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禾谷镰孢毒力因子Cos2功能的初步分析

禾谷镰孢毒力因子Cos2功能的初步分析

川芎嗪在逆转心肌细胞肥大过程中对心肌细胞线粒体结构和功能的影响

中国植物病理学会2023年学术年会

作者：孙逸坤谷丽花李帆刘慧泉王秦虎西北农林科技大学植物保护学院

由禾谷镰孢(Fusarium graminearum)等真菌引起的赤霉病是小麦的主要病害之一,对作物生产和食品安全造成严重威胁。长期生产实践表明,培育并利用抗病品种是进行绿色防控的关键。然而,由于当前小麦与禾谷镰孢互作的分子基础研究还不够深入... 详细信息

由禾谷镰孢(Fusarium graminearum)等真菌引起的赤霉病是小麦的主要病害之一,对作物生产和食品安全造成严重威胁。长期生产实践表明,培育并利用抗病品种是进行绿色防控的关键。然而,由于当前小麦与禾谷镰孢互作的分子基础研究还不够深入,导致可用于小麦赤霉病抗性改良的候选基因非常有限。在鉴定禾谷镰孢互作关键基因的过程中,我们发现了一个在侵染时期特异表达的分泌蛋白基因COS2。该基因敲除后,禾谷镰孢的营养生长、产孢以及有性生长阶段均无影响,仅在小麦上的致病力大幅度下降,表明Cos2是禾谷镰孢的一个关键毒力因子。烟草瞬时表达结果表明,Cos2可以诱导活性氧累积并引发植物细胞死亡。为了明确Cos2引发的细胞死亡在禾谷镰孢致病过程中的作用,我们利用组成型启动子回补了COS2敲除突变体,使Cos2在侵染开始时立即发挥细胞死亡诱导作用。胚芽鞘接种实验表明,Cos2组成性表达促进了禾谷镰孢的侵染,表明Cos2引发的细胞死亡可能有利于植物侵染。因此Cos2可能是禾谷镰孢与小麦互作中促进死体营养的关键效应子之一。本研究将继续通过探究Cos2寄主靶标及其功能,进一步解析禾谷镰孢Cos2介导植物感病的分子机制,进而为小麦赤霉病抗性的改良挖掘候选基因。

关键词：禾谷镰孢效应子细胞死亡植物免疫

来源： cnki会议评论

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中国中西医结合杂志 2012年第5期32卷 661-665页

作者：于妍王硕仁孙逸坤闫彦芳朱陵群北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部和北京市重点实验室国家中医药管理局益气活血心脉病证重点研究室北京100700

目的探讨心肌肥大过程中有关心肌细胞线粒体结构和功能的改变,以及川芎嗪的保护作用。方法提取和培养乳鼠心肌细胞,并与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)共培养72、96h。通过BCA法检测细胞总蛋白含量,倒置显微镜拍摄并测量细胞直径,反映心肌细胞增... 详细信息

目的探讨心肌肥大过程中有关心肌细胞线粒体结构和功能的改变,以及川芎嗪的保护作用。方法提取和培养乳鼠心肌细胞,并与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)共培养72、96h。通过BCA法检测细胞总蛋白含量,倒置显微镜拍摄并测量细胞直径,反映心肌细胞增殖情况;通过荧光显微镜测量线粒体内膜膜电位,酶标仪检测线粒体单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)活性,分光光度计检测线粒体细胞色素C氧化酶(cytochromec oxidase,COX)活性和线粒体损伤百分率等反映心肌细胞线粒外膜结构和内外膜功能的损伤。在此基础上给予川芎嗪与对照药缬沙坦,分析其对心肌细胞重构中线粒体结构和功能的药理作用。结果在72、96h时,模型组较空白组心肌细胞总蛋白含量均增加(P<0.01),心肌细胞直径均增大(P<0.01)。在该增殖过程中,心肌细胞MAO活性和线粒体外膜损伤百分率均显著升高(P<0.01),COX线粒体细胞活性和线粒体膜电位均显著减低(P<0.01)。与模型组同期比较,川芎嗪在72、96h时能显著减少心肌细胞总蛋白质含量及心肌细胞直径,并显著降低心肌细胞MAO活性,提高线粒体COX活性,改善线粒体外膜损伤百分率和内膜膜电位,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论在心肌肥大过程中,存在线粒体的结构和功能的损害;川芎嗪在逆转AngⅡ所引起的心肌细胞肥大的过程中具有保护心肌细胞线粒体结构和功能的作用。

关键词：川芎嗪血管紧张素Ⅱ 心肌肥大线粒体损伤

星蒌承气汤对急性缺血性中风小鼠中枢和外周免疫炎症的影响与肠道菌群有关

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Journal of Traditional Chinese Medical Sciences 2023年第4期10卷 502-511,529页

作者：于瑞芸高强张超杨海欢姚兴伟孙逸坤马洪明胡汉华马大勇北京中医药大学东直门医院北京中医药大学中医学院北京中医药大学东直门医院临床检验科北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室北京中医药大学东直门医院神经内科台北医学大学医学院临床医学研究生院台北医学大学医学院脑血管治疗研究中心台北医学大学双河医院神经内科

目的:探讨星蒌承气汤(Xinglou Chengqi decoction,XCD)对急性缺血性卒中小鼠脑–肠轴的影响。方法:根据中医辨证分型标准,采用改良Longa法建立痰热腑实证脑缺血再灌注模型。60只无特定病原体的雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,36只经抗生素... 详细信息

目的:探讨星蒌承气汤(Xinglou Chengqi decoction,XCD)对急性缺血性卒中小鼠脑–肠轴的影响。方法:根据中医辨证分型标准,采用改良Longa法建立痰热腑实证脑缺血再灌注模型。60只无特定病原体的雄性C57BL/6小鼠随机分为5组,36只经抗生素处理的(ABX)小鼠随机分为三组。采用酶联免疫吸附试验检测盲肠去甲肾上腺素(NE)和胃动素(MTL),免疫组织化学方法检测盲肠酪氨酸羟化酶(TH)蛋白表达水平,免疫荧光法检测Iba-1和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平,流式多因子技术检测血清炎症因子含量。结果:与假手术组相比,大脑中动脉闭塞(MCAO)组盲肠组织中TH的表达水平显著升高(P=0.015)。与假手术组相比,MCAO组大鼠MTL水平显著升高(P<0.001),与MCAO组相比XCD组和尼莫地平(Nim)组大鼠血清MTL水平明显降低(P=0.003和P=0.007)。MCAO组星形胶质细胞和小胶质细胞明显激活,而XCD组激活程度低于MCAO组。ABX小鼠中星形胶质细胞和小胶质细胞在ABX–MCAO组明显激活,而ABX–XCD组激活程度较低。ABX–XCD组白细胞介素22水平较ABX–MCAO组显著升高(P=0.021)。结论:星蒌承气汤对急性缺血性卒中小鼠脑–肠轴的免疫通路有明显的调节作用,去除肠道菌群使该作用明显减弱。

关键词：星蒌承气汤急性缺血性中风痰热腑实证脑–肠轴免疫炎症

黄芪注射液在逆转心肌细胞肥大过程中对心肌细胞线粒体结构和功能的影响

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中国中药杂志 2012年第7期37卷 979-984页

作者：于妍王硕仁聂波孙逸坤闫彦芳朱陵群北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部和北京市重点实验室国家中医药管理局益气活血心脉病证重点研究室北京100700

目的:通过大鼠原代心肌细胞培养,探讨心肌肥大过程中有关心肌细胞线粒体改变的病理和治疗问题。方法:分离和培养大鼠原代心肌细胞,并与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)共培养72,96 h。通过BCA法检测细胞总蛋白含量;倒置显微镜拍摄并测量细胞直径,... 详细信息

目的:通过大鼠原代心肌细胞培养,探讨心肌肥大过程中有关心肌细胞线粒体改变的病理和治疗问题。方法:分离和培养大鼠原代心肌细胞,并与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)共培养72,96 h。通过BCA法检测细胞总蛋白含量;倒置显微镜拍摄并测量细胞直径,反映心肌细胞增殖情况;通过荧光显微镜测量线粒体内膜膜电位(ΔΨm);酶标仪检测线粒体单胺氧化酶(MAO)活性;分光光度计检测线粒体细胞色素C氧化酶(COX)活性和线粒体外膜损伤百分率;高效液相色谱法检测心肌细胞内ATP,ADP,AMP含量,反映心肌细胞线粒结构和功能在与AngⅡ共培养中的损伤和能量代谢情况。在此基础上给予黄芪注射液和缬沙坦,观察它们对心肌细胞重构中线粒体结构、功能的药理作用。结果:在72,96 h 2个时间点,模型组较空白组心肌细胞总蛋白含量和心肌细胞直径均显著性增加。在该增殖过程中,心肌细胞线粒体MAO活性和线粒体外膜损伤百分率均显著升高,线粒体COX活性和线粒体ΔΨm均显著减低,ATP,ADP含量减少,AMP含量增加。黄芪注射液和缬沙坦能抑制AngⅡ引起的心肌细胞蛋白质合成增加和细胞直径增大、改善线粒体外膜损伤和内膜膜电位及COX,MAO活性,增加ATP,ADP含量、降低AMP含量。结论:在心肌肥大过程中,存在线粒体的结构和功能的损害,心肌细胞能量代谢损伤变化是继心肌细胞线粒体结构损伤后发生的。黄芪注射液和缬沙坦在逆转血管紧张素Ⅱ所引起的心肌细胞肥大的过程中具有保护心肌细胞线粒体结构和功能的作用,逆转心肌细胞肥大、纠正心肌重构有利于心肌细胞能量的改善。

关键词：黄芪注射液缬沙坦心肌肥大线粒体损伤能量代谢

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西农979抗小麦赤霉病机制的转录组学研究

西农979抗小麦赤霉病机制的转录组学研究

鸡血藤抗肿瘤有效部位诱导A549肺癌细胞非凋亡性程序化死亡的研究

中国植物病理学会2023年学术年会

作者：高鑫隆李帆孙逸坤姜佳琦田晓霖李箐文段凯莉林杰刘慧泉王秦虎西北农林科技大学植物保护学院

小麦是我国最重要的主粮作物之一,然而其生产却受到多种植物病害的影响。其中,由禾谷镰孢引起的赤霉病是最具破坏力的病害之一,其对小麦产量和人畜健康均有严重威胁。培育和利用抗赤霉病小麦是防治该病害最为有效和环保的方法。近年来,... 详细信息

小麦是我国最重要的主粮作物之一,然而其生产却受到多种植物病害的影响。其中,由禾谷镰孢引起的赤霉病是最具破坏力的病害之一,其对小麦产量和人畜健康均有严重威胁。培育和利用抗赤霉病小麦是防治该病害最为有效和环保的方法。近年来,广泛栽培的小麦品种西农979表现出较好的赤霉病抗性,但其抗病机制尚不清楚。为了探究西农979抗小麦赤霉病的机制,我们以同样具有小偃6谱系的高感赤霉病品种小偃22为对照,从植物和病原菌两个角度对二者进行了比较转录组学分析和实验验证。从植物角度的分析表明,西农979的赤霉病抗性主要有两种来源。一种是在禾谷镰孢未侵染时,西农979中木质素和茉莉酸合成等基础防御基因的表达增强,赋予了西农979更好的基础抗性。另一种是禾谷镰孢侵染时,尽管西农979和小偃22的光合作用和生物胁迫反应均有所降低,但在西农979中,这些基因抑制更弱,赋予了西农979一定的诱导性抗性。进一步实验表明,未侵染时,西农979中有更高的木质素和茉莉酸含量;侵染后,两个品种的叶绿素含量均显著减少,但西农979的叶绿素受侵染影响更小。从病原菌角度分析,我们发现禾谷镰孢侵染相关基因的表达在西农979上受到一定的抑制,这可能是西农979中基础防卫基因的高表达导致的。受抑制的基因包括碳水化合物活性酶(CAZY)基因、效应子(CSEP)基因,以及次生代谢(SM)基因。值得注意的是SM基因中有四簇在侵染早期受到抑制,其中包括DON毒素合成基因簇和fusaoctaxin A合成基因簇。我们推测西农979抗性机制的形成可能与该品种育种策略有关:抗倒伏性状的选择可能导致了小麦木质素合成基因表达的增强,而高产量性状的选择则可能导致了逆境下光系统基因表达的增强。该研究将有助于我们进一步了解小麦与禾谷镰孢的互作机制,并为赤霉病抗病育种提供了新的见解。

关键词：赤霉病西农979 木质素茉莉酸光合作用禾谷镰孢

来源： cnki会议评论

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中国中药杂志 2008年第16期33卷 2040-2044页

作者：唐勇富琦何薇孙逸坤王玉芝王笑民首都医科大学附属北京中医医院肿瘤科中心实验室北京100010 北京市中医研究所北京100010

目的：探讨鸡血藤抗肿瘤有效部位（SSCE）对人非小细胞肺癌A549细胞的杀伤特点和作用机制。方法：采用四氮唑溴盐（MTr）法、绘制生长曲线观察药物对A549细胞增殖的影响。采用流式细胞术分析药物对肿瘤细胞周期的影响。通过HE染色和激... 详细信息

目的：探讨鸡血藤抗肿瘤有效部位（SSCE）对人非小细胞肺癌A549细胞的杀伤特点和作用机制。方法：采用四氮唑溴盐（MTr）法、绘制生长曲线观察药物对A549细胞增殖的影响。采用流式细胞术分析药物对肿瘤细胞周期的影响。通过HE染色和激光共聚焦扫描荧光显微镜技术、Annexin V-PI双标法，Caspase-3活性检测以及DNA琼脂糖凝胶电泳，观察药物对细胞凋亡的诱导作用。结果：SSCE对A549细胞有明显杀伤作用，24h药效最强，IC50为25．54mg·L^-1。细胞周期分析显示，药物作用12h，S期细胞增多，G0-G1和G2-M期细胞减少，细胞周期变化在24h后明显减弱，48h恢复正常。形态学观察可见，药物作用短时间内（8～12h），细胞核发生皱缩扭曲，胞浆内出现较多空泡及颗粒状物，胞膜完整；随后细胞核固缩。细胞膜磷脂酰丝氨酸（PS）外翻在用药后12h最显著，具有时间-剂量依赖关系。Caspase-3活性无明显升高，且与剂量成反比。DNA琼脂糖凝胶电泳未见片断化梯形条带。结论：SSCE对A549细胞具有直接杀伤作用，药效迅速，细胞周期受到干扰（Sdelay），主要表现为非凋亡性程序化细胞死亡。

关键词：鸡血藤 A549 细胞周期非凋亡性程序化细胞死亡

芪蛭益肺颗粒药物血清对TGF-β_1刺激下肺成纤维细胞Smad3、Smad4、Smad7mRNA表达的影响

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北京中医药大学学报 2014年第1期37卷 18-21,32页

作者：冯淬灵刘治坤侯雅静高永红孙逸坤北京中医药大学东直门医院北京100700 山西省中西医结合医院

目的明确芪蛭益肺颗粒药物血清对正常大鼠肺成纤维细胞转化生长因子-β1／Smads（TGF-β1／Smads）信号转导通路的调控作用。方法分离自出生2～3d大鼠肺组织并培养传代至第4代成纤维细胞，随机分为空白血清组、模型组和药物血清组。模... 详细信息

目的明确芪蛭益肺颗粒药物血清对正常大鼠肺成纤维细胞转化生长因子-β1／Smads（TGF-β1／Smads）信号转导通路的调控作用。方法分离自出生2～3d大鼠肺组织并培养传代至第4代成纤维细胞，随机分为空白血清组、模型组和药物血清组。模型组、药物血清组先滴加含2．5μg/L浓度TGF-β1的DMEM，空白血清组滴加新鲜无血清DMEM；之后空白血清组、模型组滴加含5％浓度空白血清的DMEM，药物血清组滴入含5％芪蛭益肺颗粒药物血清的DMEM。培养48、72h后采用实时荧光PCR检验方法，检测各组细胞中Smad3、Smad4、Smad7的mRNA表达。结果模型组48h细胞中Smad3、Smad4mRNA表达升高，72h细胞中Smad3、Smad4、Smad7mRNA表达升高，与空白组比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。药物血清组48h细胞中Smad3、Smad4mRNA表达下降，Smad7mRNA表达升高，72h细胞中Smad3、Smad4mRNA表达下降，与模型组比差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论芪蛭益肺颗粒可能通过调节TGF-β1／Smads信号转导通路的传导，抑制TGF-β1刺激下的肺成纤维细胞增殖。

关键词：慢性阻塞性肺疾病细胞培养转化生长因子成纤维细胞芪蛭益肺颗粒

人参三七川芎提取物对复制性衰老内皮细胞的影响和钙黏蛋白的作用

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中国实验方剂学杂志 2015年第10期21卷 123-127页

作者：王强雷燕杨静修成奎孙逸坤董玢欧阳竞锋中国中医科学院医学实验中心北京100700 北京中医药大学东直门医院北京100700

目的:观察人参三七川芎提取物对复制性衰老人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的影响和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的作用。方法:以HCMEC为研究对象,第8代HCMEC建立复制性衰老HCMEC模型,实验分为衰老模型组(衰老组)、白藜芦醇组(10μmol·L... 详细信息

目的:观察人参三七川芎提取物对复制性衰老人心脏微血管内皮细胞(HCMEC)的影响和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的作用。方法:以HCMEC为研究对象,第8代HCMEC建立复制性衰老HCMEC模型,实验分为衰老模型组(衰老组)、白藜芦醇组(10μmol·L-1)、人参三七川芎低、中、高剂量组(50,100,200 mg·L-1),相应药物作用24 h后,采用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)衰老染色鉴定,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,采用激光免疫共聚焦显微镜观察VEcadherin的形态学改变,Western blot检测VE-cadherin蛋白的表达情况。结果:与衰老组比较,人参三七川芎提取物各剂量组减少SA-β-gal衰老染色比例,促进细胞的增殖,减少G0/G1期细胞比例,增加G2/M期细胞比例,保持VE-cadherin形态的完整性,升高VE-cadherin蛋白的表达,均具有明显的统计学差异(P<0.05,P<0.01)。结论:人参三七川芎提取物能够延缓衰老,促进增殖和有丝分裂,保持复制性衰老HCMEC VE-cadherin的完整性和蛋白的表达,这可能是益气活血中药延缓内皮衰老的重要机制所在。

关键词：人参三七川芎提取物血管内皮钙黏蛋白复制性衰老

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活血化瘀法治疗脑出血作用机制实验研究进展

中国实验方剂学杂志 2020年第5期26卷 220-226页

作者：王丽琴安娜田超袁梦晨张涵莱孙逸坤高永红北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部和北京市重点实验室北京100700

脑出血(ICH)是指原发性非外伤性脑实质内出血,是常见的脑血管疾病之一,其发病率高,发展迅速,恢复慢且致残率高。脑出血后脑组织发生一系列病理变化,如脑内局部血肿及其占位效应、继发脑水肿、脑细胞死亡及血脑屏障破坏等,从而引发脑损伤... 详细信息

脑出血(ICH)是指原发性非外伤性脑实质内出血,是常见的脑血管疾病之一,其发病率高,发展迅速,恢复慢且致残率高。脑出血后脑组织发生一系列病理变化,如脑内局部血肿及其占位效应、继发脑水肿、脑细胞死亡及血脑屏障破坏等,从而引发脑损伤,导致神经功能缺损,严重影响患者生存质量,甚至危及生命。因此,寻找有效的治疗方法及药物,探索其改善神经功能的靶点及机制,减轻后遗症,提高患者的生存质量具有重要的意义。中医理论认为脑出血属于"离经之血",离经之血即为瘀血,因此,活血化瘀法在治疗脑出血中广泛应用,成为出血性中风的常规疗法。近年来学者运用现代科学方法对活血化瘀药物进行了广泛的研究,对于其作用机制进行深入探讨,发现活血化瘀法对脑出血后的一系列生理病理变化过程起着关键的干预作用,在血肿清除和改善微循环、降低死亡率和致残率方面有显著疗效。文章总结近五年活血化瘀药(三七、丹参、水蛭),方剂(补阳还五汤、抵挡汤、脑血疏口服液、通窍活血汤等)及复方注射液(丹红注射液)治疗脑出血的作用靶点,从促进血肿吸收、减轻脑水肿、减少细胞凋亡、促进血管新生、抑制炎症反应、促进神经组织的修复和再生等方面论述了活血化瘀中药治疗脑出血的实验研究进展,对其治疗作用机制进行总结,为临床运用活血化瘀法治疗脑出血及其现代科学研究提供科学依据。

关键词：活血化瘀脑出血细胞凋亡血脑屏障