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会计学基础

1994年

作者：孙佐军等

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商业会计学

商业会计学

1987年

作者：孙佐军等

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唏哩呼噜行侠记

唏哩呼噜行侠记

逆转录病毒载体介导MGMT和MDR1基因增强人脐血CD34+细胞对联合化疗抗性的研究

丛书名：娃娃拼音童话园丛书 2

1997年

作者：孙幼军等编

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实验生物学报 2001年第3期34卷 227-233页

作者：王季石孙等军林果为费俭贵阳医学院附属医院血液科贵阳医学院药学系贵阳550004 复旦大学附属华山医院上海200040 中国科学院上海细胞生物学所上海200031

为探讨转染六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT)和多药耐药基因(MDR1)的人脐血CD34^+细胞能否同时增强对卡氮芥(BCNU)和MDR1基因靶药的抗性,应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGM... 详细信息

为探讨转染六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶基因(MGMT)和多药耐药基因(MDR1)的人脐血CD34^+细胞能否同时增强对卡氮芥(BCNU)和MDR1基因靶药的抗性,应用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)cDNA,构建双顺反子逆转录病毒载体G1Na-MGMT-IRES-MDR1,以电穿孔介导的基因转移法导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,采用含BCNU和长春新碱(VCR)的培养基克隆选择后收集重组病毒上清于单向型GP+E86与双嗜型PA317包装细胞行乒乓交互感染,将含MGMT和MDR1双耐药基因重组病毒的上清在细胞生长因子刺激下重复感染经免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人脐血CD34^+细胞,用PCR,RT-PCR,Southern blot,Northern blot,FACS和MTT等方法检测外源MGMT与MDR1基因在CD34^+细胞中的转移和表达。结果显示,DNA测序及酶切鉴定证实MGMTcDNA克隆和双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性,MACS分离纯化后的人脐血CD34^+细胞纯度平均达92%,回收率为75%,含双耐药基因重组病毒的上清最高滴度为5.8×10~5cfu/ml,逆转录病毒载体介导的双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组并获得有效表达,同时传递不同的耐药表型,应用集落计数、PCR方法测定基因转导效率分别为18%和20%,巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在,经双耐药基因修饰的脐血CD34^+细胞对BCNU的IC_(50)较对照组提高4.5倍,对VCR,柔红霉素(DNR)和秋水仙碱(COL)的IC_(50)较未转染细胞分别高7.8,6.6和5.5倍。本研究对降低联合化疗骨髓毒性作用的肿瘤临床研究奠定了实验基础。

关键词：逆转录病毒载体 MGMT MDR1基因 CD34+细胞联合化疗抗性耐药基因

造血干/祖细胞遗传学修饰对4-氢过氧化环磷酰胺、长春新碱和柔红霉素的联合抗性(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第10期22卷 87-93页

作者：王季石方琴孙等军陈剑周鑫莉林果为陆华中费俭中国 200031 贵阳医学院附属医院血液科贵阳医学院附属医院药剂科贵阳医学院附属医院药剂科贵阳医学院附属医院药剂科复旦大学医学院附属华山医院血液科复旦大学医学院附属华山医院血液科上海市血液中心上海市输血研究所中科院上海生命科学研究院细胞生物研究所贵阳 550004 the Department of Hematology of Huanshan HospitalMedical Center of Fudan UniversityShanghai200433China a postoctor 贵阳 550004 贵阳 550004 贵阳 550004 上海 200040 上海 200040 上海 200051 上海

目的:探讨经醛脱氢酶基因(ALDH-3)和多药耐药基因(MDR1)遗传学修饰的人外周血造血干/祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺(4-HC)和MDR1基因靶药的抗性。方法:构建同时含ALDH-3和MDR1双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDR1,经... 详细信息

目的:探讨经醛脱氢酶基因(ALDH-3)和多药耐药基因(MDR1)遗传学修饰的人外周血造血干/祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺(4-HC)和MDR1基因靶药的抗性。方法:构建同时含ALDH-3和MDR1双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDR1,经电穿孔导入PA317包装细胞,将免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人外周血CD34~+细胞用含有ALDH-3和MDR1双耐药基因重组病毒的上清感染,用PCR、RT-PCR、Southern blot、Nor-thern blot、ACS和MTT等方法检测外源ALDH-3与MDR1基因在CD34~+细胞中的转移和表达。结果:用PCR与酶切分析法鉴定了双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性,双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组,并获得有效表达,应用集落计数测定基因转导效率为18％。巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在。经双耐药基因修饰的CD34~+造血干/祖细胞对4-HC的IC50较对照组提高4.5倍,对多药耐药基因靶药(长春新碱和柔红霉素)的IC50较未转染细胞分别高6.6和7.8倍。结论:逆转录病毒载体介导双耐药基因转导外周血造血干/祖细胞高效共表达可降低联合化疗骨髓毒性。

关键词：基因疗法 MDR基因遗传载体基因表达造血干细胞

新福菌素对人白血病细胞株K562的凋亡诱导作用

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中国药学杂志 2004年第8期39卷 594-596页

作者：方琴孙等军王季石王培民张维张旭吴正宇刘丰丰贵阳医学院附属医院药剂科贵阳医学院附属医院血液科复旦大学附属华山医院上海200040

目的研究新福菌素对人白血病细胞株K562的体外抑瘤效应及其作用机制。方法应用MTT比色法观察新福菌素对细胞的生长抑制作用;显微镜观察细胞的生长变化和结构改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡和Bel-2蛋白表达情况。结果新... 详细信息

目的研究新福菌素对人白血病细胞株K562的体外抑瘤效应及其作用机制。方法应用MTT比色法观察新福菌素对细胞的生长抑制作用;显微镜观察细胞的生长变化和结构改变;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡和Bel-2蛋白表达情况。结果新福菌素对人白血病细胞株K562有较强的体外增殖抑制作用。新福菌素能诱导K562细胞凋亡,同时伴随有Bel-2蛋白表达下调。结论新福菌素对白血病细胞株K562有较强的抗瘤效应,其可能与Bel-2蛋白下调引起的细胞凋亡有关。

关键词：新福菌素白血病 K562细胞细胞凋亡诱导作用抑瘤效应

Angiostatin基因真核表达载体的构建及对B16黑色素瘤体内生长抑制作用

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实验生物学报 2002年第4期35卷 303-306页

作者：王季石孙等军郭礼和林果为费检中国科学院上海细胞生物学研究所上海200031 复旦大学医学院附属华山医院血液科上海200040

Angiostatin是一种新发现的对肿瘤生长有特异抑制作用的抗血管生成因子,实验已证实其对多种肿瘤有明显的抑制作用。本文报告构建了含Angiostatin基因的真核表达载体pAG3,通过建立荷瘤小鼠模型来研究Angiostatin对人黑色素瘤B16的原位生... 详细信息

Angiostatin是一种新发现的对肿瘤生长有特异抑制作用的抗血管生成因子,实验已证实其对多种肿瘤有明显的抑制作用。本文报告构建了含Angiostatin基因的真核表达载体pAG3,通过建立荷瘤小鼠模型来研究Angiostatin对人黑色素瘤B16的原位生长,植入及与化疗药物DTIC的联合作用等来探讨Angiostatin裸DNA肌肉注射的体内抗瘤效应。实验结果表明Angiostatin可明显抑制C57荷瘤小鼠的肿瘤生长;人黑色素瘤B16细胞植入前5天肌肉注射pAG3能显著阻止正常C57小鼠新肿瘤的形成;但在pAG3与DTIC联合化疗实验中,两者未表现出明显的增强效应。本实验为拓展非病毒介导的Angiostatin抗血管生成基因治疗途径奠定了基础。

关键词：肿瘤生长抑制作用真核表达载体人黑色素瘤荷瘤小鼠抗血管生成肌肉注射 n基因联合作用病毒

榄香烯对人肝癌细胞7402、宫颈癌细胞Hela的凋亡诱导作用及下调Bcl-2蛋白表达

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复旦学报（医学版） 2001年第5期28卷 403-405页

作者：孙等军方琴王季石贵阳医学院药学系贵阳550000 贵阳医学院附属医院药剂科贵阳550000 复旦大学附属华山医院血液科上海200040

目的　研究中药榄香烯对人肝癌细胞 740 2、宫颈癌细胞Hela的体外抑瘤效应及其作用机制。方法　应用MTT比色法观察榄香烯对细胞的生长抑制作用 ;荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变 ;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡、周期... 详细信息

目的　研究中药榄香烯对人肝癌细胞 740 2、宫颈癌细胞Hela的体外抑瘤效应及其作用机制。方法　应用MTT比色法观察榄香烯对细胞的生长抑制作用 ;荧光显微镜和透射电镜观察细胞结构的改变 ;DNA凝胶电泳和流式细胞术等分析细胞凋亡、周期变化及Bcl 2蛋白表达情况。结果　榄香烯对 740 2和Hela细胞有较强的体外增殖抑制作用。榄香烯能诱导 740 2和Hela细胞凋亡 ,同时伴随有Bcl 2蛋白表达下调。结论　榄香烯对 740 2、Hela细胞有较强的抗瘤效应 ,其可能与Bcl

关键词：榄香烯细胞凋亡 Hela细胞 Bcl-2蛋白肝癌 7402细胞宫颈癌

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用

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中华肿瘤杂志 2009年第8期31卷 582-586页

作者：孙萍张良明孙等军董亮亮青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院肿瘤内科 264000

目的研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用及其可能的机制。方法将不同浓度的沙利度胺作用于人肝癌细胞株SMMC-7721，采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测沙利度胺对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。将SMMC07721细胞培养... 详细信息

目的研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用及其可能的机制。方法将不同浓度的沙利度胺作用于人肝癌细胞株SMMC-7721，采用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测沙利度胺对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。将SMMC07721细胞培养至对数生长期，采用DNA琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜观察、流式细胞仪检测等方法观察沙利度胺处理后SMMC-7721细胞的凋亡梯度、形态学变化和凋亡率，并对凋亡调控蛋白caspase-3的表达进行测定。采用酶联免疫吸附（ELISA）法测定不同浓度的沙利度胺处理后SMMC-7721细胞表达血管内皮生长因子（VEGF）的变化。结果沙利度胺的浓度从3．125μg／ml增至200μg／ml时，其对SMMC-7721细胞的增殖抑制率从11．7％增至34．2％；当沙利度胺的浓度〉25μg／ml时，其对SMMC07721细胞的增殖抑制作用明显强于空白对照组（P〈0．05）。200μg／ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞24h后，行琼脂糖凝胶电泳，可见到DNA梯形条带；48h后梯形条带更明显，并且在荧光显微镜下可见SMMC-7721细胞出现核固缩和核裂解现象。200μg／ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞12、24、48和72h时，碘化丙啶（e1）法检测SMMC-7721细胞的凋亡率分别为3．1％±0．5％、8．4％±1．3％、19．4％±3．5％和25．8％±2．1％，24h起的凋亡率均明显高于空白对照组SMMC-7721细胞48h的自然凋亡率（1．6％±0．6％，均P〈O．05）。50、100和200μg／ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞48h时，AnnexinV—FITC／PI双标法检测SMMC-7721细胞的凋亡率分别为8．7％±1．2％、16．8％±2．5％和25．4％±4．5％，均明显高于空白对照组SMMC-7721细胞48h的自然凋亡率（2．1％±0．5％，均P〈0．05）。随着沙利度胺浓度的增加，表达caspase-3蛋白的SMMC-7721细胞数量不断增加，而SMMC-7721细胞中VEGF的含量却逐渐下降。结论沙利度胺可能通过诱导肝癌细胞的凋亡、抑制肿瘤血管的生成而发挥双重抗肿瘤生长的作用。

关键词：沙利度胺 SMMC-7721细胞凋亡血管内皮生长因子