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免疫球蛋白κJ区重组信号结合蛋白对CD133阳性室管膜细胞增殖与分化的影响

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解剖学报 2022年第2期53卷 144-154页

作者：叶鑫边维李梦一吴安婷张庭李军伟周鹏崔怀瑞孙臣友温州医科大学基础医学院解剖学教研室浙江温州325035 温州医科大学基础医学院神经科学研究所浙江温州325035 温州医科大学基础医学院基础医学院浙江温州325035

目的探讨免疫球蛋白κJ区的重组信号结合蛋白(RBP-Jκ)对CD133阳性室管膜细胞增殖与分化的影响及可能的机制。方法分离孕12 d的美国癌症研究所(ICR)胚胎小鼠(3只)侧脑室室管膜细胞进行原代培养,并使用RBP-Jκ-siRNA干扰RBP-Jκ,以及选... 详细信息

目的探讨免疫球蛋白κJ区的重组信号结合蛋白(RBP-Jκ)对CD133阳性室管膜细胞增殖与分化的影响及可能的机制。方法分离孕12 d的美国癌症研究所(ICR)胚胎小鼠(3只)侧脑室室管膜细胞进行原代培养,并使用RBP-Jκ-siRNA干扰RBP-Jκ,以及选用2~3月龄体重为20~25 g的CD133-CreER^(TM)::ROSA26-LacZ::RBP-Jκ^(flox/flox)小鼠(3只),通过腹腔注射他莫昔芬(TAM)敲除RBP-Jκ,通过免疫荧光双标染色检测CD133阳性室管膜细胞的增殖和分化变化的情况,最后通过Real-time PCR、Western blotting检测RBP-Jκ及其上下游相关分子表达情况。结果干扰或敲除RBP-Jκ后,无论是细胞还是动物水平CD133或β-半乳糖苷酶(β-GAL)/双肾上腺皮质激素(DCX)/β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulinⅢ)、CD133或β-GAL/微管相关蛋白2(MAP-2)或神经元核抗原(NeuN)、CD133或β-GAL/增殖细胞核抗原(PCNA)双阳性细胞数目均明显增加。同时Real-time PCR和Western blotting结果表明,在干扰或敲除RBP-Jκ后RBP-Jκ-和Splity多毛增强子1(Hes1)mRNA及蛋白表达量均显著下降,而Notch1 mRNA及蛋白的表达量反而显著增加。结论干扰或敲除RBP-Jκ,通过Notch1表达上调、Hes1表达下调,最终引起CD133阳性室管膜细胞的增殖与分化增加。

关键词： CD133阳性室管膜细胞 Notch信号通路免疫球蛋白κJ区重组信号结合蛋白免疫荧光小鼠

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2/Akt信号通路对6-羟基多巴胺处理的SH-SY5Y细胞模型的作用及分子机制

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解剖学报 2023年第5期54卷 521-530页

作者：李梦一吴安婷许泽婷张庭李军伟周鹏崔怀瑞孙臣友温州医科大学基础医学院解剖学教研室浙江温州325035 温州医科大学基础医学院神经科学研究所浙江温州325035 温州医科大学基础医学院浙江温州325035

目的探讨调控哺乳动物雷帕霉素蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系是否具有保护作用,并阐明其分子作用机制。方法经维甲酸(RA)处理的SH-SY5Y细胞分别给予6-OHDA、mTORC2信号通路抑制剂PP242和... 详细信息

目的探讨调控哺乳动物雷帕霉素蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)损伤的SH-SY5Y细胞系是否具有保护作用,并阐明其分子作用机制。方法经维甲酸(RA)处理的SH-SY5Y细胞分别给予6-OHDA、mTORC2信号通路抑制剂PP242和激动剂A-443654,通过免疫荧光染色观察各组细胞数目的变化;提取细胞总蛋白进行Western blotting和免疫共沉淀(CoIP)实验,明确mTORC2信号通路关键蛋白的表达水平及其相互作用;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。同时制备SH-SY5Y与Bv-2细胞系共培养的帕金森病(PD)模型,运用MTT及ELISA方法检测各组细胞活力及培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素β(IL-1β)的含量。结果6-OHDA损伤的PD细胞模型组酪氨酸羟化酶(TH)/增殖细胞核抗原(PCNA)/Hochest-、TH/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)-单标或双标阳性细胞数较正常组明显减少,凋亡率升高;Rictor、p-Akt、发育及DNA损伤反应调节蛋白1(REDD1)的表达均上升,且Rictor与p-Akt或REDD1存在相互作用;共培养模型中细胞活力明显降低且上清液中TNF-α和IL-β含量上升。A-443654组随着上述蛋白表达的进一步上调,细胞存活和凋亡以及炎性因子水平均有明显改善,而PP242组则呈现相反的变化。结论A-443654通过使Akt磷酸化而激活mTORC2信号通路,引起Rictor和REDD1蛋白的表达增加,继而提高细胞存活率并降低凋亡率,促进SH-SY5Y细胞的增殖分化,改善了6-OHDA引起的细胞损伤以及抑制了炎症因子的释放。

关键词：帕金森病哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2 PP242 A-443654 免疫荧光 SH-SY5Y细胞系

激活mTORC2/Akt信号通路对6-羟基多巴胺模型小鼠多巴胺能神经元和行为学的影响

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解剖学报 2023年第1期54卷 13-22页

作者：边维李梦一周鹏李军伟张庭吴安婷戚双双崔怀瑞孙臣友温州医科大学基础医学院解剖学教研室温州医科大学基础医学院神经科学研究所浙江温州325035 温州医科大学基础医学院浙江温州325035 温州医科大学附属第二医院(育英儿童医院)药剂科浙江温州325035

目的探讨激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)模型小鼠多巴胺能神经元和行为学的影响及可能的机制。方法将36只体重20~25 g 3月龄Nestin-CreERTM::ROSA26-LacZ雄性C57BL/6J小鼠分为NS+玉米油... 详细信息

目的探讨激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2(mTORC2)/Akt信号通路对6-羟基多巴胺(6-OHDA)模型小鼠多巴胺能神经元和行为学的影响及可能的机制。方法将36只体重20~25 g 3月龄Nestin-CreERTM::ROSA26-LacZ雄性C57BL/6J小鼠分为NS+玉米油组、6-OHDA+玉米油组、6-OHDA+PP242组、6-OHDA+A-443654组,并在小鼠右侧纹状体注射6-OHDA制备帕金森病(PD)小鼠模型以及每日腹腔注射mTORC2/Akt信号通路激动剂A-443654或抑制剂PP242。通过ELISA测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的水平;免疫组织化学和免疫荧光染色考察黑质(SN)-纹状体小胶质细胞、脑室周围神经前体细胞(NPCs)和多巴胺能神经元数目,Western blotting检测中脑水管mTORC2/Akt信号通路各相关蛋白Rictor,p-Akt和DNA损伤反应调节1(REDD1)的表达并通过免疫共沉淀验证它们之间的相互作用,最后观察各组小鼠行为学的变化。结果6-OHDA模型小鼠伴随小胶质细胞的激活和炎症因子的增加,黑质多巴胺能阳性神经元数目明显下降,小鼠的运动功能发生障碍,但NPCs数目较对照组小鼠明显增加,mTORC2/Akt信号通路相关蛋白表达也明显上调,在激动剂A-443654处理后随着相关蛋白的表达进一步上调,上述各指标均有明显改善,而抑制剂PP242处理组则呈现与激动剂A-443654完全相反的情况。结论A-443654通过上调mTORC2/Akt信号通路关键蛋白促进NPCs的增殖,增加新生多巴胺能神经元的数目并减少小胶质细胞的激活和炎症反应最终导致PD模型小鼠黑质-纹状体多巴胺能神经元和小鼠行为学的改善。

关键词：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物2 帕金森病多巴胺能神经元小胶质细胞神经再生免疫印迹法小鼠

雄性T2DM模型大鼠血清、生殖器官中NO、NOS、ET与CGRP的变化

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中国老年学杂志 2007年第15期27卷 1468-1470页

作者：孙淑红戚双双孙臣友温州医学院解剖学教研室浙江温州325035 温州医学院第二附属医院药剂科

目的探讨T2DM大鼠血清及生殖器官中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量变化和相互关系,及其对雄性大鼠生殖器官的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,其中20只制备T2DM模型,余为对照组。实验结束时... 详细信息

目的探讨T2DM大鼠血清及生殖器官中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)的含量变化和相互关系,及其对雄性大鼠生殖器官的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,其中20只制备T2DM模型,余为对照组。实验结束时,观察生殖器官组织的病理改变,并测定上述各指标的变化。结果T2DM大鼠模型制备成功。NO含量和NOS活性均显著低于对照组(P<0.01),ET浓度明显高于对照组(P<0.01)。血清、阴茎中CGRP含量均低于对照组(P<0.05),但睾丸、附睾中CGRP含量与对照组比较无显著差异。睾丸中ET与CGRP、NO含量均呈负相关。结论T2DM时大鼠生殖器官均受到不同程度的损害;糖尿病时上述指标的变化结果可能是导致其功能紊乱,进而造成不育症的原因。

关键词： 2型糖尿病一氧化氮一氧化氮合酶内皮素降钙素基因相关肽

别孕烯醇酮对APPswe/PSEN1小鼠黑质多巴胺能神经元的影响

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解剖学报 2015年第3期46卷 317-323页

作者：张鹏戚双双谢明琦廖敏刘芬周鹏崔怀瑞孙臣友温州医科大学基础医学院人体解剖学教研室浙江温州325035 温州医科大学基础医学院神经科学研究所浙江温州325035 温州医科大学附属第二医院育英儿童医院药剂科浙江温州325000 温州医科大学基础医学院组织学胚胎学教研室浙江温州325035

目的评估别孕烯醇酮(APα)对阿尔茨海默病(AD)小鼠黑质(SN)酪氨酸羟化酶(TH)神经元数目的影响。方法 31只4月龄雄性小鼠采用免疫荧光染色观察和计算各种免疫阳性细胞的数目。结果双转基因AD小鼠(2×Tg AD)APα水平和TH神经元数目均明显... 详细信息

目的评估别孕烯醇酮(APα)对阿尔茨海默病(AD)小鼠黑质(SN)酪氨酸羟化酶(TH)神经元数目的影响。方法 31只4月龄雄性小鼠采用免疫荧光染色观察和计算各种免疫阳性细胞的数目。结果双转基因AD小鼠(2×Tg AD)APα水平和TH神经元数目均明显减少,且出现在β-淀粉样斑块形成之前。给予APα处理可预防2×Tg AD小鼠SN总神经元、TH神经元和TH/5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)神经元数目的下降,但对纹状体TH神经纤维吸光度下降无影响。此外,APα能增加2×Tg AD小鼠新生成熟神经元的数目,但对新生胶质细胞数目无影响。结论 2×Tg AD小鼠体内低水平APα与多巴胺能神经元下降相关,外源性APα能够通过增加新生TH神经元的形成来恢复2×Tg AD小鼠TH神经元的下降。

关键词：阿尔茨海默病黑质别孕烯醇酮新生神经元形成免疫荧光双转基因AD小鼠

Ⅱ型糖尿病雄性大鼠血清、生殖器官生物化学及组织学变化的实验研究

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生殖与避孕 2003年第4期23卷 200-204,T002,T003页

作者：孙臣友夏克栋李守文王淑秋邢凤友华中科技大学同济医学院武汉430030 温州医学院温州325027 佳木斯大学病理生理学教研室佳木斯154003

目的 :观察和探讨型糖尿病雄性大鼠血清、睾丸、附睾和阴茎中 NO、NOS、SOD和 MDA含量的变化和相互关系 ,及其对雄性大鼠生殖器官的影响。方法 :4～ 6月龄 Wistar雄性大鼠 30只 ,随机分为型糖尿病模型组 2 0只和对照组 1 0只。饲以... 详细信息

目的 :观察和探讨型糖尿病雄性大鼠血清、睾丸、附睾和阴茎中 NO、NOS、SOD和 MDA含量的变化和相互关系 ,及其对雄性大鼠生殖器官的影响。方法 :4～ 6月龄 Wistar雄性大鼠 30只 ,随机分为型糖尿病模型组 2 0只和对照组 1 0只。饲以高糖 -高脂饲料后 ,取血清及组织 ,光镜下观察各组织的病理改变 ,并测定各指标的变化。结果 : 型糖尿病大鼠模型制备成功 ;糖尿病大鼠与正常比较 ,显示睾丸曲细精管数量减少 ,管壁呈纤维样变 ;睾丸间质小血管内皮细胞增生 ,管壁纤维组织增生显著 ;附睾管腔内精子数量减少或缺如 ;阴茎海绵体平滑肌数量减少 ,纤维结缔组织增生。糖尿病大鼠血清及生殖器官中 NO含量和 NOS、SOD活性均显著低于对照组 ,MDA浓度明显高于对照组。相关分析表明 ,睾丸中 SOD活性与 MDA含量呈负相关 ,NO含量与 NOS活性呈正相关。结论 :II型糖尿病时睾丸、附睾及阴茎组织均受到不同程度的损害 ;糖尿病时自由基产生增加及清除障碍导致血清及生殖器官中 MDA、SOD与 NO、NOS发生变化 ,且这些变化可导致睾丸、附睾和阴茎功能紊乱。

关键词： Ⅱ型糖尿病大鼠生殖器官生物化学组织学

姜黄素对快速老化小鼠学习与记忆功能及海马Ca^(2+)/CaMKⅡ水平的影响

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中国中西医结合杂志 2011年第3期31卷 376-380页

作者：孙臣友戚双双孙淑红周鹏崔怀瑞唐茂林温州医学院解剖学教研室浙江温州325035 温州医学院第二附属医院药剂科浙江温州325027

目的探讨不同浓度的姜黄素对快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse,SAM)学习与记忆的影响和可能的机制。方法将小鼠随机分为SAMR1正常对照组,SAMP8模型对照组,SAMP8+溶剂(花生油)对照组以及SAMP8+低、中、高浓度姜黄素处理组,... 详细信息

目的探讨不同浓度的姜黄素对快速老化小鼠(senescence-accelerated mouse,SAM)学习与记忆的影响和可能的机制。方法将小鼠随机分为SAMR1正常对照组,SAMP8模型对照组,SAMP8+溶剂(花生油)对照组以及SAMP8+低、中、高浓度姜黄素处理组,灌胃持续25天。实验结束次日,通过Morris水迷宫测试各组小鼠学习和记忆成绩的变化;测定各组小鼠海马组织[Ca2+]i浓度;通过Western blot和RT-PCR观测Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和钙调蛋白(calmodulin,CaM)mR-NA在海马组织的表达情况。结果 SAMP8模型对照组小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期明显延长;海马组织[Ca2+]i明显增高;海马膜中CaMKⅡ表达量降低;海马组织CaMmRNA的水平明显降低(P<0.05,P<0.01)。经中、高浓度姜黄素处理的SAMP8小鼠隐蔽平台的逃避潜伏期显著缩短(P<0.01)。经低、中和高浓度姜黄素处理的SAMP8组小鼠海马组织[Ca2+]i均明显降低;海马组织膜中CaMKⅡ表达量均明显增加;海马组织CaMmRNA水平均明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论姜黄素能够通过降低海马组织[Ca2+]i超载,增加海马组织CaMmRNA水平及海马膜上CaMKⅡ表达来改善SAMP8小鼠的学习和记忆能力,此作用呈剂量依赖效应。

关键词：快速老化小鼠姜黄素学习和记忆钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ

促神经元发生作为Alzheimer病治疗新策略的研究进展

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神经解剖学杂志 2014年第1期30卷 124-128页

作者：张驰豪张鹏戚双双崔怀瑞陈世新孙臣友温州医科大学第一临床医学院温州医科大学基础医学院人体解剖教研室温州医科大学基础医学院神经科学研究所温州医科大学附属第二医院药剂科温州325035

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）是高龄人群记忆力缺陷最常见的类型，是一种严重的中枢神经系统退行性疾病，伴有广泛的脑组织萎缩，特别是内侧颞叶，以海马萎缩尤为明显。

关键词： Alzheimer病钙稳态别孕烯醇酮(APα) 神经元发生

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慢性复合应激增强大鼠空间学习和记忆能力

生理学报 2004年第5期56卷 615-619页

作者：刘能保李辉刘向前孙臣友陈少容张敏海刘少纯汪薇曦华中科技大学同济医学院解剖学系组织胚胎学教研室武汉430030

本文观察了慢性复合应激对大鼠学习与记忆功能的影响。实验采用成年 Wistar 大鼠, 将其随机分成应激组和对照组。采用垂直旋转、睡眠剥夺、噪音刺激和夜间光照4 种应激原, 无规律地交替刺激动物 6 周, 每天6 h, 制作慢性复合应激动物模... 详细信息

本文观察了慢性复合应激对大鼠学习与记忆功能的影响。实验采用成年 Wistar 大鼠, 将其随机分成应激组和对照组。采用垂直旋转、睡眠剥夺、噪音刺激和夜间光照4 种应激原, 无规律地交替刺激动物 6 周, 每天6 h, 制作慢性复合应激动物模型。采用 Morris 水迷宫和 Y- 迷宫测试大鼠学习与记忆成绩,并用 Cresyl violet 染色法对大鼠海马结构进行神经细胞计数。结果显示,应激组动物慢性复合应激后, 在 Morris 水迷宫内寻找隐蔽平台所需的时间(潜伏期)比对照组的明显地短(P<0.05), 表明应激鼠的空间记忆能力明显强于对照鼠;在 Y- 迷宫内寻找安全区的正确率比对照组的明显地高(P<0.05), 表明应激鼠的明暗分辨学习能力明显强于对照鼠; 应激鼠慢性复合应激后, 其海马结构齿状回、CA3 和CA1 区神经细胞密度极明显地高于对照鼠(P<0.001)。这些结果提示, 慢性复合应激可增强大鼠空间记忆能力和明暗分辨学习能力。本文并对慢性复合应激模式增强大鼠学习和记忆能力的可能原因进行了讨论。

关键词：慢性复合应激学习与记忆 Morris水迷宫 Y-迷宫海马