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日粮锰水平对生长獭兔生产性能和生化指标的影响

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吉林农业大学学报 2004年第3期26卷 313-316页

作者：孟轲音姚忠军段铭高宏伟长春市肉牛开发有限责任公司长春130117 中国人民解放军军需大学长春130062

试验选用解放军军需大学吉戎-Ⅱ獭兔原种场的50日龄獭兔72只为研究对象,在玉米—豆粕型日粮的基础上,分别添加0,5,15,25,35,45mg kg水平的锰。观察三期(20,40,60d)獭兔的生产性能指标和生化指标。结果表明:日粮锰水平对獭兔日增重、料... 详细信息

试验选用解放军军需大学吉戎-Ⅱ獭兔原种场的50日龄獭兔72只为研究对象,在玉米—豆粕型日粮的基础上,分别添加0,5,15,25,35,45mg kg水平的锰。观察三期(20,40,60d)獭兔的生产性能指标和生化指标。结果表明:日粮锰水平对獭兔日增重、料肉比影响显著(P0.05);日粮锰水平对獭兔血清Mn SOD活性影响不显著(P>0.05),对心组织Mn-SOD活性影响显著(P<0.01),且随锰水平的提高活性增强。

关键词：獭兔锰生产性能生化指标

鹅源新城疫病毒F基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立

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中国兽医学报 2008年第12期28卷 1383-1386页

作者：刘新鑫孟轲音尹仁福丁壮吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

参照GenBank公布的鹅源新城疫病毒NA-1株F基因(DQ659677)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增F基因全长,将其克隆到pET-22b(+)载体中,构建了原核表达载体pET-22b(+)-F,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化了重组蛋白,Western-blot证明该... 详细信息

参照GenBank公布的鹅源新城疫病毒NA-1株F基因(DQ659677)的核苷酸序列设计1对引物,通过PCR扩增F基因全长,将其克隆到pET-22b(+)载体中,构建了原核表达载体pET-22b(+)-F,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达并纯化了重组蛋白,Western-blot证明该重组蛋白具有免疫原性。利用重组蛋白为包被抗原,通过方阵试验确定了包被抗原的最佳包被量为0.21μg/孔,建立了检测鹅源新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法。

关键词：鹅源新城疫病毒 F基因原核表达间接ELISA

布鲁氏菌RPA-SYBR Green Ⅰ快速检测方法的建立与应用

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黑龙江畜牧兽医 2022年第3期 86-89,133-135页

作者：张珊珊李楠郝镯孟轲音刘军军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所/吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室长春130122

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的布鲁氏菌检测方法,试验将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)方法与SYBR GreenⅠ结合,根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1对特异性引物和1条标有biotin、dSpacer、C... 详细信息

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的布鲁氏菌检测方法,试验将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)方法与SYBR GreenⅠ结合,根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1对特异性引物和1条标有biotin、dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,建立一种可以检测布鲁氏菌的RPA-SYBR-GreenⅠ方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,并分析敏感性和特异性,并用该方法和ELISA方法对临床样品进行检测。结果表明:试验成功构建出布鲁氏菌RPA-SYBR-GreenⅠ检测方法。该方法的最佳反应条件为手掌中孵育12 min,闭合手掌即可启动RPA扩增;引物与探针的最佳比例为2.5∶1;最低检测限为1×10^(1)cfu/mL,能够特异地检测出布鲁氏菌;对临床样品的检测结果与ELISA方法一致。说明试验建立的布鲁氏菌RPA-SYBR-GreenⅠ检测方法特异性强,敏感性高,检测速度快,操作简单。

关键词：布鲁氏菌 SYBR-GreenⅠ bcsp31基因重组酶聚合酶扩增敏感性特异性

布鲁氏菌RPA-LFD快速检测方法的建立与应用

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中国兽医科学 2021年第10期51卷 1215-1220页

作者：张珊珊李楠郝镯孟轲音刘军军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断布病的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与胶体金侧向流试纸条技术(lateral flow dipstick,LFD)相结合。根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1套标有生物素... 详细信息

为建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断布病的方法,将重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)与胶体金侧向流试纸条技术(lateral flow dipstick,LFD)相结合。根据布鲁氏菌bcsp31基因序列保守区设计1套标有生物素Biotin的特异性引物和1条标记dSpacer、C3 Spacer的特异性探针,通过对反应条件、体系的优化,以及对敏感性、特异性以及模拟样本的分析,最后进行临床应用,建立一种可以检测布鲁氏菌的RPA-LFD方法。结果显示,成功建立了布鲁氏菌RPA-LFD检测方法,最佳反应条件为闭合手掌中孵育12 min;引物与探针的最佳比为3.5∶1;RPA-LFD方法的最低检测限为5.89 CFU/m L,能够特异地检测出布鲁氏菌,检测大肠杆菌等其他细菌结果均为阴性;用RPA-LFD方法检测模拟样本和临床样品的结果与ELISA方法一致。上述结果表明,本研究建立的布鲁氏菌RPA-LFD检测方法特异性强、灵敏性高、操作简单,可广泛应用于临床检测。

关键词：布鲁氏菌横向流动试纸条 bcsp31基因重组酶聚合酶扩增模拟样本

鸭疫里氏杆菌外膜微孔蛋白基因的克隆和序列分析及PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2013年第7期43卷 723-727页

作者：么乃全王全凯姜秀云徐凤宇于丹孟轲音高云航吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 长春市动物疫病预防控制中心吉林长春130061 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

根据GenBank中的鸭疫里氏杆菌(RA)外膜磷酸盐选择性微孔蛋白(Porin)基因序列设计特异性引物,以血清1、2、6、10、11、13、14和17型RA菌株的基因组DNA为模板均扩增出大小为1 212bp的目的片段,序列比对显示该基因在8种血清型菌株间同源性... 详细信息

根据GenBank中的鸭疫里氏杆菌(RA)外膜磷酸盐选择性微孔蛋白(Porin)基因序列设计特异性引物,以血清1、2、6、10、11、13、14和17型RA菌株的基因组DNA为模板均扩增出大小为1 212bp的目的片段,序列比对显示该基因在8种血清型菌株间同源性均大于99.6%。针对保守性最高的357bp片段设计特异性引物,建立了PCR检测方法,对鸭致病性大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、鸭巴氏杆菌及鸭肝炎病毒均未扩增出目的条带,表明该方法具有较高的特异性;敏感性试验显示最小检出量为73.96pg的基因组。应用建立的PCR方法对分离自吉林、河北及北京的8个菌株进行扩增,均在357bp处扩增出清晰的目的条带,与细菌分离鉴定的符合率达100%。本研究为RA的鉴定提供了新方法,为RA外膜微孔蛋白的后续研究提供了理论依据。

关键词：鸭疫里氏杆菌微孔蛋白聚合酶链式反应检测方法

类朊蛋白Shadoo基因在Neuro-2α中的表达及细胞定位分析

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中国兽医学报 2013年第8期33卷 1223-1226页

作者：曹德康王雅静万家余李忠义孟轲音钱军武装警察部队后勤部疾病预防控制中心北京102613 武警总医院北京100700 军事医学科学院军事兽医研究所吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室吉林长春130122

为构建鼠类朊蛋白Shadoo基因重组真核表达质粒,并分析类朊蛋白Shadoo在鼠神经瘤细胞(Neuro-2α)内表达及定位。采用PCR方法把Flag标签序列插入到Shadoo阅读框122与123氨基酸位点之间,构建Shadoo-Flag融合基因片段,把Shadoo-Flag片段插... 详细信息

为构建鼠类朊蛋白Shadoo基因重组真核表达质粒,并分析类朊蛋白Shadoo在鼠神经瘤细胞(Neuro-2α)内表达及定位。采用PCR方法把Flag标签序列插入到Shadoo阅读框122与123氨基酸位点之间,构建Shadoo-Flag融合基因片段,把Shadoo-Flag片段插入到真核表达质粒pcDNA3.1,构建重组真核表达pcDNA3.1-Shadoo-Flag,质粒酶切、测序鉴定正确后,脂质体法转入Neuro-2α细胞,检测Shadoo基因表达及表达部位。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1-Shadoo-Flag转入Neuro-2α细胞,能够正确表达出相对分子质量为12 000的Shadoo蛋白,并定位于细胞膜。

关键词：朊蛋白 Shadoo基因鼠神经癌细胞株

RNAi靶向NP、L基因抑制鹅源副黏病毒在鸡胚成纤维细胞中的复制

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中国兽医学报 2009年第6期29卷 705-709页

作者：刘美母连志孟轲音丁壮丛彦龙尹仁福李志杰吉林大学畜牧兽医学院吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130062

构建了针对鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株NP及L基因的RNA干扰质粒;将转染质粒36 h后的鸡胚成纤维细胞接种病毒,通过病毒滴度、实时荧光定量RT-PCR、细胞病变以及间接免疫荧光结果分析,表明均能抑制GPMV在CEF中复制和增殖。本试验对研究GPMV... 详细信息

构建了针对鹅源副黏病毒(GPMV)NA-1株NP及L基因的RNA干扰质粒;将转染质粒36 h后的鸡胚成纤维细胞接种病毒,通过病毒滴度、实时荧光定量RT-PCR、细胞病变以及间接免疫荧光结果分析,表明均能抑制GPMV在CEF中复制和增殖。本试验对研究GPMV复制和抗病毒治疗提供了技术基础。

关键词：鹅源副黏病毒 RNA干扰鸡胚成纤维细胞抑制

兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因的克隆及原核表达

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中国兽医杂志 2014年第6期50卷 15-17,21页

作者：裴志花高云航马红霞王开孟轲音吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 军事医学科学院军事兽医研究所吉林长春130122

本试验旨在克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因,并对其表达产物的反应原性进行研究。以兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株总DNA为模板,进行外膜蛋白基因OMPH1的PCR扩增,得到了1条大小为1 041 bp的基因片段,克隆至pMD-18T中。测序... 详细信息

本试验旨在克隆和表达兔多杀性巴氏杆菌外膜蛋白OMPH1基因,并对其表达产物的反应原性进行研究。以兔多杀性巴氏杆菌C51-2-499株总DNA为模板,进行外膜蛋白基因OMPH1的PCR扩增,得到了1条大小为1 041 bp的基因片段,克隆至pMD-18T中。测序分析证明,它与国内外报道的多杀性巴氏杆菌OMPH1基因的核苷酸序列相似性达99%以上。将该基因克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,经酶切和测序分析表明,重组表达载体pET-30a(+)-OMPH1构建成功。将此重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导。SDS-PAGE检测结果证实,该基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式得到表达,表达产物的分子质量约47KD,与预期的结果一致。Western-blot分析表明,OMPH1重组表达蛋白具有反应原性,可被兔多杀性巴士杆菌阳性血清识别,为兔多杀性巴氏杆菌基因重组疫苗及新型诊断试剂的研究奠定了基础。

关键词：兔多杀性巴氏杆菌 OMPH1基因克隆原核表达

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肉牛肌内脂肪沉积相关基因的研究进展

黑龙江畜牧兽医 2013年第11期 30-32页

作者：曲桂娟祁宏伟孟轲音董晓庆裴志花刘树明秦贵信吉林农业大学动物科技学院长春130118 吉林省农业科学院长春130124 军事兽医研究所长春130122

肌内脂肪含量是影响牛肉品质的一个重要因素,它直接影响肉的嫩度和风味。文章对肉牛肌内脂肪沉积相关功能基因作了简要综述,为深入开展通过提高肌内脂肪含量改善肉的品质和这些功能基因的研究提供参考。

关键词：肉牛肌内脂肪基因