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古尔图病毒核蛋白的原核表达纯化及ELISA检测方法的建立

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中华预防医学杂志 2022年第6期56卷 824-830页

作者：蒋柏勇阿来·沙力塔那美丽排提·玉素甫张敬媛王俊忠邓菲张渝疆孙素荣新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046 中国科学院武汉病毒研究所武汉430064 华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430022 新疆疾病预防控制中心乌鲁木齐830092

目的获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原,并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法人工合成密码子优化的GTV-NP编码基因,克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒,转化至BL21(DE3)。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot... 详细信息

目的获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原,并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法人工合成密码子优化的GTV-NP编码基因,克隆至pET32a(+)载体,构建重组表达质粒,转化至BL21(DE3)。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原,建立并优化GTV IgG抗体间接ELISA检测方法,并对其进行评价和初步应用。结果成功构建原核表达质粒pET32a-NP,重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,大小约为44 kD,Western blot结果表明重组蛋白与GTV阳性血清具有良好的抗原性。建立的ELISA法特异性强、敏感性高、批内和批间的变异系数均小于10%具有较好的重复性;检测结果与IFA检测结果符合率达到92.77%。结论建立的GTV NP抗体检测ELISA方法的敏感性、重复性和特异性均较好。

关键词：核蛋白类酶联免疫吸附测定血清学试验表达纯化古尔图病毒

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克里米亚-刚果出血热相关生物学研究进展

中华流行病学杂志 2011年第7期32卷 727-732页

作者：孙素荣孟卫卫张渝疆新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心

克里米亚-刚果出血热（CCHF）是一种典型的蜱传自然疫源性疾病，是在特定的生态环境中由病原体（克里米亚-刚果出血热病毒，CCHFV）、宿主媒介、动物（蜱类、大型草食动物和啮齿动物）构成的不依赖于人类而在自然界中可独立存在的传染... 详细信息

克里米亚-刚果出血热（CCHF）是一种典型的蜱传自然疫源性疾病，是在特定的生态环境中由病原体（克里米亚-刚果出血热病毒，CCHFV）、宿主媒介、动物（蜱类、大型草食动物和啮齿动物）构成的不依赖于人类而在自然界中可独立存在的传染性疾病，广泛分布于非洲、欧洲、亚洲和中东地区的30多个国家。

关键词：克里米亚-刚果出血热生物学研究

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新疆黄精凝集素基因的克隆、序列分析和表达

生物工程学报 2008年第3期24卷 387-394页

作者：孙素荣张智李素丽胡俊张富春新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

用百合科黄精属植物凝集素基因的保守序列为引物,从新疆黄精的叶中克隆出黄精凝集素的全长cDNA。序列分析表明,克隆获得的新疆黄精凝集素(Polygonatum roseum agglutinin,PRA)基因完整的ORF片段大小为550 bp,编码1条长159个氨基酸肽链,... 详细信息

用百合科黄精属植物凝集素基因的保守序列为引物,从新疆黄精的叶中克隆出黄精凝集素的全长cDNA。序列分析表明,克隆获得的新疆黄精凝集素(Polygonatum roseum agglutinin,PRA)基因完整的ORF片段大小为550 bp,编码1条长159个氨基酸肽链,没有内含子,其中N端的28个氨基酸是信号肽。对新疆黄精凝集素cDNA序列同源性的分析比较发现,黄精属植物凝集素基因之间有很高的同源性(92%)。氨基酸序列比对和SWISS-MODEL同源模建分析表明,PRA由12个β-折叠片组成的β-桶结构,具有与单子叶植物甘露糖结合凝集素相似的空间结构。重组质粒pGEX-4T-1-PRA和pMAL-p2x-PRA,分别转化E.coli BL21进行原核表达,新疆黄精凝集素能够以可溶性融合蛋白形式表达,分子量约为14kD。构建真核表达载体pcDNA3-PRA,免疫小鼠后获得了抗血清。免疫印迹结果显示为单一的条带,证明该抗血清具有针对PRA抗原的专一性。新疆黄精凝集素基因的克隆、原核和真核的表达以及抗血清的制备,为进一步研究凝集素蛋白的性质和功能,并为植物抗病虫基因工程研究提供有用的实验材料。

关键词：新疆黄精凝集素序列比较原核表达

大蒜生理活性物质对胃癌细胞和黑色素瘤细胞抑制作用的研究

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中成药 2010年第4期32卷 557-561页

作者：王霞苟萍孙桂琳孙素荣索菲娅新疆大学生命科学与技术学院新疆乌鲁木齐830046 新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学新疆乌鲁木齐830046

目的:研究大蒜生理活性物质对人胃癌细胞MGC-9和小鼠黑色素瘤细胞B16细胞增殖及细胞周期的影响。方法:用倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测B16细胞周期分布的影响。结果:经大蒜素及其前体物... 详细信息

目的:研究大蒜生理活性物质对人胃癌细胞MGC-9和小鼠黑色素瘤细胞B16细胞增殖及细胞周期的影响。方法:用倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测B16细胞周期分布的影响。结果:经大蒜素及其前体物质蒜氨酸、蒜氨酸酶和蒜氨酸+蒜氨酸酶处理后,MGC-9和B16细胞不同程度变圆,体积缩小,脱壁细胞增多;除蒜氨酸酶外,蒜氨酸、大蒜素和蒜氨酸+蒜氨酸酶都能诱导MGC-9和B16产生时间和剂量依赖性的增殖抑制作用,其中蒜氨酸+蒜氨酸酶的作用尤为显著。大蒜素和蒜氨酸+蒜氨酸酶阻滞B16细胞于G0/G1期。结论:本文由大蒜提取物处理后结果与已发表的临床研究相一致。

关键词：大蒜大蒜素蒜氨酸蒜氨酸酶人胃癌细胞MGC-9 小鼠黑色素瘤细胞B16 细胞增殖细胞周期

吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物诱导食管癌细胞凋亡与Bax和Bcl-2的关系

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中国药理学通报 2013年第9期29卷 1294-1297页

作者：吴婷张富春刘浪孙素荣新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室新疆大学应用化学研究所先进功能材料自治区重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的研究吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物(Ls-17)对人食管癌细胞(Eca-109)的凋亡诱导作用及对细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 MTT法检测Ls-17对Eca-109细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期分布变化及线粒体膜电位的改变,c... 详细信息

目的研究吡唑啉酮衍生物镉(Ⅱ)配合物(Ls-17)对人食管癌细胞(Eca-109)的凋亡诱导作用及对细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法 MTT法检测Ls-17对Eca-109细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期分布变化及线粒体膜电位的改变,caspase活性法检测caspase-3和9的变化,Western blot法分析Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果 Ls-17对Eca-109细胞增殖抑制的IC50值为25.12 mg·L-1,使细胞周期阻滞在G2/M期而导致细胞凋亡;能降低线粒体膜电位水平并激活caspase-3和9,使Bax/Bcl-2的比值增大。结论 Ls-17能够抑制Eca-109细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2的表达,使Bax/Bcl-2的比值升高有关。

关键词：吡唑啉酮衍生物食管癌细胞细胞增殖细胞凋亡 caspase Bax Bcl-2

重组骆驼蓬脂转移蛋白与顺铂联合抑制黑色素瘤B16细胞增殖效应的研究

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生物技术通报 2015年第12期31卷 186-192页

作者：常晨晨王燕管珊孙素荣新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

旨在探讨重组骆驼蓬脂转移蛋白(Recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)联用对鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。MTT法检测r Ph LTP、顺铂单独及联用后对鼠黑色素瘤B16细胞增殖的影响;流式... 详细信息

旨在探讨重组骆驼蓬脂转移蛋白(Recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)联用对鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。MTT法检测r Ph LTP、顺铂单独及联用后对鼠黑色素瘤B16细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的变化情况。结果显示,r Ph LTP和DDP联用后细胞生长抑制率和凋亡率显著高于DDP单独处理组(P<0.01);而且胞内ROS升高的水平均高于单独处理组(P<0.01),胞内Δψm水平均低于单独处理组,但无显著性差异。r Ph LTP可增强顺铂对B16细胞的生长抑制并促进细胞凋亡,与顺铂具有协同作用。

关键词：重组骆驼蓬脂转移蛋白顺铂鼠黑色素瘤B16 增殖抑制

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苦豆子凝集素基因的重组表达及其抗体的制备

生物技术 2013年第5期23卷 66-69页

作者：李阳刘东亮李婷婷孙素荣新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源与基因工程重点实验室新疆乌鲁木齐830046

目的:构建苦豆子凝集素基因(SAL)原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清。方法:将编码苦豆子凝集素基因(SAL)的ORF成熟肽片段分别克隆到原核表达载体pMAL-p2x和真核表达载体pcDNA3.1中;重组质粒pMAL-p2x-SAL转化大肠杆菌BL21(DE3)诱... 详细信息

目的:构建苦豆子凝集素基因(SAL)原核和真核表达载体及制备高效价的抗血清。方法:将编码苦豆子凝集素基因(SAL)的ORF成熟肽片段分别克隆到原核表达载体pMAL-p2x和真核表达载体pcDNA3.1中;重组质粒pMAL-p2x-SAL转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达。对pcDNA3.1-SAL质粒进行酶切和测序鉴定;采用"DNA prime-protein boost"策略免疫小鼠制备多克隆抗体;用ELISA和Western blot检测血清效价和特异性。结果:制备的多克隆抗体效价为1:102400;Western blot分析表明多克隆抗血清特异性较好。结论:苦豆子凝集素多克隆抗血清具有很好的特异性,为进一步研究苦豆子凝集素的生物学特性奠定了基础。

关键词：苦豆子凝集素克隆与表达联合免疫多克隆抗血清

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新疆高校科技投入产出状况分析

新疆大学学报（哲学社会科学版） 1998年第2期30卷 50-51页

作者：孙素荣古丽娜唐海庆乌鲁木齐新疆大学科研处新疆自治区教委高教处

本文参照国家教委有关资料。

关键词：新疆高校科技投入产出

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植物抗菌蛋白及其在农业中的应用研究进展

新疆农业科学 2012年第6期49卷 1073-1079页

作者：吕慧王梦竹孙素荣新疆大学生命科学与技术学院/新疆生物资源基因工程重点实验室乌鲁木齐830046

植物在长期进化过程中为了抵御外源物侵袭而产生了一些具有抗菌活性的蛋白质和肽等。在自然界中植物抗菌蛋白多种多样,多为抗真菌蛋白,依据其结构、作用机制和序列特性,可将其大体分为以下几类:病程相关蛋白、类亲环素蛋白、防御素及类... 详细信息

植物在长期进化过程中为了抵御外源物侵袭而产生了一些具有抗菌活性的蛋白质和肽等。在自然界中植物抗菌蛋白多种多样,多为抗真菌蛋白,依据其结构、作用机制和序列特性,可将其大体分为以下几类:病程相关蛋白、类亲环素蛋白、防御素及类防御素蛋白、凝集素、核糖体失活蛋白、脂转移蛋白、蛋白酶抑制剂和2S清蛋白等。随着植物抗真菌蛋白的分离纯化,植物抗病基因工程的研究的重大突破,植物抗真菌蛋白在植物抗病原菌和抗虫保护中展示出广阔的应用前景。总结植物抗真菌蛋白研究进展,对其在农业抗虫和转基因方面的应用研究作了阐述。

关键词：抗菌蛋白抗真菌农业应用