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大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库的构建

疾病监测 2024年第4期39卷 466-471页

作者：范佳铭龙丽瑾刘文韬翟康乐宫雅楠胡源孟凡亮魏销玥郭亚慧赵雅坤王婉婷张建中闫笑梅中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室北京102206 中国医科大学辽宁沈阳110122 北京大学第三医院消化科北京100191 巴彦淖尔市疾病预防控制中心内蒙古巴彦淖尔015000

目的本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库,用于传染病诊断用抗体筛选。方法选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡,每个品种各5只,共30只。从法氏囊中提取总RNA,通... 详细信息

目的本研究拟构建大容量天然鸡源噬菌体单链抗体库,用于传染病诊断用抗体筛选。方法选取未经免疫的5周龄白来航鸡包括普通级别和无特定病原体级别、罗曼鸡、洛岛红鸡、洛岛白鸡和贵妃鸡,每个品种各5只,共30只。从法氏囊中提取总RNA,通过反转录合成cDNA。利用聚合酶链式反应技术扩增全套编码抗体可变区的基因序列。通过重叠延伸反应,将重链可变区和轻链可变区基因连接成为单链抗体。将经过回收并酶切纯化的单链抗体克隆到噬菌体载体上,电转化大肠埃希菌TG1感受态细胞。结果成功构建库容量达1010的鸡源天然单链抗体库细胞库,噬菌体展示库滴度达1012菌落形成单位/mL以上。随机挑选165个单克隆进行菌落PCR鉴定,转化阳性插入率为96.97%(160/165);随机选取72株阳性克隆进行测序,抗体互补决定区3碱基序列及长度存在显著差异,表明构建的抗体库多样性良好。结论本研究成功构建了大容量鸡源天然单链抗体库,为后续从中筛选出具有应用价值的特异性单链抗体奠定了基础。

关键词：鸡源天然抗体库单链抗体噬菌体展示技术

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微小RNA-29a对心肌细胞缺血再灌注损伤作用及机制

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中国临床药理学杂志 2023年第17期39卷 2477-2481页

作者：孙小林孟凡棣贾政耿玥韦杰昆明市延安医院心脏大血管外科重症监护病房云南昆明650051

目的探讨微小核RNA-29a(miR-29a)在缺血再灌注引起的心肌细胞损伤中的功能和分子机制。方法体外培养H9c2大鼠心肌细胞,并将其分为正常对照组(正常培养的H9c2细胞)、缺氧再灌注(H/R)组(缺氧处理4 h,继而复氧4 h)、H/R+miR-29a inhibito... 详细信息

目的探讨微小核RNA-29a(miR-29a)在缺血再灌注引起的心肌细胞损伤中的功能和分子机制。方法体外培养H9c2大鼠心肌细胞,并将其分为正常对照组(正常培养的H9c2细胞)、缺氧再灌注(H/R)组(缺氧处理4 h,继而复氧4 h)、H/R+miR-29a inhibitor组(在H/R组基础上转染miR-29a抑制剂)、H/R+miR-29a inhibitor+LY294002组(在H/R+miR-29a inhibitor组基础上加用2μg·mL-1抑制剂LY294002)。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-29a和磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)的表达水平;使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)试剂盒检测细胞活力;通过流式细胞术和原位末端标记(TUNEL)实验检测细胞凋亡;使用试剂盒检测乳酸盐脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)活性;通过双荧光素酶报告实验验证miR-29a和PI3K的靶向关系。结果对照组、H/R组和H/R+miR-29a inhibitor组细胞miR-29a表达水平分别为1.05±0.02、4.13±0.15、1.56±0.21,细胞活力分别为(100.00±0.08)%、(50.02±0.13)%和(83.65±0.04)%,CK含量分别为(71.46±0.08)、(140.22±0.14)和(98.86±0.25)U·L-1,NC组上述指标和H/R+miR-29a inhibitor组与H/R组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。H/R+miR-29a inhibitor组中磷酸化p-PI3K蛋白(0.73±0.09)和磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)蛋白表达(0.82±0.04)显著高于H/R组中p-PI3K蛋白(0.29±0.09)和p-AKT蛋白表达(0.39±0.24),差异均有统计学意义(均P<0.01),在加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002后p-PI3K和p-AKT的表达水平下调。结论 miR-29a可促进心肌细胞凋亡,敲降miR-29a可以保护心肌细胞免受H/R损伤,miR-29a对H/R心肌细胞的保护作用是通过激活PI3K/AKT通路实现的。

关键词：微小RNA-29a 磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶B信号通路心肌缺血再灌注损伤

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吊扇扇叶清洗装置的研究现状及发展趋势

黑龙江科学 2023年第16期14卷 137-140页

作者：李红玉孟凡召张鑫玥山东华宇工学院机械工程学院山东德州253000

吊扇是常见的纳凉设备,具有广泛的应用。但随着使用年限的增加,会积累大量灰尘,污染环境。吊扇因安装在天花板上清洗较为不便,为解决清洗困难的问题,设计了清洗装置。对国内外各类吊扇扇叶清洗装置的特点、类型及研究现状进行综述,展望... 详细信息

吊扇是常见的纳凉设备,具有广泛的应用。但随着使用年限的增加,会积累大量灰尘,污染环境。吊扇因安装在天花板上清洗较为不便,为解决清洗困难的问题,设计了清洗装置。对国内外各类吊扇扇叶清洗装置的特点、类型及研究现状进行综述,展望了其发展趋势。应着重提高清洗装置的自动化、智能化,优化装置结构,进行轻量化设计,提高其适应能力,实现产业化发展。

关键词：吊扇清洗国内外研究现状发展趋势

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社区卫生服务机构中医药人才需求意愿与分析

环球中医药 2023年第7期16卷 1397-1401页

作者：薛晓娟解天孟凡英张宸玥王益民天津中医药大学中医药研究院 301617

目的掌握社区卫生服务机构对中医药专业人员以及他们的工作能力、医学素养和专业课程的需求,为中医院校人才培养定位和课程改革提供参考依据。方法对28家社区卫生服务机构各选取3-4名管理人员进行问卷调查。调查内容主要包括对中医药专... 详细信息

目的掌握社区卫生服务机构对中医药专业人员以及他们的工作能力、医学素养和专业课程的需求,为中医院校人才培养定位和课程改革提供参考依据。方法对28家社区卫生服务机构各选取3-4名管理人员进行问卷调查。调查内容主要包括对中医药专业人员需求、能力与素养、合作培养、培养措施的意愿,以及对中医课程设置的评价等。结果调查共发放问卷91份,回收有效问卷91份,回收率100%。调研结果显示,接受调研者有87.91%表示未来三年有招聘中医药相关人员意愿,专业主要为中医学和针灸推拿骨伤方向,学历层次主要为硕士研究生和本科生;94.51%最看重的能力是专业能力,87.91%最看重的素质是团队意识;86.2%有合作培养人才意愿或可以考虑合作培养人才,培养模式以长期实习排在第1位;人才培养措施认同率最高的是突出预防、康复、老年及社区等医学课程设置,为87.91%;认为所列中医基础课和核心课“很重要”排名第1位的分别是中医诊断学和推拿手法学,两门课程设置的合理性均有较高的认可度。结论社区卫生服务机构对中医药人才有实际需求,社区中医药人才的培养应更加注重全科专业能力、团队意识、临床实用和有效技能。

关键词：社区卫生服务中医药人才现状调查

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金黄色葡萄球菌类肠毒素W的超抗原活性位点预测与克隆表达

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中华流行病学杂志 2023年第4期44卷 629-635页

作者：杨玉花库鑫宫雅楠孟凡亮卜东波郭亚慧魏销玥龙丽瑾范佳铭张茂俊张建中闫笑梅中国疾病预防控制中心传染病预防控制所感染性疾病诊治协同创新中心/传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国科学院计算技术研究所智能信息处理重点实验室北京100190 中国科学院大学北京100049 中科大数据研究院郑州450046 内蒙古科技大学包头医学院包头014040 中国医科大学沈阳110122

目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点,并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测,借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型... 详细信息

目的预测金黄色葡萄球菌类肠毒素W(SElW)与T细胞受体(TCR)的对接和超抗原活性位点,并对SElW进行克隆表达和纯化。方法利用AlphaFold对SElW蛋白单体进行三维结构预测,借助SAVES在线服务器使用ERRAT、拉氏图和Verify_3D等软件对蛋白模型进行评估。用ZDOCK服务器模拟SElW与TCR的对接构象,并对SElW与其他肠毒素的氨基酸序列进行比对。设计引物扩增selw基因,将该片段重组于pMD18-T载体中并进行测序;经限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ双酶切后将目的片段重组于表达质粒pET-28a(+)中,重组质粒鉴定后用IPTG诱导表达;用亲和层析法对表达于上清中的SElW蛋白进行纯化,用BCA法对蛋白进行定量。结果三维结构预测结果显示,SElW蛋白由氨基末端和羧基末端两个结构域组成,其中氨基末端结构域由3个α-螺旋和6个β-片层组成,羧基末端结构域由2个α-螺旋和7个反向平行的β-片层组成。SElW蛋白模型的整体质量因素得分为98.08,其中93.24%的氨基酸Verify_3D得分≥0.2,且无氨基酸位于不允许区。模拟对接预测选择评分最高的对接构象(评分值为1521.328)作为分析对象,采用PyMOL软件分析SElW与TCR之间形成的19个氢键。结合序列比对和既往研究结果,本研究预测发现了SElW蛋白的5个重要超抗原活性位点,分别是Y18、N19、W55、C88和C98。通过克隆表达和蛋白纯化,获得了高纯度的可溶性重组蛋白SElW。结论研究预测了SElW蛋白中5个可能的超抗原活性位点,成功构建并表达了SElW蛋白,为进一步探索SElW免疫识别机制奠定了基础。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素分子对接超抗原活性位点克隆表达

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毛黄堇中的1个新生物碱

中国中药杂志 2021年第19期46卷 5020-5026页

作者：龙选宁韩凤韦琳孟凡成屈珅玥陈敏西南大学药学院重庆400715 重庆市药物种植研究所重庆408435

运用正、反相硅胶色谱柱、Sephadex LH-20、MCI及半制备高效液相色谱对毛黄堇乙酸乙酯部位进行化学成分分离和纯化,通过波谱学分析方法,结合文献数据,从毛黄堇乙酸乙酯部位鉴定了18个单体化合物,包括17个已知生物碱和1个萜类,其中化合物... 详细信息

运用正、反相硅胶色谱柱、Sephadex LH-20、MCI及半制备高效液相色谱对毛黄堇乙酸乙酯部位进行化学成分分离和纯化,通过波谱学分析方法,结合文献数据,从毛黄堇乙酸乙酯部位鉴定了18个单体化合物,包括17个已知生物碱和1个萜类,其中化合物1(tomentellaine A)为生物碱类新化合物,化合物2~5、7~14、16~18为首次从该植物中分离得到。

关键词：毛黄堇生物碱化学成分

黏液乳头型室管膜瘤WHO组织学分级重新评估及其HOTAIR表达的诊断价值

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临床与实验病理学杂志 2023年第1期39卷 74-78页

作者：徐月梅牛丰南李志文黎琪后梦玥陈丹妮樊祥山孟凡青陈洁宇南京大学医学院附属鼓楼医院病理科南京210008

目的重新评估黏液乳头型室管膜瘤(myxopapillary ependymoma,MPE)的WHO组织学分级及探索HOTAIR表达的诊断价值。方法收集2002~2021年南京大学医学院附属鼓楼医院诊治的19例MPE,分析其临床病理学特征及影像学表现,同时行RNA scope检测其... 详细信息

目的重新评估黏液乳头型室管膜瘤(myxopapillary ependymoma,MPE)的WHO组织学分级及探索HOTAIR表达的诊断价值。方法收集2002~2021年南京大学医学院附属鼓楼医院诊治的19例MPE,分析其临床病理学特征及影像学表现,同时行RNA scope检测其长链非编码RNA HOTAIR的表达。结果19例MPE中男性12例,女性7例。年龄15~52岁,平均年龄31岁。MRI检查均显示长T1长T2信号,增强后稍均匀强化。镜下经典的组织学表现为形态较一致的肿瘤细胞围绕血管黏液样间质呈假乳头状排列,细胞下方缺乏基膜,可见细胞外黏液。部分病例核分裂象增多,所有病例均未见明显坏死及微血管增生。免疫表型:肿瘤细胞弥漫表达GFAP(15/16)及S-100(14/16),部分病例核旁点状表达(2/16)或弱表达(3/16)EMA。Ki-67增殖指数低,个别病例高达20%。5例行RNA原位杂交(in situ hybridization,ISH)检测,均表达长链非编码RNA HOTAIR。13例获得随访,1例于术后1年因子宫颈癌去世;1例于术后4年复发;其余11例均无复发或转移。结论MPE的组织学特征及生物学行为符合WHO(2021)中枢神经系统肿瘤分类Ⅱ级的诊断标准。HOTAIR的表达对MPE有一定的诊断价值,必要时可行ISH检测以辅助诊断。

关键词：黏液乳头型室管膜瘤 WHO分级长链非编码RNA HOTAIR 原位杂交

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基于大变异遗传算法的直升机甲板组合优化

船舶标准化工程师 2016年第1期49卷 16-20页

作者：王天玥孟凡磊大连理工大学船舶工程学院辽宁大连116023 海油发展安全环保分公司天津300456

建立了基于FORTRAN与ANSYS交互的结构优化模式,并通过大变异操作,避免了遗传算法自身出现"早熟"的现象。在此基础上,以FORTRAN编写的大变异遗传算法程序作为优化平台,将ANSYS结构重分析得到的数据作为约束条件与优化平台交互,对某渔船... 详细信息

建立了基于FORTRAN与ANSYS交互的结构优化模式,并通过大变异操作,避免了遗传算法自身出现"早熟"的现象。在此基础上,以FORTRAN编写的大变异遗传算法程序作为优化平台,将ANSYS结构重分析得到的数据作为约束条件与优化平台交互,对某渔船的直升机甲板结构进行了静力和频率的组合优化,降低了甲板结构的重量。

关键词：直升机甲板结构优化大变异遗传算法离散变量

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我国食品来源金黄色葡萄球菌种群结构分析

中华流行病学杂志 2023年第6期44卷 982-989页

作者：郭亚慧贺子龙姬庆龙周海健孟凡亮胡晓丰魏销玥马俊才杨玉花赵薇龙丽瑾王新范佳铭遇晓杰张建中华德闫笑梅王海滨内蒙古科技大学包头医学院包头014040 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所/传染病预防控制国家重点实验室/感染性疾病诊治协同创新中心北京102206 北京大数据精准医学高级创新中心/北京航空航天大学医学与工程跨学科创新研究所/北京航空航天大学北京100191 中国检验检疫科学研究院北京100020 解放军疾病预防控制中心北京100032 中国科学院微生物学研究所微生物资源与大数据中心北京100101 吉林省疾病预防控制中心微生物检验所长春130051 西北农林科技大学食品科学与工程学院西安712100 海南省疾病预防控制中心海口570203 北京市朝阳区疾病预防控制中心北京100020

目的了解我国食源性金黄色葡萄球菌(金葡菌)的种群结构。方法通过全基因组测序方法对2006-2020年我国16个省份收集的763株食源性金葡菌进行多位点序列分型、葡萄球菌蛋白A编码基因(spa)和葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)分型,使用BioNu... 详细信息

目的了解我国食源性金黄色葡萄球菌(金葡菌)的种群结构。方法通过全基因组测序方法对2006-2020年我国16个省份收集的763株食源性金葡菌进行多位点序列分型、葡萄球菌蛋白A编码基因(spa)和葡萄球菌染色体mec基因盒(SCCmec)分型,使用BioNumerics 7.5软件创建基于ST类型的最小生成树。国外进口食品分离到的金葡菌31株被纳入基因组系统发育树的构建。结果763株金葡菌共鉴定出90个ST型和160个spa型别,其中20种为新ST型别。72个(72/90,80.0%)ST型属于22个克隆群,其中主要型别为CC7、CC1、CC5、CC398、CC188、CC59、CC6、CC88、CC15和CC25,占82.44%(629/763)。其中优势克隆群中ST型和spa型别随着时间的变化呈多态性变化。耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的阳性率为7.60%,共鉴定出7种SCCmec型别,以ST59-t437-Ⅳa(17.24%,10/58)、ST239-t030-Ⅲ(12.07%,7/58)、ST59-t437-Ⅴb(8.62%,5/58)、ST338-t437-Ⅴb(6.90%,4/58)和ST338-t441-Ⅴb(6.90%,4/58)为主。本研究分离株在系统发育树上被分为2个种群分支,命名为Clade1和Clade2,相同克隆群、ST型和spa型别的菌株呈聚集分布。Clade1全部为CC7甲氧西林敏感菌株,Clade2中包括21种克隆群和所有MRSA菌株,MRSA菌株按照SCCmec和ST型呈聚集分布。CC398、CC7、CC30、CC12和CC188中的国外分离株与我国分离株进化关系较远。结论本研究中食源性菌株主要优势克隆群型别为CC7、CC1、CC5、CC398、CC188、CC59、CC6、CC88、CC15和CC25,与既往报道的我国医院、社区感染和食物中毒的克隆群存在重叠现象,这提示食品作为病原体社区传播和食物中毒的载体,需高度关注。

关键词：金黄色葡萄球菌食源性全基因组测序分子分型