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胶原—壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架的制备及其在组织工程皮肤构建中的应用

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胶原—壳聚糖/纤维蛋白胶不对称支架的制备及其在组织工程皮肤构...

作者：孙锦章浙江大学

学位级别：硕士

背景资料临床上，烧伤、创伤、肿瘤、手术、慢性溃疡等各种原因引起的皮肤缺损是一种常见的疾病。大面积严重烧伤更是医务人员面临的棘手问题。传统的治疗方法便是皮肤移植，例如自体皮移植，同种异体皮移植、异种皮移植。其中，自体... 详细信息

背景资料临床上，烧伤、创伤、肿瘤、手术、慢性溃疡等各种原因引起的皮肤缺损是一种常见的疾病。大面积严重烧伤更是医务人员面临的棘手问题。传统的治疗方法便是皮肤移植，例如自体皮移植，同种异体皮移植、异种皮移植。其中，自体皮移植由于没有排斥反应，疗效肯定，是首选的方法。但是却又常常碰到自体皮来源不足的难题，尤其对于大面积烧伤病人来说，这种供需矛盾就更加突出了。此外，自体皮移植还存在另外一个缺点，即造成新的损伤，可能会引起供皮区创面的疤痕形成或色素沉着。近20年来，伴随着材料科学和生命科学的发展，组织工程学迅速兴起，为临床上各种组织缺损的修复、重建提供了一种崭新的，更加理想的治疗策略。因此它越来越受到医学界的关注。皮肤组织工程是这一新兴学科中发展最早、最快的领域之一。第一种经FDA批准上市的组织工程产品就是组织工程皮肤产品。目前已经有诸如Integra，AlloDerm，Transcyte，Apligraf等多种产品问世，并获得FDA批准用于临床。这些商品化的组织工程皮肤在用于烧伤以及慢性溃疡等患者的创面修复中，显示出了很好的治疗效果，有效的促进了皮肤组织的再生。然而，国外的这些组织工程皮肤产品，价格均十分昂贵，远远超过了我国普通老百姓的承受能力，难以满足我国老百姓的需求。因此研制一种价格低廉，又能满足临床要求的，具有自我知识产权的组织工程皮肤产品对于我国的广大患者来说就显得尤为重要。胶原是哺乳动物体内含量最多的蛋白质，它具有生物相容性好、易降解、低抗原性的特性，是组织工程支架中广泛使用的一种生物材料。壳聚糖由在自然界广泛分布的甲壳素经脱乙酰化处理制得，这两者都属于天然生物可降解材料，在自然界分布广泛，制取比较容易，所需成本也较低。将这两种成分按一定比例混合，再通过胶联处理，制备的胶原-壳聚糖多孔材料，微观下成蜂窝状的多孔结构，结构较为均一，孔径在80-150μm范围之内，研究表明，此种支架适合真皮成纤维细胞的迁移和生长，可以作为一种诱导真皮再生的良好支架。但是，完全意义上的组织工程皮肤应当包括表皮和真皮的完整结构，我们要制备具有更大临床应用价值的组织工程复合皮肤，就不仅需要有真皮结构，还要有多层的表皮结构。而构成真皮结构的成纤维细胞和形成表皮结构的表皮细胞在支架中具有不同的分布和生长状态。胶原-壳聚糖均一的多孔结构，似乎不能很好地满足这种要求。我们需要一种具备更佳微观结构的生物支架，既能适应成纤维细胞的接种生长，又能适应表皮细胞生长融合的需要。Wang等利用明胶、6-硫酸软骨素、透明质酸，采用冷冻—冻干的方法制成一种不对称的双面膜，两面具有不同孔径结构，上面一层较薄，孔径较小(20-50μm)，底下一层较厚，孔径较大(平均150μm)，体外构建时，在上面小孔层培养角朊细胞，而在底下的大孔中接种真皮成纤维细胞。此种支架表层的小孔既可防止下层成纤维细胞向上生长，也可防止表层角质形成细胞落入成纤维细胞层面。研究表明它能很好的适应组织工程复合皮肤构建需求。纤维蛋白由纤维蛋白原在凝血酶的催化下聚合而来，具有良好的组织和细胞相容性，在体内可降解，临床上主要被用作手术过程中的止血剂和组织粘合剂。研究表明它具有促进细胞黏附、增殖和迁移的作用，目前亦被作为一种良好的载体材料用于组织工程的创伤修复。此外纤维蛋白在微观下呈多孔网状结构，而且其结构与纤维蛋白原以及凝血酶的浓度和混合比例有关。于是，在本实验中，我们尝试将纤维蛋白复合到胶原—壳聚糖多孔支架上，从而制备出一种更能适应组织工程皮肤构建的不对称细胞支架。目的利用高分子生物材料胶原-壳聚糖和纤维蛋白胶制备适应组织工程皮肤构建的不对称支架，并探讨其用于体外组织工程皮肤构建的可行性。材料和方法一．皮肤细胞的分离培养 1．人真皮成纤维细胞(Fbs)的培养取包皮环切术后的皮肤块，以组织块培养法分离出人真皮成纤维细胞，并传代培养，选择3—8代细胞作为工作细胞，用于组织工程皮肤构建。 2．人表皮细胞的培养选择由本院皮肤科馈赠的人角质形成细胞系(HaCaT)，解冻复苏后加入DMEM(高糖，含10％胎牛血清，100U／ml青霉素，100U／ml链霉素)培养基，置于37℃，5％CO的饱和湿度孵箱中培养，2天换次液，传代培养。二．胶原-壳聚糖／纤维蛋白胶不对称支架的制备将由牛跟腱中提取出的胶原和壳聚糖分别溶于0.5mol／L的乙酸溶液中，配制浓度为0.5％的胶原溶液和壳聚糖溶液，再将胶原溶液和壳聚糖溶液按质量比9：1混合均匀，注入模具;采用冷冻一冻干法，—20℃冷冻2小时后，置冻干机中冻干，得到胶原／壳聚糖，再将其置105℃真空干热处理24小时，再置于浓度比为2：1的1—乙基—3—3(二甲基胺丙基)—碳化二亚胺(EDAC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)混合溶液中交联处理24小时，用三蒸水反复漂洗后，再

关键词：胶原壳聚糖纤维蛋白支架组织工程皮肤

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胆道术中造影的临床应用价值

中国医师进修杂志 1993年第10期 17-19页

作者：孙锦章上海市嘉定县中心医院 201800

我院普外科自1982年～1989年对323例胆道疾病患者在胆囊切除,胆总管结石或其病变清除后进行了胆道术中造影。造影所发见的残留病变或结石几乎都在手术时一次性作了解除,避免了胆道再次手术。本文拟对胆道术中造影的临床应用价值及有关... 详细信息

我院普外科自1982年～1989年对323例胆道疾病患者在胆囊切除,胆总管结石或其病变清除后进行了胆道术中造影。造影所发见的残留病变或结石几乎都在手术时一次性作了解除,避免了胆道再次手术。本文拟对胆道术中造影的临床应用价值及有关造影应注意的问题作分析讨论。资料一、一般资料:1982至1989年我院外科共行胆道术中造影323例。男68例,女255例。年龄19至78岁,同期未行术中造影而置T形管引流的胆道手术患者178例,术后作了T形管造影。

关键词：术中造影胆道术患者残留结石胆管炎胆管疾病胆道病变胆管结石临床应用价值

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铁絲渗碳代替弹簧钢絲

机械工人 1958年第11期 19-20页

作者：孙锦章南京无线电厂

一般模具上用的螺旋弹簧要求有高的弹性和足够的冲击韧性;由于承受反复的压缩,还要求有高的耐疲劳强度。于是有许多人认为,这种弹簧非用昂贵的琴钢丝

关键词：渗碳层保温表面层快速渗碳渗碳剂渗剂

闭孔疝误诊漏诊原因分析(附14例分析报告)

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中国临床医生杂志 1985年第4期 19-20页

作者：孙锦章上海市嘉定县中心医院外科

闭孔疝是一种甚为少见的腹外疝,常误诊误治。我院自1963年至1982年共收治14例,现就其诊断问题及误诊原因分析如下。资料本组14例,均为经产妇女,年龄除1例38岁、1例58岁外,其余均在60岁以上(85.71％),最大

关键词：小肠梗阻肿块闭孔神经腰胝丛嵌顿外科医师绞窄阴道检查发情诊断肠坏死

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简议水利工程机电技术现状

建材与装饰(下旬刊) 2008年第3期 109-110页

作者：孙锦章佛山市顺德区北滘镇水利所

水资源的开发和利用离不开水利工程的建设和运用,而在水利工程中机电工程是水利工程产生直接经济效益和社会效益的重要元素,在水利工程的综合利用过程中起到非常关键的作用。介绍我国水利工程机电技术标准体系的现状,分析了我国机电技... 详细信息

水资源的开发和利用离不开水利工程的建设和运用,而在水利工程中机电工程是水利工程产生直接经济效益和社会效益的重要元素,在水利工程的综合利用过程中起到非常关键的作用。介绍我国水利工程机电技术标准体系的现状,分析了我国机电技术标准体系中存在的主要问题,并提出解决标准体系建设中突出问题的建议和措施。

关键词：水利机电技术现状建议措施

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胆道术中造影的临床应用价值

医师进修杂志 1993年第10期16卷 17-19页

作者：孙锦章上海市嘉定县中心医院 201800

关键词：胆道疾病外科手术造影

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绞窄性小肠梗阻的特殊表现消化道大出血

普外临床 1993年第3期8卷 186-186,148页

作者：孙锦章吴萍山

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针刺迎香透四白穴治疗胆道蛔虫症22例

中国针灸 1986年第2期 13-14页

作者：孙锦章吴凇上海市嘉定县中心医院外科

胆道蛔虫症是农村常见的急腹症,一般针刺迎香透四白穴强刺激留针30分钟,可达到解痉止痛的功效。但此种止痛是暂时的,去针后,大部分患者疼痛复发。1976年至1984年,我们采用针刺透四白穴长时间留针,治疗22例重症胆道蛔虫症,取得了显著疗效... 详细信息

胆道蛔虫症是农村常见的急腹症,一般针刺迎香透四白穴强刺激留针30分钟,可达到解痉止痛的功效。但此种止痛是暂时的,去针后,大部分患者疼痛复发。1976年至1984年,我们采用针刺透四白穴长时间留针,治疗22例重症胆道蛔虫症,取得了显著疗效,现介绍于下。

关键词：针刺留针指留刺法四白穴头面部穴位迎香胆道蛔虫症

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阑尾腺癌3例分析报告

中国肿瘤临床 1989年第2期16卷 114-114页

作者：孙锦章上海市嘉定县中心医院外科

阑尾腺癌是比较罕见的消化道恶性肿瘤,国内报告不多。我院自1978～1983年遇到3例,并经手术和病理证实。现报告分析于下。例1,女,70岁,于1978年9月10日入院。患者1年来感右下腹隐痛。半年来,发现鸽蛋大肿块,曾诊为阑尾肿块,应用抗菌素治... 详细信息

阑尾腺癌是比较罕见的消化道恶性肿瘤,国内报告不多。我院自1978～1983年遇到3例,并经手术和病理证实。现报告分析于下。例1,女,70岁,于1978年9月10日入院。患者1年来感右下腹隐痛。半年来,发现鸽蛋大肿块,曾诊为阑尾肿块,应用抗菌素治疗后,腹痛一并缓解。10天来出现高热、右下腹痛加剧。查体:贫血消瘦貌,腹部平坦,右下腹扪及3×3cm质硬肿块,有压痛,轻度活动,腹肌不紧张。经应用抗菌素后,体温恢复正常,但肿块仍存在。钡餐回盲部造影无明显异常发现。剖腹探查见与盲肠相连处有6×4×4cm的肿物,根部变细,作肿块切除。病理,阑尾腺癌。拒作右半结肠切除。出院后2年余死亡。

关键词：阑尾腺癌分析

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