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微囊化转mIFN-γ基因CHO细胞皮下移植促进荷瘤小鼠T_H1T_H2的漂移

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中华微生物学和免疫学杂志 2003年第3期23卷 195-198页

作者：潘月龙郑树孝作祥姚航平浙江大学肿瘤研究所浙江大学免疫学研究所杭州310009

目的　通过观察微囊化转mIFN γ基因CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IFN γ对TH1 TH2平衡的调节作用 ,同时验证微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIFN γ基因转染到正常细胞CH... 详细信息

目的　通过观察微囊化转mIFN γ基因CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IFN γ对TH1 TH2平衡的调节作用 ,同时验证微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIFN γ基因转染到正常细胞CHO ,然后进行微囊化 ,移植到荷瘤小鼠的皮下 ,2周后 ,测定小鼠血清TH1和TH2类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 12、IL 4、IL 10的水平 ,并与对照组相比较。同时测量肿瘤的平均直径 ,以观察肿瘤的生长速度 ,并观察荷瘤小鼠的生存期。结果　经微囊化转mIFN γ基因CHO细胞皮下移植干预治疗后 ,小鼠血清TH1类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 12水平明显升高 ,而TH2类细胞因子IL 4、IL 10变化不明显 ;小鼠肿瘤的生长速度明显减慢 ,生存期明显延长。结论　外源性IFN γ促进荷瘤小鼠TH1细胞的分化 ,使TH1 TH2向着TH1方向漂移 ;微囊化基因工程细胞的移植 ,有望替代基因工程药物 ,成为治疗恶性肿瘤的又一新平台。

关键词：微囊 IFN-γ TH1/TH2 肿瘤基因工程免疫学

微囊化转mIL-12基因CHO细胞皮下移植及联合5-FU对荷瘤小鼠的治疗作用

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中华医学杂志 2003年第1期83卷 51-54页

作者：潘月龙郑树孝作祥曹江姚航平浙江大学肿瘤研究所杭州310009 浙江大学免疫学研究所杭州310009

目的　观察微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL 12细胞皮下移植及联合 5 FU对荷瘤小鼠的治疗作用。方法　将微囊化的CHO/pcDNA3 1/mIL 12细胞移植到荷瘤小鼠的皮下 ,观察肿瘤的生长速度、荷瘤小鼠的生存期 ,2 0d后 ,检测小鼠血清Th1和Th2类细胞因... 详细信息

目的　观察微囊化CHO/pcDNA3.1/mIL 12细胞皮下移植及联合 5 FU对荷瘤小鼠的治疗作用。方法　将微囊化的CHO/pcDNA3 1/mIL 12细胞移植到荷瘤小鼠的皮下 ,观察肿瘤的生长速度、荷瘤小鼠的生存期 ,2 0d后 ,检测小鼠血清Th1和Th2类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 12和IL 4、IL 10的水平及NK细胞和CTL细胞的活性。结果　经微囊化CHO/pcDNA3 1/mIL 12细胞皮下移植干预治疗后 ,小鼠血清Th1细胞因子水平明显升高 ,NK细胞和CTL细胞的活性明显增强 ,而Th2类细胞因子则明显降低 ;小鼠肿瘤的生长速度明显减慢 ,生存期明显延长 ;同时可部分改善化疗引起的免疫抑制作用。结论　微囊化的CHO/pcDNA3 1/mIL 12细胞皮下移植可以明显改善荷瘤小鼠的细胞免疫功能 ,部分减轻化疗引起的免疫抑制作用 ,对减慢肿瘤的生长速度和延长荷瘤小鼠的生存期均有明显的效果。

关键词：微囊 mIL-2基因 CHO细胞皮下移植 5-FU 荷瘤小鼠治疗

IL-18基因转染人乳腺癌细胞系的建立及其表达的研究

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实用肿瘤杂志 2004年第1期19卷 46-47页

作者：韩明勇郑树孝作祥浙江大学肿瘤研究所浙江杭州310009

目的　建立转人白细胞介素 -18(h IL -18)基因的乳腺癌细胞株 ,并研究 h IL -18的表达情况。方法　将携带人白细胞介素 -18的质粒 pc DNA3 .1-h IL -18转导入人乳腺癌细胞系 Bcap3 7中 ,通过药物 G-418进行筛选 ,利用 RT-PCR和 EL ISA... 详细信息

目的　建立转人白细胞介素 -18(h IL -18)基因的乳腺癌细胞株 ,并研究 h IL -18的表达情况。方法　将携带人白细胞介素 -18的质粒 pc DNA3 .1-h IL -18转导入人乳腺癌细胞系 Bcap3 7中 ,通过药物 G-418进行筛选 ,利用 RT-PCR和 EL ISA法对白细胞介素 -18(IL-18)的表达进行检测。结果　 IL-18基因成功地转导入 Bcap3 7细胞中并能顺利表达。RT-PCR电泳结果显示 IL -18基因在 m RNA水平有表达 ;EL ISA结果显示 ,10 6个转导细胞在 2 4小时内分泌 IL-18的含量为 (186.3± 15.7) pg;空载体转染的细胞未检测到 IL-18。结论　人 IL-18基因成功地整合到乳腺癌细胞系 Bcap3 7细胞基因组中。

关键词：乳腺癌白细胞介素-18 基因转染肿瘤疫苗

肝癌组织中诱导型一氧化氮合酶的表达及其与血管形成、bcl-2和细胞增生的关系

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中华病理学杂志 2003年第2期32卷 153-154页

作者：彭佳萍张苏展孝作祥郑树浙江大学肿瘤研究所杭州310009 浙江大学附属第二医院杭州310009

一氧化氮合酶(NOS)是NO合成的关键限速酶，它的生物学活性直接决定着NO的合成量。NOS有两个异构体，即结构型NOS(cNOS)和诱导型NOS(iNOS)。通常iNOS与肿瘤的免疫相关，且产生NO的能力较cNOS高出100-1000倍。NOS活性的增高与肿瘤血管形... 详细信息

一氧化氮合酶(NOS)是NO合成的关键限速酶，它的生物学活性直接决定着NO的合成量。NOS有两个异构体，即结构型NOS(cNOS)和诱导型NOS(iNOS)。通常iNOS与肿瘤的免疫相关，且产生NO的能力较cNOS高出100-1000倍。NOS活性的增高与肿瘤血管形成关系密切~[1]。另有研究显示，iNOS产生的NO可通过bcl-2介导途径抑制细胞凋亡并有利于生长停止的肿瘤细胞的存活~[2]。我们采用免疫组织化学法检测肝细胞性肝癌中iNOS、血管内皮生长因子(VEGF)、CD34标记的微血管密度(MVD)及凋亡相关蛋白bcl-2和p53蛋白的表达。同时应用流式细胞仪分析技术检测了iNOS和VEGF表达对肝癌细胞增殖周期的影响。探讨肝癌中iNOS的表达及其与血管形成、bcl-2表达及细胞增殖周期的关系。

关键词：肝癌组织诱导型一氧化氮合酶表达血管形成 bcl-2 细胞增生

微囊化转mIL-12基因细胞介导荷瘤小鼠T_(H1)T_(H2)的漂移

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免疫学杂志 2002年第6期18卷 471-473,478页

作者：潘月龙郑树孝作祥姚航平曹江浙江大学肿瘤研究所浙江杭州310009 浙江大学免疫学研究所浙江杭州310031

目的　观察微囊化mIL 1 2基因修饰的 (中国仓鼠卵巢 )CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2 类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IL 1 2对TH1 TH2 平衡的调节作用 ,同时探讨微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIL 1 ... 详细信息

目的　观察微囊化mIL 1 2基因修饰的 (中国仓鼠卵巢 )CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2 类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IL 1 2对TH1 TH2 平衡的调节作用 ,同时探讨微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIL 1 2基因转染到正常细胞CHO ,然后进行微囊化 ,移植到荷瘤小鼠的皮下。 2 0d后 ,测定小鼠血清TH1 和TH2 类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 1 2和IL 4、IL 1 0的水平。结果　经微囊化mIL 1 2基因修饰的CHO细胞皮下移植干预治疗后 ,小鼠血清TH1 细胞因子IFN γ、IL 2、IL 1 2水平明显升高 (P <0 .0 5) ,而TH2 类细胞因子IL 4、IL 1 0则明显降低 (P <0 .0 5)。结论　外源性mIL 1 2促进荷瘤小鼠TH1 细胞的分化 ,使TH1 TH2 向着TH1 方向漂移 ;微囊化基因工程细胞的移植 ,有望替代基因工程药物。

关键词： mIL-12基因微囊 TH1/TH2 肿瘤基因工程免疫逃逸

大肠癌组织endostatin的表达与血管生成的关系

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实用肿瘤杂志 2003年第2期18卷 109-111页

作者：孝作祥郑树彭佳萍潘月龙浙江大学肿瘤研究所浙江杭州310009

目的　探讨内皮抑制素 ( endostatin)蛋白在大肠癌组织中的表达及其与 VEGF、微血管密度 ( MVD)的关系。方法　应用免疫组化 S- P法 ,检测 6 8例大肠癌及其正常大肠组织 endostatin表达、VEGF表达及 MVD。结果　 endostatin蛋白可在大... 详细信息

目的　探讨内皮抑制素 ( endostatin)蛋白在大肠癌组织中的表达及其与 VEGF、微血管密度 ( MVD)的关系。方法　应用免疫组化 S- P法 ,检测 6 8例大肠癌及其正常大肠组织 endostatin表达、VEGF表达及 MVD。结果　 endostatin蛋白可在大肠癌组织的肿瘤细胞、内皮细胞及浸润淋巴细胞中表达。 endostatin表达与 Dukes分期密切相关。endostatin高表达组的 MVD( 12 .35± 4.96 )明显低于 endostatm低表达组 ( 16 .38± 6 .2 8)。 VEGF染色阳性组与阴性组的 endostatin蛋白表达差异无显著性。结论　 endostatin在大肠癌组织的不同类型细胞中出现 ,与大肠癌血管生成密切相关 ,endostatin的表达水平随着 Dukes分期的进展而降低反映了血管生成促进因子和抑制因子之间平衡的转变。

关键词：结肠直肠肿瘤病理学新生血管化病理性内皮生成因子拮抗剂抑制剂血管生成因子生物合成基因表达基因疗法

SRRS方剂抑制消化道恶性肿瘤P^(53)基因突变的实验研究

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肿瘤防治研究 1999年第3期26卷 181-183页

作者：赵爱光杨金坤孝作祥唐莱娣上海中医药大学附属龙华医院中西医结合肿瘤科

目的：从分子水平探讨ＳＲＲＳ方剂治疗消化道癌的可能机制。方法：选用Ｌｏｖｏ结肠腺癌细胞裸小鼠移植瘤模型，观察中药ＳＲＲＳ方剂抑制移植瘤生长的作用，并用ＰＣＲＳＳＣＰ银染色法研究ＳＲＲＳ方剂对Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中... 详细信息

目的：从分子水平探讨ＳＲＲＳ方剂治疗消化道癌的可能机制。方法：选用Ｌｏｖｏ结肠腺癌细胞裸小鼠移植瘤模型，观察中药ＳＲＲＳ方剂抑制移植瘤生长的作用，并用ＰＣＲＳＳＣＰ银染色法研究ＳＲＲＳ方剂对Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因突变的影响情况。结果：对照组有５０％（５／１０）发生Ｐ５３基因第七外显子突变，ＳＲＲＳ方剂治疗组无（０／１０）此现象（Ｐ＜００５）。结论：提示ＳＲＲＳ方剂能抑制Ｌｏｖｏ移植瘤生长过程中Ｐ５３基因的突变。

关键词： SRRS方剂 P^53基因消化道肿瘤中医药疗法

Inducible nitric oxide synthase expression is related to angiogenesis,bcl—2 and cell proliferation in hepatocellular carcinoma

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Journal of Zhejiang University Science 2003年第2期4卷 221-227页

作者：彭佳萍郑树孝作祥张苏展 CancerInstitute CollegeofMedicineZhejiangUniversityHangzhou310009China

In this study, we examined the expression of inducible nitric oxide s ynthase (iNOS) and vascular endothelial growth factor (VEGF) by immunohistoc hemi cal staining in 76 tissue sections collected from hepatocellular carcinoma (HCC) patients undergoing hepatectomy. Microvascular density (MVD) was determined by counting endothelial cells immunostained using anti-CD34 antibody. We performe d DNA-flow cytometric analyses to elucidate the impact of iNOS and VEGF expressi o n on the cell cycle of HCC. Most of the HCC cells that invaded stroma were mark edly immunostained by iNOS antibody. The iNOS stain intensity of the liver tissu e close to the tumor edge was stronger than that of HCC tissue, and the stronges t was the hepatocytes closer to the tumor tissue. However, iNOS expression in 10 normal hepatic samples was undetectable. VEGF positive expression ratio was 84. 8% in iNOS positive expression cases, and the ratio was 35.3% in negative cases. There was significant correlation (P=0.000) between iNOS and VEGF expressi on. Moreover, iNOS expression was significantly associated with bcl-2 and MVD, but w ithout p53 expression. DNA-flow cytometric analyses showed that combined expres s ion of iNOS and VEGF had significant impact on the cell cycle in HCC. PI (Proli ferating Index) and SPF (S-phase fraction) in the combined positive expression o f iNOS and VEGF group was significantly higher than that in the combined negativ e group. The present findings suggested that iNOS expression was significantly a ssociated with angiogenesis, bcl-2 and cell proliferation of HCC.

关键词： Hepatocellular carcinoma Nitric oxide synthase Angiog enesis Bcl-2 Flow cytometric analyse

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青少年脊柱侧弯的肺功能研究

颈腰痛杂志 1996年第2期17卷 81-83页

作者：田纪伟孝作祥赵光复邹学群李克宁上海中医药大学附属龙华医院

作者研究了４８７例无症状青少年特发性脊柱侧弯患者肺通气功能，并以正常同龄青少年２５０例作对照。结果表明：患者肺活量，肺活量占预计值百分比，深吸气量，用力肺活量，１秒钟用力呼气容积，最大通气量，最大通气量占预计值的百分... 详细信息

作者研究了４８７例无症状青少年特发性脊柱侧弯患者肺通气功能，并以正常同龄青少年２５０例作对照。结果表明：患者肺活量，肺活量占预计值百分比，深吸气量，用力肺活量，１秒钟用力呼气容积，最大通气量，最大通气量占预计值的百分比较同龄正常组明显降低；而潮气容积，１秒钟用力呼气容积占用力肺活量比值，最大呼气中段流量，最大呼气中段流量占预计值的百分比与对照组无显著性差异。并进一步研究表明：肺活量占预计值的百分比的降低与脊柱侧弯的Ｃｏｂｂ角、侧弯顶椎的椎体楔变度及旋转度发病年龄有关，而与脊柱侧弯方向无关。

关键词：脊柱侧弯肺功能楔变度