且与其他病原菌无交叉反应,特异性强。应用于临床样本检测时,该方法与qPCR相比,检测结果准确性一致。与生化培养方法的符合率为99.07%,kappa指数值为0.972,具有良好的一致性。结论:本研究建立了一种不依赖于精密仪器和专业技术人员的RPA-LFS检测方法,能够短时间内精准鉴定嗜麦芽窄食单胞菌。该方法的建立可为及时制定合理的抗菌治疗方案提供信息,具有较大的临床应用潜力。

关键词：嗜麦芽窄食单胞菌重组酶聚合酶扩增侧向流动试纸条

超声斑点追踪成像技术对T2DM伴高血压患者左心室舒张功能的评估价值

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江苏医药 2024年第1期50卷 39-42页

作者：王鑫宇孙丽丽季拓锦州医科大学辽宁121001 锦州医科大学科技处辽宁121001 锦州医科大学附属第一医院超声科

目的探讨超声斑点追踪成像技术(STI)对2型糖尿病(T2DM)伴高血压患者左心室舒张功能的评估价值。方法回顾性分析135例单纯高血压患者(EH组)、105例单纯T2DM患者(T2DM组)、107例高血压合并T2DM患者(T2DM+EH组)及33例门诊健康体检者(NC组... 详细信息

目的探讨超声斑点追踪成像技术(STI)对2型糖尿病(T2DM)伴高血压患者左心室舒张功能的评估价值。方法回顾性分析135例单纯高血压患者(EH组)、105例单纯T2DM患者(T2DM组)、107例高血压合并T2DM患者(T2DM+EH组)及33例门诊健康体检者(NC组)临床资料。四组均行常规超声心动图检查,测量室间隔厚度(IVST)和左心室后壁厚度(LVPWT),计算左心室质量指数(LVMI)和相对室壁厚度(RWT)。运用EchoPaC超声工作站进行脱机分析,测量解旋减半时间(HTU)、解旋速度峰值(PUV)和解旋速度达峰时间(TPUV),计算等容解旋比例(IUR)和解旋率(UntwR)。结果 T2DM+EH组LVPWT、IVST、RWT和LVMI均高于NC组、EH组和T2DM组(P<0.05);EH组LVPWT、RWT和LVMI均高于T2DM组和NC组(P<0.05)。T2DM+EH组HTU、PUV和TPUV均高于EH组、T2DM组和NC组(P<0.05),而IUR和UntwR低于EH组、T2DM组和NC组(P<0.05)。EH组HTU、PUV和TPUV高于T2DM组和NC组(P<0.05),而IUR和UntwR低于T2DM组和NC组(P<0.05)。T2DM组HTU、PUV和TPUV高于NC组(P<0.05),而IUR和UntwR低于NC组(P<0.05)。结论T2DM合并高血压时可引起更严重的左心室肥厚和左心室舒张功能不全。STI技术可以定量、无创、重复分析患者左心室解旋运动。解旋动力学参数可为评价左心室舒张功能提供新的量化指标。

关键词：斑点追踪成像技术 2型糖尿病高血压左心室舒张功能

过敏性哮喘患者外周血循环TFR细胞的变化及临床意义

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过敏性哮喘患者外周血循环TFR细胞的变化及临床意义

作者：季拓江南大学

学位级别：硕士

过敏性哮喘是一种发病机制不明确,且具有异质性的慢性病。过敏性哮喘以免疫球蛋白E(Immunoglobulin E,Ig E)的异常升高为主要特征。CD4T细胞免疫失调与过敏性哮喘的病理过程密切相关。滤泡调节性T细胞(follicular regulatory T cell,T)... 详细信息

过敏性哮喘是一种发病机制不明确,且具有异质性的慢性病。过敏性哮喘以免疫球蛋白E(Immunoglobulin E,Ig E)的异常升高为主要特征。CD4T细胞免疫失调与过敏性哮喘的病理过程密切相关。滤泡调节性T细胞(follicular regulatory T cell,T)是一类新发现的在生发中心具有负向调控功能的CD4T细胞亚群,在系统性红斑狼疮、干燥症和过敏性鼻炎等疾病中发挥重要调控作用。然而,T细胞对过敏性哮喘的作用未曾有报道。由于T细胞定位于淋巴滤泡,临床患者取材困难,因此对于T细胞的临床研究难以进行。外周血循环滤泡调节性T细胞(circulating T,cT)由于具有相似功能和表型,在临床研究中常被用来替代T细胞。本研究旨在探讨过敏性哮喘患者cT细胞的比例变化、免疫学作用机制及临床意义。本研究招募江南大学附属医院2020年1月至2021年12月期间收治的25例过敏性哮喘患者和15例同期健康志愿者,采集基本信息和临床资料。采集外周血,分离外周血单个核细胞和血清。光谱流式细胞仪检测外周血cT细胞的比例和特征分子和活化分子表达情况。流式细胞微球芯片捕获技术检测血清细胞因子水平。分析cT细胞比例、特征分子和血清细胞因子与过敏性哮喘临床实验室检测指标的相关性。流式分选2例健康志愿者和2例过敏性哮喘患者外周血CD3CD45CD19总T细胞,单细胞转录组测序技术对哮喘患者外周血cT细胞转录谱进行研究。本研究发现,与健康对照组相比,过敏性哮喘患者cT细胞在CXCR5CD4T细胞中比例显著下降[(5.16±1.17)vs(8.19±2.48),P<0.0001],cT细胞在CD4T细胞中比例显著下降[(0.48±0.13)vs(1.13±0.26),P<0.0001],cT细胞特征分子PD-1表达量无显著性改变,Foxp3[(2794.86±276.29)vs(3589.29±300.06),P<0.001]表达水平显著下降。活化分子CD38表达量无显著性改变,HLA-DR表达水平显著上升[(12997.20±10917.29)vs(3466.67±1701.51),P<0.01]。哮喘患者血清IL-10和IFN-γ表达水平显著降低(P<0.05),IL-4、IL-5和IL-13表达水平显著升高(P<0.05)。相关性分析表明,cT细胞比例与血清总Ig E水平呈负相关(P<0.05),与第1秒用力呼气容积占预计值的百分比FEV1%呈正相关(P<0.01),与CRP和EOS%无关。哮喘患者血清IL-10与cT细胞比例呈正相关(P<0.01),与血清总Ig E水平呈负相关(P<0.05),与FEV1%呈正相关(P<0.05)。哮喘患者cT细胞特征分子Foxp3与血清总Ig E呈负相关(P<0.01)。流式细胞术分析发现cT细胞具有异质性,根据Foxp3表达水平可分为Foxp3cT和Foxp3cT两个亚型,过敏性哮喘患者Foxp3cT比例显著降低(P<0.05)。通过单细胞转录组测序定位了这群稀有细胞,并分析发现Foxp3cT、Foxp3cT细胞两群细胞转录谱差异显著。Foxp3cT细胞转录谱与抑制性功能T细胞更相近。

关键词：过敏性哮喘滤泡调节性T细胞 IL-10 Foxp3

OECD“双支柱”方案下跨境云计算的税收挑战及我国应对

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OECD“双支柱”方案下跨境云计算的税收挑战及我国应对

作者：季拓浙江财经大学

学位级别：硕士

云计算作为IT历史上最具变革性的技术之一,是产业数字化转型升级的基石,也是支撑数字经济这座金字塔的底座,极大程度提升社会生产力的同时,将一种全新的思维模式渗透到社会的各个方面,对经济的影响甚至超越了产业本身,在数字经济时代的... 详细信息

云计算作为IT历史上最具变革性的技术之一,是产业数字化转型升级的基石,也是支撑数字经济这座金字塔的底座,极大程度提升社会生产力的同时,将一种全新的思维模式渗透到社会的各个方面,对经济的影响甚至超越了产业本身,在数字经济时代的战略意义不亚于工业时代的电力。然而,各大云厂商提供高效快捷的跨境云计算服务一方面助力了跨国企业的全球化运营,另一方面这种技术所具备隐蔽性、复杂性等特点也造成了数据的自由流动,规避了常设机构认定的同时,为部分企业的利润转移创造了条件。当前国际税收的规则体系、各国的征管方式对跨境云计算这种数字经济的创新范式表现出明显的不适应:对于跨境云计算的收入界定仍未有定论,在云计算产业最发达的美国也存在着将其视为一种服务还是一种产品的争论,甚至各个州之间的判定都存在着明显区别。这种数字技术带来的传统常设机构认定失效、监管缺乏行之有效的手段、税基侵蚀日益突出等诸多挑战均亟待解决。由于跨境云计算等数字商业模式所具备的“去实体化”等特点,国际税收体系面临诸多的挑战,OECD组织受托提出“双支柱”方案,被视为“BEPS 2.0”计划,开创性地变革了多种税收要素,并设置最低税率遏制税收洼地避税行为,力求为国际税制改革提供统一的范本参考,以期重塑国际税收框架,适应数字经济时代的变化。“双支柱”方案实施后每年将为多国政府提供500亿到800亿美元的税收收入,有效打击跨国企业通过在避税洼地设立空壳公司进行利润转移的情况,确保此类大型集团就其利润缴纳至少15%的税款。我国作为BEPS包容性框架成员,同时也是数字经济的生产、消费与出口大国,已积极地参与到“双支柱”框架制定中,但这份重塑国际税收体系的方案具体应用在云计算业务的适用性上仍有待讨论。基于此,本文将重点探讨“双支柱”方案相关的税收体系重塑为云计算行业带来的影响,包括对云计算服务收入类型、收入来源地的最新规定,具体落实到国内应关注重复征税、合并报表跨辖区会计准则不一致、税务部门能力要求以及各地税收优惠政策未来有效性等方面。再通过案例分析的形式将理论落到实际中,分析具有代表性的外资云厂商在我国提供云计算服务存在的税务监管问题,以及其全球业务在“双支柱”方案落地后可能遭受的影响。最后从我国数字行业现状出发,寻找在国际税收规则面临重塑的背景下既能维护我国的税收利益又尽可能避免扭曲经济效率的改革方案,为我国云计算领域未来税收制度的完善、税收管理能力与水平的提升提出建议,主要包括:通过国内税制改革衔接“双支柱”方案,积极参与国际税收新框架构建以提高我国法律对云计算等数字经济形式的包容度;多方面加强税务机关征管能力,重视与各国、各地区、各部门间加强情报交换、反避税合作,加强复合型人才培养和重视提升区块链、税务云的数字科技征管效能建议,以更好地迎接数字时代的到来。

关键词：跨境云计算 “双支柱”方案数字经济常设机构

青蒿琥酯对小鼠肠缺血再灌注致肺损伤的影响及其与HO-1的关系

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中华麻醉学杂志 2022年第7期42卷 862-865页

作者：季拓陈萌叶立张宗泽何祥虎武汉大学中南医院麻醉科武汉430071

目的评价青蒿琥酯对小鼠肠缺血再灌注致肺损伤的影响及其与血红素加氧酶-1(HO-1)的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只,8~9周龄,体重18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)、青蒿琥酯组(A... 详细信息

目的评价青蒿琥酯对小鼠肠缺血再灌注致肺损伤的影响及其与血红素加氧酶-1(HO-1)的关系。方法SPF级健康雄性C57BL/6小鼠24只,8~9周龄,体重18~22 g,采用随机数字表法分为4组(n=6):假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(I/R组)、青蒿琥酯组(A组)和青蒿琥酯+HO-1抑制剂锡原卟啉Ⅸ组(AS组)。采用夹闭肠系膜上动脉45 min再灌注2 h的方法建立肠缺血再灌注损伤模型。A组于缺血前1 h经尾静脉注射青蒿琥酯40 mg/kg,AS组于缺血前12 h经尾静脉注射锡原卟啉Ⅸ7.5 mg/kg,缺血前1 h经尾静脉注射青蒿琥酯40 mg/kg。于再灌注2 h时麻醉处死动物,取肺组织,测定湿重/干重(W/D)比值,HE染色光镜下观察病理学结果并进行肺损伤评分,采用比色法测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性及MDA含量,采用荧光定量PCR法测定肺组织IL-6 mRNA的表达,采用TUNEL法检测细胞凋亡指数(AI)。结果与Sham组比较,I/R组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、MDA含量和AI升高,IL-6 mRNA表达上调(P<0.05);与I/R组比较,A组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、MDA含量和AI降低,IL-6 mRNA表达下调(P<0.05);与A组比较,AS组肺损伤评分、W/D比值、MPO活性、MDA含量和AI升高,IL-6 mRNA表达上调(P<0.05)。结论青蒿琥酯可减轻小鼠肠缺血再灌注致肺损伤,机制可能与激活HO-1有关。

关键词：青蒿琥酯血红素加氧酶-1 再灌注损伤肠急性肺损伤

过敏性哮喘患者外周血循环T_(FR)细胞的变化及临床意义

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中国免疫学杂志 2022年第9期38卷 1109-1113页

作者：季拓龚芳吕蓓丽申卫红白仲虎金坚江南大学生物工程学院无锡214122 江南大学附属医院无锡214122

目的:本研究旨在探讨过敏性哮喘患者外周血循环滤泡调节性T细胞(cT_(FR))比例变化及临床意义。方法:流式细胞仪检测25例过敏性哮喘患者及15例健康志愿者外周血cT_(FR)细胞的比例,流式细胞微球芯片捕获技术法检测血清细胞因子水平,并分析... 详细信息

目的:本研究旨在探讨过敏性哮喘患者外周血循环滤泡调节性T细胞(cT_(FR))比例变化及临床意义。方法:流式细胞仪检测25例过敏性哮喘患者及15例健康志愿者外周血cT_(FR)细胞的比例,流式细胞微球芯片捕获技术法检测血清细胞因子水平,并分析cT_(FR)细胞比例与过敏性哮喘临床实验室检测指标的相关性。结果:与健康对照组相比,过敏性哮喘患者外周血cT_(FR)细胞比例显著下降[(0.42±0.08)vs(0.91±0.12),P<0.01],血清IL-10表达水平显著降低(P<0.05)。cT_(FR)细胞比例与血清总IgE水平呈负相关(P<0.05),与第1秒用力呼气容积占预计值的百分比FEV1%呈正相关(P<0.05)。结论:外周血cT_(FR)和IL-10可能在过敏性哮喘免疫球蛋白E(IgE)异常增高的病理过程中起重要作用。

关键词：过敏性哮喘循环滤泡调节性T细胞(cT_(FR)) IL-10

重组聚合酶等温扩增-侧流层析试纸条检测技术在诊断病原微生物中的应用研究进展

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中华检验医学杂志 2023年第6期46卷 634-640页

作者：季拓高玉芝王文军徐承来高绪柱连云港市第二人民医院(连云港市肿瘤医院)中心实验室连云港222000

重组聚合酶等温扩增(RPA)技术是新开发的具有高灵敏度、高特异性的等温扩增技术,将RPA与侧流层析试纸条检测(LFS)技术相结合,可快速鉴别目的基因。迄今为止,RPA-LFS技术已广泛运用于医药、食品、植物学等领域。本文将对RPA-LFS技术在病... 详细信息

重组聚合酶等温扩增(RPA)技术是新开发的具有高灵敏度、高特异性的等温扩增技术,将RPA与侧流层析试纸条检测(LFS)技术相结合,可快速鉴别目的基因。迄今为止,RPA-LFS技术已广泛运用于医药、食品、植物学等领域。本文将对RPA-LFS技术在病原微生物中的诊断进行综述,为实现病原微生物的即时诊断提供参考。

关键词：临床实验室技术病原重组酶聚合酶等温扩增技术

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略论海外企业的管理

国际经济合作 1997年第2期 31-32页

作者：季拓

略论海外企业的管理季拓海外企业战略的制定与控制战略是企业为求得长期生存和不断发展而进行的总体性规划，它应包括企业所确定的一定历史时期的经营总目标和实现这一目标的基本途径。当今社会已进入“战略制胜”的时代，企业经营者必... 详细信息

略论海外企业的管理季拓海外企业战略的制定与控制战略是企业为求得长期生存和不断发展而进行的总体性规划，它应包括企业所确定的一定历史时期的经营总目标和实现这一目标的基本途径。当今社会已进入“战略制胜”的时代，企业经营者必须重视确立正确的战略观念，善于预测...

关键词：跨国公司海外企业经营管理

基于高分一号影像多尺度分割的土地平整信息快速提取与应用

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基于高分一号影像多尺度分割的土地平整信息快速提取与应用

作者：季拓甘肃农业大学

学位级别：硕士

近年来,卫星遥感影像技术飞速发展,遥感影像已成为水土保持领域重要的数据来源。水土保持工作中常采用目视解译为主的人工解译方法对影像进行信息提取,这种信息提取方法分类精度较高,能满足多种影像分类需求,但对分类者自身具有很高要求... 详细信息

近年来,卫星遥感影像技术飞速发展,遥感影像已成为水土保持领域重要的数据来源。水土保持工作中常采用目视解译为主的人工解译方法对影像进行信息提取,这种信息提取方法分类精度较高,能满足多种影像分类需求,但对分类者自身具有很高要求,无法进行高精度定位。随着高分辨率遥感影像数据增大,对影像快速准确分类要求增高,传统人工解译方法已无法满足遥感影像对高分类精度与效率的需求。本文以兰州新区高分一号遥感影像为例,利用eCognition软件面向对象分类方法对影像中已平整未利用地信息进行影像信息提取。采用多尺度分割法对影像进行多次分割,根据不同视图特征对不同土地利用类型进行定义,通过阈值分类法进行影像分类,达到对已平整未利用地高效精确提取的目的。经统计,此次影像分类已平整未利用地面积8589.44hm,其他土地面积71992.19hm。eCognition软件下对兰州新区已平整未利用地的提取精度评价中生产精度（Producer）达到0.871,用户精度达到0.937,总体精度达到0.9505,Kappa系数达到0.870。精度评价结果表明此次影像分类结果较好,影像分类稳定性好。与传统人工解译结果相比较,影像自动分类边界划分更为精确,避免了人工解译过程中分类者自身问题导致分类边界错位的问题。综上所述,eCognition软件下对兰州新区已平整未利用地的提取精度高,能满足影像分类提取中对影像分类精度的要求。多次融合再分割方式使影像分类更具有针对性,对已平整未利用地信息的提取更为准确。影像解译结果与传统人工解译相似度较高,且自动解译操作较简单,解译效率更高,能满足影像信息提取高分类精度与效率的需求。

关键词： eCognition软件高分辨率遥感影像未利用地信息多尺度分割