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质体核糖体蛋白PRPS10a的功能分析

质体核糖体蛋白PRPS10a的功能分析

作者：孙雪萍山东师范大学

学位级别：硕士

叶绿体是植物和藻类光合作用和某些代谢活动所必需的半自主细胞器,其拥有由DNA、RNA及相关蛋白组成的拟核结构。在对叶绿体拟核蛋白质组的研究中,发现除DNA或RNA相关蛋白外,还检测到许多核糖体蛋白和核糖体生物发生因子,暗示拟核可能在... 详细信息

叶绿体是植物和藻类光合作用和某些代谢活动所必需的半自主细胞器,其拥有由DNA、RNA及相关蛋白组成的拟核结构。在对叶绿体拟核蛋白质组的研究中,发现除DNA或RNA相关蛋白外,还检测到许多核糖体蛋白和核糖体生物发生因子,暗示拟核可能在叶绿体核糖体生物合成过程中发挥作用。BPG2(Brz-insensitive pale green 2)是一个Yqe H型GTPase,前人研究结果表明BPG2参与叶绿体核糖体的生物合成过程。本研究前期为探究BPG2介导叶绿体核糖体生物合成的分子机制,利用酵母双杂交系统筛选到BPG2的潜在互作蛋白PRPS10a(Plastid Ribosomal Protein S10)。本论文的研究发现,BPG2和PRPS10a能够在叶绿体拟核结构中发生互作。通过对PRPS10a分子及生理功能深入分析,发现其在BPG2与核糖体互作及r RNA加工过程中发挥重要作用。主要研究结果如下:1、BPG2和PRPS10a在体内体外互作:本课题前期通过酵母双杂交系统发现BPG2蛋白与PRPS10a互作,且相互作用依赖于BPG2蛋白C末端。本论文进一步利用Co-IP实验和pull down实验,明确了BPG2和PRPS10a可以在体内体外互作。2、PRPS10a和BPG2蛋白亚细胞定位分析:为检测BPG2和PRPS10a在叶绿体中的蛋白分布模式,利用其蛋白融合GFP标签并通过共聚焦显微镜检测,结果发现PRPS10a和BPG2均定位于叶绿体拟核。然而,仅表达BPG2-N末端的GFP融合蛋白却无法靶向拟核,而游离于叶绿体基质中,说明BPG2蛋白的C端在其拟核定位中发挥重要作用。此外,由于拟核结构随着叶绿体发育动态变化,通过在种子萌发最初几天追踪PRPS10a蛋白在叶绿体中的分布模式,发现BPG2功能缺失会延迟拟核的动态变化过程。3、PRPS10a杂合缺失导致叶色花斑和叶片畸形:为探究PRPS10a生理学功能,前期利用CRISPR-Cas9技术获得了相应的突变体植株。表型分析发现,纯合缺失PRPS10a可导致球形胚发育停滞;而其杂合缺失可使植株子叶和真叶表现出杂色表型且畸形。重要的是,敲除BPG2功能或通过抗生素抑制叶绿体核糖体功能可显著缓解由PRPS10a杂合缺失引起的叶片畸形及杂色表型,暗示PRPS10a对维持叶绿体核糖体生物学功能至关重要。4、BPG2和PRPS10a功能缺陷影响光合蛋白积累:为评估PRPS10a杂合缺失对叶绿体蛋白积累的影响,利用免疫印迹技术比较分析了几个光合作用相关蛋白在不同突变体背景中的积累水平。结果表明,PRPS10a杂合缺失使光合相关蛋白的积累水平显著降低;在PRPS10a杂合缺失突变体中敲除BPG2的功能可使光合蛋白的积累水平进一步下降。此结果可能与BPG2和PRPS10a功能缺陷影响叶绿体核糖体活性密切相关。5、PRPS10a介导BPG2与核糖体复合体互作:由于BPG2的C末端对其蛋白靶向拟核至关重要,且PRPS10a与BPG2的C末端进行互作,推测PRPS10a可能介导BPG2与拟核核糖体的互作。为验证这一猜想,利用蔗糖密度梯度离心串联免疫印迹技术分析了PRPS10a功能缺陷对BPG2与核糖复合体互作的影响。结果表明,PRPS10a在30S、70S及polysome组分均有分布,而BPG2仅能在30S核糖体组分中检测到;敲除BPG2的功能对PRPS10a在核糖体组分中的分布无明显影响,然而PRPS10a单倍剂量不足(Haploinsufficient,HI)使BPG2在30S核糖体组分中的积累水平显著降低,说明PRPS10a介导BPG2与30S核糖体的互作过程。6、PRPS10a功能缺陷影响叶绿体r RNA加工:前人研究结果表明,BPG2参与叶绿体核糖体16S r RNA的加工过程。鉴于PRPS10a参与BPG2与核糖体的互作过程,推测PRPS10a功能缺陷可能对r RNA加工造成影响。为验证这一推测,利用环化反转录PCR(c RT-PCR)分析了r RNA前体在相应突变体背景中的积累水平。结果表明,PRPS10a杂合缺失使16S r RNA的前体显著积累,此分子表型与敲除BPG2类似。此外,实验还发现BPG2或PRPS10a功能缺陷可间接影响23S的后成熟过程。7、PRPS10a和BPG2与GUN1和VAR2遗传关系分析:前人研究表明GUN1和VAR2参与叶绿体蛋白稳态调控过程。为探究BPG2和PRPS10a功能缺陷对叶绿体蛋白稳态的影响,分析了其与GUN1和VAR2的遗传学互作。结果表明,bpg2-2 var2杂交后代叶斑消失,bpg2-2是var2的抑制子,可以恢复var2的斑叶表型;gun1-101 var2杂交后代生长迟缓,叶斑比例有所增加,真叶完全变白;gun1-101 prps10a/+杂交后代植株体型较小,叶斑表型更为严重;var2 prps10a/+杂交后并没有恢复var

关键词： PRPS10a 拟南芥叶绿体核糖体拟核

手性金纳米SERS基底的构建及其对映体选择性识别功能的研究

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手性金纳米SERS基底的构建及其对映体选择性识别功能的研究

作者：孙雪萍上海师范大学

学位级别：硕士

在自然界中,手性选择是生物体进行生命活动的必不可少的规律之一。互为对映体的手性分子具有相同的化学式,但是两者具有不同的空间构型、光学活性和药理性能等。手性分子广泛存在于人体内、药物和日常化学品中,因此,开发方便、快速和灵... 详细信息

在自然界中,手性选择是生物体进行生命活动的必不可少的规律之一。互为对映体的手性分子具有相同的化学式,但是两者具有不同的空间构型、光学活性和药理性能等。手性分子广泛存在于人体内、药物和日常化学品中,因此,开发方便、快速和灵敏的手性识别检测分析方法具有重要的研究意义。常用的手性识别研究方法主要包括色谱法,光谱法和传感器法。但这些方法存在操作复杂、灵敏度低、分子特异性差等缺点。表面增强拉曼光谱(SERS)法具有分析速度快、灵敏度高等特点,可以弥补上述方法的缺点。然而,由于一对对映体具有相同的拉曼光谱,普通的拉曼光谱仪器不能直接区分对映体,这在很大程度上限制了拉曼光谱在手性分析中的应用。近年来,一些研究表明具有手性的SERS基底可以诱导一对对映体产生差异化拉曼光谱,从而实现手性识别。因此,构建具有手性的金属纳米粒子SERS基底为推动拉曼光谱在手性识别中的应用提供了新的思路。大部分手性SERS基底主要通过手性有机分子对金、银纳米材料进行表面修饰,并和特定手性分子结合来实现手性识别。本工作着眼于发展新型的手性金纳米材料SERS基底,并建立基于化学反应的SERS手性识别新策略,主要研究内容和结果如下:1、利用手性二氧化硅合成手性金纳米颗粒,通过高温烧结等处理方法成功制备出没有有机分子修饰的手性金纳米粒子,将该金手性纳米粒子作为SERS基底实现对胱氨酸对映体分子的识别。在上述手性金纳米颗粒的SERS基底上,D-胱氨酸和L-胱氨酸的拉曼信号强度差异值可达3倍以上;而在非手性金纳米颗粒SERS基底上,两者之间的拉曼信号几乎相同。进一步采用密度泛函理论(DFT)对识别原理进行了探讨,初步发现手性识别和胱氨酸分子与手性金纳米颗粒的分子取向相关联,从而导致拉曼信号强度具有差异性。2、在液相还原法制备金纳米颗粒的过程引入手性半胱氨酸分子,从而一步法合成出了半胱氨酸修饰的金纳米颗粒。利用这类金纳米颗粒作为SERS基底,借助金表面的半胱氨酸和酪氨酸对映体发生手性相互作用,导致D-酪氨酸和L-酪氨酸的位于830 cm处的特征拉曼散射信号强度发生变化,从而实现了对酪氨酸的手性识别检测。此外,该类金纳米粒子也可以用于苯丙氨酸对映体的选择性识别。此外,该类金纳米粒子也可以用于苯丙氨酸对映体的选择性识别。3、在工作二的基础上,进一步发展出了一种基于氧化反应的SERS识别多巴对映体的分析策略。L-多巴在D-半胱氨酸修饰的金纳米颗粒SERS基底上的拉曼散射信号和其在L-半胱氨酸(L-Cys)修饰的金纳米颗粒SERS基底上的拉曼信号几乎相同。然而,在双氧水氧化L-多巴的过程加入上述两类金纳米颗粒SERS基底,最终收集到的SERS光谱具有显著的差异性,从而通过化学反应实现了手性识别和区分。

关键词：表面增强拉曼光谱氨基酸金纳米材料对映体识别

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爱德华·汤普森工人阶级理论探析

爱德华·汤普森工人阶级理论探析

作者：孙雪萍上海师范大学

学位级别：硕士

爱德华·帕尔默·汤普森（E.P.Thompson,1924-1993）是英国新马克思主义代表人物之一,其代表著作《英国工人阶级的形成》,生动诠释了汤普森的工人阶级理论内涵。汤普森的工人阶级理论,促使英国马克思主义实现了文化转向和理论更新,也进... 详细信息

爱德华·帕尔默·汤普森（E.P.Thompson,1924-1993）是英国新马克思主义代表人物之一,其代表著作《英国工人阶级的形成》,生动诠释了汤普森的工人阶级理论内涵。汤普森的工人阶级理论,促使英国马克思主义实现了文化转向和理论更新,也进一步促进了马克思主义阶级理论向纵深处发展。本文以汤普森的工人阶级理论为研究对象,主要从形成背景、理论内容、实践路径、比较与评析五个方面对其进行探析。首先,从形成背景看,英国社会及世界发展的影响加之其特殊的个人经历深深触动着汤普森探讨的方向。其理论也在英国经验主义传统、英国马克思主义以及西方马克思主义的影响下酝酿形成。其次,从理论内容来看,从阶级到工人阶级,从阶级经历到阶级觉悟,汤普森充分挖掘了阶级意识的重要作用,厘清了英国工人阶级从无到有的历史脉络,试图达到为英国工人阶级正名的目的。再次,从实践路径来看,汤普森工人阶级理论的实践是在具备主客观相统一的阶级经验的准备基础上通过阶级斗争,最终实现工人阶级内在的自我解放。只有内在成功解放才能为外在的自我及全世界的解放蓄积力量。从次,与经典马克思主义阶级理论相比,汤普森坚持自下而上的观察视角,用“文化主义”的方法对英国工人阶级进行了考察,实现了阶级概念、阶级意识及阶级斗争三方面的不同解读。最后,用马克思主义的立场和方法来看待汤普森的工人阶级理论就可以发现,汤普森对民族、文化的关注是其理论的两大特色,也正是对经验和非经济因素的过分关注,导致汤普森研究角度局限,在一定程度上不能正确界定阶级意识和经济结构在阶级形成中的作用,从而在其理论实现的现实可能性上有待深入考量。当然,汤普森工人阶级理论也在对过去英国下层民众经验材料的研究中,挖掘了历史的真正创造者,为马克思主义工人阶级理论提供了新的注解,对中国特色社会主义发展建设也具有一定的借鉴意义。

关键词：汤普森工人阶级理论马克思主义经验文化

熟悉度促进人们与垃圾分类中的志愿者合作及其作用机制

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心理学报 2023年第8期55卷 1358-1371页

作者：张萱刘萍萍中国科学院心理健康重点实验室(中国科学院心理研究所) 北京100101 中国科学院大学心理学系北京100049

垃圾急剧增长严重污染环境,亟需垃圾分类和减量,没有桶前志愿者监管,垃圾混放污染率居高不下。而居民不配合志愿者的情况时有发生,如何促进居民与志愿者合作?基于声誉关注和社会距离理论,为解决垃圾分类困境,本研究实施3个情境实验和1... 详细信息

垃圾急剧增长严重污染环境,亟需垃圾分类和减量,没有桶前志愿者监管,垃圾混放污染率居高不下。而居民不配合志愿者的情况时有发生,如何促进居民与志愿者合作?基于声誉关注和社会距离理论,为解决垃圾分类困境,本研究实施3个情境实验和1个质性访谈调研,考察对志愿者的熟悉度(高/低/陌生)、志愿者年龄(小学生/年轻人/老年人)如何影响不同年龄的居民(中青年和老年人)的合作性,及其内在作用机制。结果发现,人们对志愿者熟悉度越高,合作性越高;在低熟悉条件下,对老年志愿者合作性更高(实验1和实验2)。同中青年被试相比,老年被试对老年志愿者的合作性更高,但同陌生志愿者的合作性低于中青年被试(实验2)。社会距离和声誉关注可作为熟悉度促进合作的心理机制,起到链式中介作用(实验3)。多元回归分析和质性调研结果表明,社区里居民熟悉的志愿者监管引导,及居民自身的亲社会性,在垃圾分类推广中起着关键作用。这些重要发现为垃圾分类的推行及降低成本提供了参考价值和科学支撑。

关键词：熟悉度年龄差异声誉关注社会距离合作

活细胞RNA成像技术及其在生物医学中应用研究进展

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浙江大学学报（医学版） 2022年第3期51卷 362-372页

作者：孙萍萍邹炜浙江大学医学院附属第四医院浙江义乌322000 浙江大学医学院转化医学研究院浙江杭州310058

RNA可与各种核酸及蛋白质相互作用,在多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用,其生物学过程高度动态。追踪活细胞中的RNA动态对理解基因表达的时空调控以及RNA的调控功能至关重要。基于荧光蛋白的RNA标记系统包括MS2/MCP系统、PP7/PCP... 详细信息

RNA可与各种核酸及蛋白质相互作用,在多种生理和病理过程中发挥重要的调控作用,其生物学过程高度动态。追踪活细胞中的RNA动态对理解基因表达的时空调控以及RNA的调控功能至关重要。基于荧光蛋白的RNA标记系统包括MS2/MCP系统、PP7/PCP系统、boxB/λN22和CRISPR-Cas系统等,其中MS2/MCP系统目前应用最为广泛,其具有结合稳定、信噪比高等优点,局限性是RNA成像的实现需要对靶RNA进行基因编辑,这可能导致靶RNA特性的潜在改变。近期开发的CRISPR-dCas13系统不需要对RNA进行改造,但其局限性在于CRISPR RNA效率的不确定性,且信噪比较低。基于荧光染料的RNA标记系统包括分子信标和荧光基团-适体对,其中分子信标具有高特异性和较高信噪比,而荧光基团-适体对Pepper系统和Mango系统在RNA成像的信噪比上更具有优势,但也需要对靶RNA进行基因编辑。活细胞RNA成像技术可应用于观察并研究RNA转录、剪接、转运、翻译(特指信使RNA)和亚细胞定位,有助于研究细胞分化等生物学过程以及细胞适应外界环境时的转录调控机制,有利于理解RNA行为异常导致的各种疾病的致病机制以及寻找潜在的治疗靶点。本文综述了活细胞RNA成像技术的发展和运用,并比较了各种方法的优势和不足。

关键词：活细胞RNA成像基因表达转录调控信使RNA 非编码RNA 综述

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文学“故乡”与传统重塑——邱华栋创作论

当代文坛 2023年第2期 123-128页

作者：孙萍萍大连大学文学院

许多作家的创作,是从“故乡”开始的。作家的生命在这里诞生,他们的文学生命也在这里生发、生长,日益丰盈。故乡的生活、记忆、风俗人情为作家建构文学世界提供了很重要的写作资源。邱华栋的文学“故乡”和他的创作与“故乡”的关系,在... 详细信息

许多作家的创作,是从“故乡”开始的。作家的生命在这里诞生,他们的文学生命也在这里生发、生长,日益丰盈。故乡的生活、记忆、风俗人情为作家建构文学世界提供了很重要的写作资源。邱华栋的文学“故乡”和他的创作与“故乡”的关系,在不同时期是变化着的。从“新疆”发展到“中国”,他的文学创作走过了三十多年,他积极主动地将自身转化为一个社会主体来承担文化传播的使命,以更自信、开放、平等的姿态走向更广阔的生活,走进世界,通过个性化的文学创作活动,发出中国乡土底层和历史真实之外的与时代“共时”的新的声音。

关键词：邱华栋故乡《哈瓦那波浪》中国故事

基于风险导向视角的行政事业单位内部控制探讨

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当代会计 2022年第11期 187-189页

作者：孙雪萍烟台市交通运输执法监察支队

随着科学技术的不断发展与市场环境的不断变化,行政事业单位的办公模式与管理方式发生了巨大的变化,互联网技术与信息技术的普及也为行政事业单位的运营带来了极大的便利,但同时使其面临较大的内部控制风险。因此,在当下如何制定良好的... 详细信息

随着科学技术的不断发展与市场环境的不断变化,行政事业单位的办公模式与管理方式发生了巨大的变化,互联网技术与信息技术的普及也为行政事业单位的运营带来了极大的便利,但同时使其面临较大的内部控制风险。因此,在当下如何制定良好的内部控制制度,加强对行政事业单位的管理,从而规避经营风险成了一大研究课题。文章剖析了基于风险导向的行政事业单位内部控制工作,阐述了其存在的问题,并提出了相应的解决策略。

关键词：行政事业单位风险内部控制导向

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石林县大糯黑村乡村旅游发展的困境与反思

石林县大糯黑村乡村旅游发展的困境与反思

作者：孙雪萍云南大学

学位级别：硕士

云南省石林彝族自治县的大糯黑村是彝族撒尼人聚居的传统村落,有传统民族建筑群落、撒尼文化等资源。1970年前后,艺术家自发进入大糯黑村创作,其作品的传播引发了外部对大糯黑村的关注。乡村旅游自出现以来,在增加村民经济收入和就业选... 详细信息

云南省石林彝族自治县的大糯黑村是彝族撒尼人聚居的传统村落,有传统民族建筑群落、撒尼文化等资源。1970年前后,艺术家自发进入大糯黑村创作,其作品的传播引发了外部对大糯黑村的关注。乡村旅游自出现以来,在增加村民经济收入和就业选择、促进乡村经济发展等方面发挥了一定的作用。2004年左右,地方政府对大糯黑村进行了旅游规划设计,投入资金建设硬件设施,试图通过乡村旅游推动大糯黑村经济发展。大糯黑村在政府推动下开始发展乡村旅游,农家乐是村内主要的旅游产业形态。2015年前后,当地方政府的关注逐渐转移,大糯黑村在独立面向市场时,旅游发展处于停滞状态,未达到预期设想。本文从资源、市场、产业支撑三个维度分析发现,大糯黑村旅游发展不佳的原因是:大糯黑村的文化资源在石林县内独特性相对不强,文化资源能进行转化的规模有限,导致其文化资源难以有效转化为旅游资源,进而难以实现经济效益。大糯黑村作为民族文化体验、生态旅游的村寨发展旅游,其旅游产品在石林县内差异性不明显,不具有竞争优势,导致其旅游产品不能很好地对接石林旅游市场。大糯黑村旅游发展带来的经济效益远低于农业产生的经济效益,仅为农家乐经营者享有,而大部分村民从事农业生产成为理性的选择,表明乡村旅游产业不足以支撑大糯黑村经济发展。通过对大糯黑村乡村旅游发展情况和面临困境进行理性反思,认为资源相对集中的村落,无法仅靠村落相对集中的资源去支撑乡村旅游可持续发展;需要将村落资源与其他资源进行整合,优化资源配置,才能实现乡村旅游可持续发展。作为一个单点发展旅游的村落,在整个旅游市场中,并非一定要实现市场价值,可以作为旅游公共服务平台,为游客提供旅游公共产品和服务。乡村经济的发展不能单纯依靠乡村旅游,要结合乡村自身产业基础,推动多元业态融合发展,进而实现乡村经济发展。

关键词：大糯黑村乡村旅游困境与反思

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财务共享模式下企业内部控制问题研究

现代商业 2022年第23期 187-189页

作者：孙雪萍北京联合大学北京100101

随着时代进步,全球经济一体化进程加快,许多大型集团企业都建立了财务共享服务中心。资源全新整合分配、业务流程重新调整,使得传统的内部控制制度已不再适应企业当前的发展形势,财务共享模式下的企业内部控制也出现了新的问题。本文基... 详细信息

随着时代进步,全球经济一体化进程加快,许多大型集团企业都建立了财务共享服务中心。资源全新整合分配、业务流程重新调整,使得传统的内部控制制度已不再适应企业当前的发展形势,财务共享模式下的企业内部控制也出现了新的问题。本文基于COSO内部控制框架对海尔集团实施财务共享后进行分析,发现其优点与不足,希望能够为我国创建财务共享中心的集团企业提供借鉴,在提高内控效率方面提供建议。

关键词：财务共享内部控制海尔集团