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自1980年世界上第一只转基因小鼠制备成功后,科学家们就开始进行转基因鸡的研究,因为转基因鸡无论在基础理论研究方面还是在生物技术领域都具有独特的优势,因此建立行之有效的转基因鸡制备技术一直是一个研究的热点领域。虽然世界上已有成功获得转基因鸡的先例,但国内还没有成功获得转基因鸡的报道。本研究拟以绿色荧光蛋白基因为报告基因应用慢病毒载体感染法开展转基因鸡制备研究,希望外源基因能够整合到性腺中,并能够稳定的传递给下一代,以在国内率先建立起一个行之有效的转基因鸡制备技术体系。种蛋的质量是成功获得转基因鸡不可忽视是的一个重要因素。为获得优质的种蛋,以保证实验的顺利进行,我们对周围几个鸡场的种蛋进行筛选。通过实验证实,大午集团的种蛋优于其它鸡场的种蛋。对鸡胚操作后再进行培养的方法有两种,为开窗术和代用蛋壳法。在本研究中采用开窗术进行鸡胚的培养。在对刚产出的种蛋进行消毒处理后,室温条件下水平放置过夜,使胚胎漂浮到最上端。用70%酒精擦拭后,用电磨在赤道面上锯一5mm×5mm见方的口后就可以看到胚胎,然后向其中加一定量的稀蛋清,最后用石蜡和封口膜封口。采用变温孵化。孵化结果显示石蜡封口的孵化率高于封口膜封口。为研究显微注射所造成的机械损伤对孵化率的影响。我们开展了向鸡胚胚下腔注射DMEM液体培养基实验。对新鲜种蛋消毒和开口处理后,利用显微注射的方法向胚下腔中注射2～2.5uLDMEM液体培养基。共成功注射25枚种蛋,最后有9只雏鸡出壳,其孵化率为36%。结果显示我们的注射方法满足后续实验的进行。本研究中制备转基因鸡的方法为慢病毒载体法。慢病毒载体法是制备转基因鸡方法中最为成熟的一种方法。所使用的慢病毒载体为三质粒系统,即由穿梭质粒,包装质粒和包膜质粒构成。在穿梭质粒中用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为报告基因。采用逐级稀释法和感染293FT细胞实验进行病毒滴度的测定。其结果显示病毒滴度为1×10～9感染单位/mL(TU/mL)。在进行转基因鸡制备实验中,我们向鸡胚胚下腔内注射2～2.5uL携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体悬液,其滴度为1×10～9U/mL,对其封口后进行孵化。共成功注射110枚种蛋,最后得到了32只原代鸡。在鸡30日龄时,我们从鸡翅静脉采血,利用酚氯仿抽提方法提取鸡血基因组DNA,通过基因组DNA PCR方法扩增EGFP和部分载体序列。其中有4只扩增出同预期大小一致目的片段。更为有意义的是,在所养的16只公鸡性成熟后,采其精液再利用酚氯仿抽提方法提取精液的基因组DNA,通过PCR扩增和对目的片段回收测序方法鉴定,其结果显示有6只公鸡发生了性腺整合,其性腺整合率达到37.5%.总之,本研究建立了利用开窗术培养鸡胚和慢病毒载体制备转基因的方法,为后续开展转基因鸡研究创造了有利条件。

关键词：转基因鸡慢病毒载体开窗术性腺整合

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河南博物院精品与陈列

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2000年

作者：孙英民

本书分陈列体系和院藏精品2个部分介绍了河南博物馆，其中包括：“河南古代文化之光”、“楚国青铜艺术馆”、“河南古代玉器馆”、“恐龙世界”等。

ISBN: (纸本)7534724112

关键词：博物馆学科:陈列品地点:河南省陈列品

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 畅想之星图书光盘版（南... 评论

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小儿心内直视手术围术期心律失常的原因及防治

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实用儿科临床杂志 2007年第13期22卷 1032-1033页

作者：孙英民洛阳市第一人民医院心脏外科河南洛阳471002

目的探讨小儿心内直视手术后心律失常发生原因及防治措施。方法对310例小儿心内直视术后出现心律失常情况进行回顾性分析。激动起源异常275例(88.7%),针对病因诱因简单处理,使用常规抗心律失常药物即奏效。激动传导异常35例(11.3%),药... 详细信息

目的探讨小儿心内直视手术后心律失常发生原因及防治措施。方法对310例小儿心内直视术后出现心律失常情况进行回顾性分析。激动起源异常275例(88.7%),针对病因诱因简单处理,使用常规抗心律失常药物即奏效。激动传导异常35例(11.3%),药物治疗加术中及早临时起博器应用,必要时置永久起搏器。结果本组2例完全性心内膜垫缺损出现室颤治疗无效死亡,余均临床治愈。结论心内直视手术术后心律失常多与心内复杂畸形并心房过度扩张、巨大室间隔缺损、术中主动脉阻断时间过长、术中心肌保护差、钾代谢失衡者等因素有关;治疗应强调合理应用抗心律失常药物和及时应用临时起搏器。

关键词：心内直视术心律失常起搏器

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《后汉书》精言妙语 3

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丛书名：中国古典名著精言妙语

1999年

作者：朱绍侯孙英民

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家禽血液基因组DNA的快速提取

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安徽农业科学 2010年第16期38卷 8449-8452页

作者：孙朕孙英民郑素月樊宝良河北农业大学动物科技学院河北保定071001 河北工程大学农学院河北邯郸056038

[目的]建立一种应用硅胶膜提取禽血DNA的新方法。[方法]应用硅胶膜法和传统的酚/氯仿法提取抗凝禽血基因组DNA,设计合成了一对2.7 kb的鸡卵清蛋白基因的引物,检测这2种方法提取的基因组DNA模板对聚合酶链式反应(PCR)扩增效率的影响。[结... 详细信息

[目的]建立一种应用硅胶膜提取禽血DNA的新方法。[方法]应用硅胶膜法和传统的酚/氯仿法提取抗凝禽血基因组DNA,设计合成了一对2.7 kb的鸡卵清蛋白基因的引物,检测这2种方法提取的基因组DNA模板对聚合酶链式反应(PCR)扩增效率的影响。[结果]用硅胶膜法提取的基因组DNA产量和质量均比传统的酚/氯仿法高,将该法提取的基因组DNA作为模板能够消除抗凝剂对后续PCR反应的影响。[结论]硅胶膜法为快速提取高质量的禽血基因组DNA奠定了基础。

关键词：家禽血液硅胶膜法酚/氯仿抽提法聚合酶链式反应

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基层动物防疫检疫存在的问题及改进措施

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畜禽业 2021年第2期32卷 55-55,57页

作者：孙英民辽宁省昌图县镇村动物卫生监督所辽宁昌图112599

肉类安全直接关系到我国居民的食品安全与身体健康。在畜禽动物进入市场之前,要进行防疫检疫以保证肉类安全。基层动物的防疫检疫是两个相对独立的工作和任务,对基层动物防疫检疫的监管模式直接决定了肉类的安全与质量,对基层动物防疫... 详细信息

肉类安全直接关系到我国居民的食品安全与身体健康。在畜禽动物进入市场之前,要进行防疫检疫以保证肉类安全。基层动物的防疫检疫是两个相对独立的工作和任务,对基层动物防疫检疫的监管模式直接决定了肉类的安全与质量,对基层动物防疫检疫监管模式进行探究,从现阶段基层动物防疫检疫的现状开始分析,指出现阶段存在的一些问题,然后提出对应的改进措施,以完善基层动物防疫检疫的监管模式,为我国居民食用安全肉类做出贡献。

关键词：基层动物防疫检疫问题强化措施

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