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中国植物病理学会第十一届全国会员代表大会暨2018年学术年会

作者：蒲运丹张永至孙现超西南大学植物保护学院

IP-L(Interaction Protein L)是从烟草cDNA文库中筛选出的与ToMV外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主蛋白,两者共定位于本氏烟细胞表皮质膜。ToMV CP和IP-L相互作用可能影响叶绿体的稳定性导致萎黄。通过酵母双杂交筛选本氏烟文库,获...

IP-L(Interaction Protein L)是从烟草cDNA文库中筛选出的与ToMV外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主蛋白,两者共定位于本氏烟细胞表皮质膜。ToMV CP和IP-L相互作用可能影响叶绿体的稳定性导致萎黄。通过酵母双杂交筛选本氏烟文库,获得一个与IP-L互作的蛋白,为了研究其与IP-L之间的相互作用及烟草花叶病毒(Tobacco mosaicvirus,TMV)侵染下的表达变化。采用双酶切的方法构建PGADT7-TSJT1和PGBKT7-IP-L酵母表达载体以及pCV-cYFP-IP-L和pCV-nYFP-TSJT1双分子荧光互补表达载体。将重组载体质粒PGADT7-TSJT1和PGBKT7-IP-L共转化至AH 109酵母菌株,验证烟草IP-L与候选蛋白TSJT1的相互作用;利用农杆菌EHA105介导法在本氏烟中表达双分子荧光互补表达载体pCV-cYFP-IP-L和pCV-nYFPTSJT1,激光共聚焦显微镜下观察相互作用产生的YFP荧光信号;利用实时荧光定量PCR(RTqPCR)分析本氏烟各个组织中TSJT1的表达量,TMV胁迫下及IP-L沉默的本氏烟TSJT1的表达变化情况;构建亚细胞定位载体pCV-mGFP-TSJT1,pRFP-AtRop10作为质膜marker,激光共聚焦观察融合TSJT1的GFP荧光信号定位情况。结果显示与IP-L互作的蛋白分子量为25.6kDa,其对应ORF全长714bp,NCBI对比显示其与预测的多种茄科植物的茎特异蛋白同源性达到99%,与拟南芥的一个铝诱导蛋白具有73.3%的同源性。通过酵母双杂交系统和双分子荧光互补技术进一步确认IP-L与TSJT1的相互作用;RT-qPCR分析显示,TSJT1在本氏烟根、茎、叶、花中均有表达,在叶中表达量最高;亚细胞定位显示TSJT1定位于本氏烟细胞质膜;采用摩擦接种方法,用绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)标记的TMV侵染本氏烟,在接种2d、3d、4d后,TSJT1在叶片内表达量随接种时间呈明显上调趋势。TMV侵染4d后的叶片内表达量是对照组的2倍,并且差异达到显著水平。在TRV介导的IP-L沉默本氏烟中,TSJT1的表达也显著下降。该结果表明,TSJT1与IP-L在本氏烟中有类似的组织表达模式,在叶中表达量最高,且在TMV侵染本氏烟时表达量显著上调。

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四川番茄上双生病毒的复合侵染检测

四川番茄上双生病毒的复合侵染检测

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中国植物病理学会2011年学术年会

作者：熊艳周常勇杨水英孙现超青玲西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室中国农业科学院柑橘研究所

＜正＞番茄黄化曲叶病（Tomato yellow leaf curl disease,TYLCD）是世界范围内制约番茄生产和发展的重要病害之一。十余年来,TYLCD在我国由南向北,自西向东快速扩展,并于2006年开始在我国上海、浙江、江苏、山东、河北和台湾等多个省... 详细信息

＜正＞番茄黄化曲叶病（Tomato yellow leaf curl disease,TYLCD）是世界范围内制约番茄生产和发展的重要病害之一。十余年来,TYLCD在我国由南向北,自西向东快速扩展,并于2006年开始在我国上海、浙江、江苏、山东、河北和台湾等多个省市相继暴发成灾,造成巨大损失。据报道,全世界至少有57种双生病毒可侵染番茄引起黄化和曲叶症状。在我国,泰国番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl Thailand virus,TYLCTHV）、番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）、中国番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl China virus,TYLCCNV）、烟草曲茎病毒（Tobacco curly shoot virus,TbCSV）、台湾番茄曲叶病毒(Tomato leaf curl Taiwan virus,

关键词：四川番茄双生病毒 PCR RCA-RFLP 复合侵染

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温州蜜柑萎缩病毒编码大外壳蛋白基因克隆分析

温州蜜柑萎缩病毒编码大外壳蛋白基因克隆分析

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中国植物保护学会2009年学术年会

作者：李羽韩勇赵刚青玲杨水英孙现超西南大学植物保护学院植物病毒学研究室

＜正＞温州蜜柑萎缩病毒（Satsuma dwarf virus,SDV）引起的温州蜜柑萎缩病首先在日本报道,是以日本为主的少数亚洲国家柑橘上的重要病毒病害。该病害可以通过嫁接、汁液和土壤传播,并通过苗木运输进行远距离传播,可以为害几乎所有的柑... 详细信息

＜正＞温州蜜柑萎缩病毒（Satsuma dwarf virus,SDV）引起的温州蜜柑萎缩病首先在日本报道,是以日本为主的少数亚洲国家柑橘上的重要病毒病害。该病害可以通过嫁接、汁液和土壤传播,并通过苗木运输进行远距离传播,可以为害几乎所有的柑橘属和近缘属的植物。SDV为双分体病毒,包含两条正单链RNA分子:RNA1和RNA2。Iwanami对日本株系S-58的基因组全序列进行的测定分析,确定SDV RNA1和RNA2全长分别为6 795bp和5 345bp,经对比分析后建议将其定为豇豆花叶病毒科,豇豆花叶病毒属和线虫传多面体

关键词：温州蜜柑萎缩病毒大外壳蛋白序列分析

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重庆辣椒上番茄斑萎病毒的血清学检测及分子鉴定

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园艺学报 2017年第3期44卷 487-494页

作者：孙淼荆陈沉楚成茹吴根土孙现超谢艳刘勇青玲西南大学植物保护学院重庆400716 浙江大学农业与生物技术学院杭州310058 湖南省植物保护研究所长沙410125

为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-E... 详细信息

为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。

关键词：辣椒番茄斑萎病毒 Dot-ELISA RT-PCR

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重庆烟区烟草靶斑病病原菌鉴定及菌丝融合群分析

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烟草科技 2023年第9期56卷 24-29页

作者：黄可珍靳瑞瑞陈姗张帅秦平伟孙现超陈国康陈海涛西南大学植物保护学院重庆市400715 中国烟草总公司重庆市公司酉阳分公司重庆市409800 中国烟草总公司重庆市公司彭水分公司重庆市409600 中国烟草总公司重庆市公司烟叶分公司重庆市400023

为明确重庆各烟区烟草靶斑病的病原菌种类与病害发生情况,对重庆市黔江区水市乡、涪陵区武陵山乡、武隆区接龙乡、万州区孙家镇、酉阳土家族苗族自治县和彭水苗族土家族自治县烟草靶斑病病害发生进行了调查,并通过组织分离法对典型发病... 详细信息

为明确重庆各烟区烟草靶斑病的病原菌种类与病害发生情况,对重庆市黔江区水市乡、涪陵区武陵山乡、武隆区接龙乡、万州区孙家镇、酉阳土家族苗族自治县和彭水苗族土家族自治县烟草靶斑病病害发生进行了调查,并通过组织分离法对典型发病叶片的病原菌进行分离、纯化,观察纯化菌株在PDA培养基上的形态特征,采用菌丝块接种法测定纯化菌株的致病性,通过玻片对峙法观察其与标准菌株的菌丝融合情况,并使用通用引物ITS1/ITS4对13个纯化菌株的rDNA-ITS序列进行扩增,使用MEGA 11软件对扩增序列进行分析比对,构建系统发育树。结果表明,纯化菌株的形态特征与立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kühn)一致,且对烟苗叶片具有致病力;菌丝融合群测定发现,纯化菌株与立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG-3融合群的菌丝完全融合;rDNA-ITS序列Blast比对及系统发育树分析显示,其与立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG-3融合群以97%的支持率聚于同一分支上。因此,确定重庆烟区烟草靶斑病的病原菌为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)AG-3融合群。

关键词：烟草靶斑病立枯丝核菌融合群重庆烟区

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火焰光度计检出限的不确定度评定

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工业计量 2019年第S1期 86-87页

作者：简艳孙现超袁凌吕婷湖北省计量测试技术研究院

文章针对火焰光度计的检定方法,建立数学模型,分析不确定度来源,合理的对火焰光度计检出限的不确定度进行了评定,为今后火焰光度计检定或校准工作提供参考。

关键词：火焰光度计检出限不确定度评定

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重庆綦江木瓜病虫害发生及控制

重庆綦江木瓜病虫害发生及控制

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植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会

作者：孙现超张志远曾文东西南大学植物保护学院

木瓜属蔷薇科灌木植物,果实形状和大小与梨相似,皮薄、肉厚、质嫩、味甘酸、气香、品质优良。主要生长在海拔600～1 200m地区,人工种植一般3～4年开始挂果,5年后进入盛产期。木瓜具有较高的观赏价值和药用价值,可用于庭院和行道等的绿化以

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ToMV-K 98K复制酶与运动蛋白转基因珊茜烟对TMV抗性分析

ToMV-K 98K复制酶与运动蛋白转基因珊茜烟对TMV抗性分析

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中国植物病理学会第九届全国会员代表大会暨2010年学术年会

作者：武改霞孙现超青玲杨水英西南大学植物保护学院植物病毒学研究室

番茄花叶病毒弱毒疫苗(ToMV-K)是将番茄花叶病毒强株(L-TMV)用亚硝酸处理后,分离筛选而得到的对TMV及ToMV感染有明显保护作用,且免疫特性和遗传性的弱毒株。对其基因组cDNA的核苷酸序列进行了测定分析表明,ToMV-K的5个功能性ORFs分别编...

番茄花叶病毒弱毒疫苗(ToMV-K)是将番茄花叶病毒强株(L-TMV)用亚硝酸处理后,分离筛选而得到的对TMV及ToMV感染有明显保护作用,且免疫特性和遗传性的弱毒株。对其基因组cDNA的核苷酸序列进行了测定分析表明,ToMV-K的5个功能性ORFs分别编码98.5kDa/126kDa/183kDa的复制酶,27kDa的运动蛋白和17.6kDa的外壳蛋白。我们通过室内摩擦接种,对比分析了转ToMV-K运动蛋白的珊茜烟(X-Nm)和共转ToMV-K98K复制酶与运动蛋白的珊茜烟(X-Nr-Nm)(中国科学院微生物研究所邱并生研究员赠送)对TMV的抗性。结果显示:接种TMV 3d后,在2种转基因珊茜烟接种叶片上都出现了枯斑,但TMV在X-Nm上产生枯斑的大小和数量明显大于TMV在X-Nr-Nm上产生枯斑的大小和数量;5d后TMV在X-Nm上产生的枯斑明显增大,并开始联合在一起;20d后,TMV在X-Nm上产生的枯斑连成一片,造成发病部位大面积枯死,而TMV在X-Nr-Nm上产生的枯斑仍然是单斑坏死(图1)。这表明ToMV-K 98K复制酶与运动蛋白两个基因串联介导的双价抗性高于ToMV-K运动蛋白单基因介导的抗性。提示我们在利用转基因工程进行抗病育种过程中,可以利用多个基因串联来达到更好的抗病效果。

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两种植物病毒抑制剂胁迫对PVX基因的变异影响分析

两种植物病毒抑制剂胁迫对PVX基因的变异影响分析

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2014年中国植物保护学会学术年会

作者：赵城钢赵雪君孙现超西南大学植物保护学院

马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）又称马铃薯潜隐病毒（Potato latent virus）或马铃薯轻花叶病毒（Potato mild mosaic virus）,是马铃薯X病毒属（Potexvirus）的模式成员,遍布于全世界马铃薯种植区。自然条件下植物病毒的基因组不... 详细信息

马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）又称马铃薯潜隐病毒（Potato latent virus）或马铃薯轻花叶病毒（Potato mild mosaic virus）,是马铃薯X病毒属（Potexvirus）的模式成员,遍布于全世界马铃薯种植区。自然条件下植物病毒的基因组不断发生着变异。外界环境胁迫对植物病毒对进化变异具有重要的推动作用。农业生产上,用植物病毒抑制剂控制病毒在植物体内繁殖扩展是控制病毒病害的措施之一。为研究不同种病毒抑制剂是否会引起植物病毒基因组发生变异,以及发生变异的主要区域。我们以农杆菌介导的PVX侵染性克隆获得的病毒为原始毒源,选取两种病毒抑制剂香菇多糖、毒氟磷对侵染PVX的烟草植株进行处理。烟草侵染病毒后每隔10天喷一次病毒抑制剂,并设置清水对照,连续3次后,将植株上的病毒重新接种到新种的烟草植株上,重复上述操作并保存病毒样品,共处理7次。针对PVX不同功能域设计引物,将每次保存的病毒样品提取RNA,RT-PCR并测序,并将序列用DNAStar比对。目前结果表明,PVX的CP基因在两种病毒抑制剂多代处理后与清水对照比对都没有发生明显变化。其他功能域处理序列尚在测序中,到底是否发生变异,以及变异集中区域是何处,尚在实验分析中。

关键词：烟草 PVX 病毒抑制剂变异分析

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贵州烟区烟草花叶病主要病毒种类检测

贵州烟区烟草花叶病主要病毒种类检测

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庆祝重庆市植物保护学会成立10周年暨植保科技论坛

作者：青玲包凌云陈炎杨水英孙现超窦彦霞西南大学植物保护学院

采用抗原直接包被酶联免疫吸附测定(ELISA)对贵州烟区烟草花叶病样品进行了病毒种类检测。52个烟草样品共检测到烟草花叶病毒(TMV)及黄瓜花叶病毒(CMV)两种病毒,其检出率分别为32.69%和46.15%,未发现这两种病毒复合侵染,感染CMV的样品... 详细信息

采用抗原直接包被酶联免疫吸附测定(ELISA)对贵州烟区烟草花叶病样品进行了病毒种类检测。52个烟草样品共检测到烟草花叶病毒(TMV)及黄瓜花叶病毒(CMV)两种病毒,其检出率分别为32.69%和46.15%,未发现这两种病毒复合侵染,感染CMV的样品全部采自遵义烟区,而采自安顺烟区的样品仅检测到TMV。阳性样品中TMV含量较低,CMV含量较高。

关键词：烟草黄瓜花叶病毒烟草花叶病毒检测

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