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温州蜜柑萎缩病毒大外壳蛋白基因克隆分析

果树学报 2010年第3期27卷 457-460页

作者：孙现超赵刚周常勇青玲西南大学植物保护学院植物病毒学研究室重庆400716 国家柑橘工程技术研究中心中国农业科学院柑橘研究所重庆400712

利用RT-PCR技术从感染温州蜜柑萎缩病毒的叶片中扩增出SDV大外壳蛋白(Large coat protein,CPL),将CPL克隆到pGEM-T载体后进行测序分析。DNA序列分析表明,SDV FJ的CPL基因cDNA序列全长为1329bp,编码443个氨基酸。与同属其他病毒序列对比... 详细信息

利用RT-PCR技术从感染温州蜜柑萎缩病毒的叶片中扩增出SDV大外壳蛋白(Large coat protein,CPL),将CPL克隆到pGEM-T载体后进行测序分析。DNA序列分析表明,SDV FJ的CPL基因cDNA序列全长为1329bp,编码443个氨基酸。与同属其他病毒序列对比分析结果显示,所得序列与日本报道的SDV S-58株系核苷酸和氨基酸同源性最高,分别为98.1%和98.6%。核苷酸序列与S-58相比25处发生了替换突变,其中T和C之间的替换频率最高,占绝对优势。

关键词：温州蜜柑萎缩病毒大外壳蛋白克隆分析

大麦条纹花叶病毒中国株编码βC蛋白可以自身相互作用

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植物病理学报 2010年第6期40卷 593-600页

作者：孙现超赵文军薛杨西南大学植物保护学院重庆400716 中国农业科学院柑桔研究所重庆400712 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所北京100029

以分别含有BSMV-CH基因组3个组分ds-cDNA全长的pMD-α、pMD-β和pMD-γ质粒为模板,PCR扩增BSMV-CH编码各蛋白基因,克隆至酵母双杂交载体,检测各蛋白是否存在自身激活特性,用酵母双杂交分析BSMV-CH编码蛋白之间的相互作用情况,测定β-半... 详细信息

以分别含有BSMV-CH基因组3个组分ds-cDNA全长的pMD-α、pMD-β和pMD-γ质粒为模板,PCR扩增BSMV-CH编码各蛋白基因,克隆至酵母双杂交载体,检测各蛋白是否存在自身激活特性,用酵母双杂交分析BSMV-CH编码蛋白之间的相互作用情况,测定β-半乳糖苷酶活性确认蛋白在酵母体内的作用,Western-blot分析蛋白的体外相互作用。结果表明成功克隆到BSMV-CH编码蛋白基因,并正确克隆至酵母双杂交载体,酵母双杂交检测未发现BSMV-CH编码蛋白之间的相互作用,但确定BSMV-CH编码的βC蛋白可以自身相互作用,体外可以单体或二聚体形式存在。

关键词：大麦条纹花叶病毒 βC蛋白酵母双杂交自身相互作用

普通烟草铁氧还蛋白Ⅰ的原核表达、抗体制备及在ToMV侵染烟草体内表达分析

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中国农业科学 2010年第19期43卷 3981-3987页

作者：孙现超李勇周常勇青玲西南大学植物保护学院中国科学院微生物研究所中国农业科学院柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心

【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-... 详细信息

【目的】构建普通烟草铁氧还蛋白I(ferredoxin I,Fdn-Ⅰ)原核表达载体,表达可溶性Fdn-Ⅰ蛋白,并制备其多克隆抗体,分析Fdn-Ⅰ在ToMV侵染烟草叶片内的表达情况。【方法】以Fdn-Ⅰ全长cDNA为模板,用PCR扩增Fdn-Ⅰ,克隆至原核表达载体pEGX-6p-1,构建Fdn-Ⅰ与GST融合表达载体pEGX-Fdn-Ⅰ,重组质粒转化原核表达菌株BL21,优化GST-Fdn-Ⅰ可溶性表达条件后大量表达蛋白,用GST亲和层析法纯化获得可溶性GST-Fdn-Ⅰ蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体。ELISA测定抗体效价,Western印迹法检测抗体的特异性和ToMV侵染前后烟草叶片内Fdn-Ⅰ的表达情况。【结果】在温度为28℃,IPTG诱导浓度为0.3mmol·L-1条件下表达出大小为41.3kD的可溶性融合蛋白。纯化获得约4mg可溶性蛋白,免疫家兔制备了效价为1/6400的多克隆抗体。Western印迹结果表明,该抗体可以与Fdn-Ⅰ的原核和酵母表达产物特异性结合。分析表明Fdn-Ⅰ在ToMV侵染后烟草叶片内含量明显低于其在健康烟草叶片内的含量。【结论】通过Fdn-Ⅰ大肠杆菌中的可溶性表达,制备获得了其高效价特异性多克隆抗体,利用该抗体检测表明ToMV侵染烟草降低了Fdn-Ⅰ的表达。

关键词：铁氧还蛋白Ⅰ 原核表达抗体番茄花叶病毒

PaLCuCNV和TYLCCNV复合侵染引起更严重的番茄黄化曲叶病

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园艺学报 2014年第2期41卷 268-276页

作者：熊艳周常勇李茵王春艳孙现超青玲西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室重庆400716 中国农业科学院柑桔研究所重庆400712

从四川攀枝花市田问采集36份表现严重矮化、黄化和曲叶症状的番茄病株样本，利用双生病毒简并引物PA／PB从所有样本中均扩增得到约500bp的片段，经全序列测定及分析，检测出中国番木瓜曲叶病毒（Papaya彪日厂curl Chinavirus，PaLCuCNV... 详细信息

从四川攀枝花市田问采集36份表现严重矮化、黄化和曲叶症状的番茄病株样本，利用双生病毒简并引物PA／PB从所有样本中均扩增得到约500bp的片段，经全序列测定及分析，检测出中国番木瓜曲叶病毒（Papaya彪日厂curl Chinavirus，PaLCuCNV）和中国番茄黄化曲叶病毒（Tomatoyellow leaf curl Chinavirus，TYLCCNV），这两种双生病毒的复合侵染率达97．2％。系统进化分析表明，这两种双生病毒分别与已报道的PaLCuCNV河南番茄分离物（PaLCuCNV-[HeNZMI]）及TYLCCNV云南元谋烟草分离物（TYLCCNV-[Y295]）的核苷酸序列相似性最高，分别为99．1％和97．9％。检测发现，所有分离物均伴随有卫星DNAp分子，全序列测定表明所得9个DNAp分子均为TYLCCNV的卫星TYLCCNB，且与其四川番茄分离物（TYLCCNB．[SC65]）的核苷酸序列相似性最高，为87．7％～94．5％。本文首次报道PaLCuCNV与TYLCCNV／TYLCCNB病害复合体复合侵染番茄引起更严重的番茄黄化曲叶病。

关键词：番茄中国番木瓜曲叶病毒中国番茄黄化曲叶病毒全序列复合侵染卫星DNAB分子

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植物病原棒形杆菌属分类最新进展

植物保护学报 2019年第1期46卷 25-32页

作者：王丽田茜王溪桥赵文军孙现超西南大学植物保护学院重庆400715 中国检验检疫科学研究院北京100176 甘肃出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心兰州730000

植物病原棒形杆菌属Clavibacter的分类随着研究的深入和鉴定技术水平的不断进步一直在发生着变化,之前普遍认可的观点为该属仅含有1个种,即密执安棒形杆菌C. michiganensis,种下又分为5个亚种,分别为密执安亚种C. michiganensis subsp. ... 详细信息

植物病原棒形杆菌属Clavibacter的分类随着研究的深入和鉴定技术水平的不断进步一直在发生着变化,之前普遍认可的观点为该属仅含有1个种,即密执安棒形杆菌C. michiganensis,种下又分为5个亚种,分别为密执安亚种C. michiganensis subsp. michiganensis、诡橘亚种C. michiganensis subsp. insidiosus、尼布拉斯加亚种C. michiganensis subsp. nebraskensis、环腐亚种C. michiganensis subsp. sepedonicus和花叶亚种C. michiganensis subsp. tessellarius。最近几年又有4个新亚种陆续被报道,分别为菜豆亚种C. michiganensis subsp. phaseoli、辣椒亚种C. michiganensis subsp. capsici、加利福尼亚亚种C. michiganensis subsp. californiensis和智利亚种C. michiganensis subsp. chilensis。随着全基因组分析和多基因分析技术在细菌分类上的应用,之前被广泛认可的4个亚种(诡橘亚种、尼布拉斯加亚种、环腐亚种和花叶亚种)及新亚种辣椒亚种也曾被建议定义为种,即C. insidiosus、C. nebraskensis、C. sepedonicus、C. tessellarius和C. capsici。为便于研究人员了解该属最新的分类研究现状,本文对植物病原棒形杆菌属的分类历史及最新分类现状进行了系统梳理,期望为该属病原菌的风险评估、检测鉴定等研究提供分类学参考。

关键词：棒形杆菌属亚种分类最新进展

伴随中国番茄黄化曲叶病毒的卫星DNAβ在本氏烟中的种群变异

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西南师范大学学报（自然科学版） 2010年第5期35卷 110-115页

作者：任芳青玲熊艳孙现超西南大学植物保护学院重庆400715

采用根癌土壤杆菌介导接种和分子克隆技术,分析中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellowleaf curl China virus,TYLCCNV)Y10分离物(Y10)的伴随卫星DNAβ(Y10β)在本氏烟中的种群变异.结果显示表明:本氏烟中Y10β种群所有克隆均发生不同程度... 详细信息

采用根癌土壤杆菌介导接种和分子克隆技术,分析中国番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellowleaf curl China virus,TYLCCNV)Y10分离物(Y10)的伴随卫星DNAβ(Y10β)在本氏烟中的种群变异.结果显示表明:本氏烟中Y10β种群所有克隆均发生不同程度的变异,在接种60 d及120 d后其种群突变频率分别为2.48×10-3和2.54×10-3,表明该卫星DNAβ在同一寄主体内的侵染时间对其种群变异水平没有明显影响;Y10β种群的碱基突变位点主要分布于DNAβ的富A(A-rich)区,在卫星共同区(SCR)内碱基突变位点最少;其碱基突变类型以A→G,G→A,T→C突变及碱基G缺失等突变类型的比例较高,并且在A-rich区内出现多个克隆在同一核苷酸位点发生相同突变的现象.

关键词：中国番茄黄化曲叶病毒卫星DNAβ 种群变异碱基突变

细菌CHB101抑制油菜菌核病菌的机理研究

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作物杂志 2007年第2期 42-44页

作者：杨水英李振轮青玲孙现超西南大学植物保护学院重庆副教授400716 西南大学资源与环境学院

通过比较菌丝形态,以及几丁质酶活性变化与抑菌能力相关性研究,得出如下结论:油菜菌核病菌在CHB101菌和其浓缩培养液作用下,菌丝出现细胞壁溃解、细胞质凝聚成颗粒状并外渗、侧面产生圆形小孢子等相同形态变化;培养液中几丁质酶活性越强... 详细信息

通过比较菌丝形态,以及几丁质酶活性变化与抑菌能力相关性研究,得出如下结论:油菜菌核病菌在CHB101菌和其浓缩培养液作用下,菌丝出现细胞壁溃解、细胞质凝聚成颗粒状并外渗、侧面产生圆形小孢子等相同形态变化;培养液中几丁质酶活性越强,对油菜菌核病菌核萌发及菌丝生长的抑制能力越强。初步结论,CHB101菌抑制油菜菌核病的能力与其胞外几丁质酶活性成显著正相关。

关键词：几丁质酶油菜菌核病菌抗菌机理细菌CHBl01

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3.85%病毒必克防治辣椒病毒病

植物保护 2002年第5期28卷 51-52页

作者：孙现超李爱荣刘翠娟安德荣西北农林科技大学植保学院陕西杨凌712100

室内生物测定表明 :3 85 %病毒必克水乳剂对黄瓜花叶病毒接种前施药的预防效果为 79 97% ,接种后施药的防治效果为 74 93% ,均明显高于对照药剂 1 5 %植病灵和 2 0 %病毒A。小区药剂对比试验 ,3 85 %病毒必克 5 0 0倍液喷药 ,对辣椒病... 详细信息

室内生物测定表明 :3 85 %病毒必克水乳剂对黄瓜花叶病毒接种前施药的预防效果为 79 97% ,接种后施药的防治效果为 74 93% ,均明显高于对照药剂 1 5 %植病灵和 2 0 %病毒A。小区药剂对比试验 ,3 85 %病毒必克 5 0 0倍液喷药 ,对辣椒病毒病的防治效果达 78 1%。

关键词：病毒必克辣椒病毒病黄瓜花叶病毒药效试验

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马铃薯早疫病菌的分离鉴定和生物学特性研究

中国蔬菜 2012年第6X期 72-77页

作者：何凯杨水英黄振霖青玲孙现超李振轮西南大学植物保护学院重庆400715 重庆市农业技术推广总站重庆400020 西南大学资源环境学院重庆400715

采用组织分离法对重庆市巫溪县马铃薯早疫病病原菌进行分离鉴定,并对该菌的生物学特性进行研究。结果表明:重庆地区马铃薯早疫病菌丝有横隔和分支;分生孢子梗单生或丛生;分生孢子倒棒状或手雷形,大小为(46.32～156.33)μm×(11.58～28.... 详细信息

采用组织分离法对重庆市巫溪县马铃薯早疫病病原菌进行分离鉴定,并对该菌的生物学特性进行研究。结果表明:重庆地区马铃薯早疫病菌丝有横隔和分支;分生孢子梗单生或丛生;分生孢子倒棒状或手雷形,大小为(46.32～156.33)μm×(11.58～28.95)μm,具纵横隔膜。结合rDNA-ITS序列分析,确定为茄链格孢菌(Alternaria sonali Sorauer)。生物学特性研究表明,光照对菌丝生长影响不显著,但黑暗条件有利于产孢;菌丝生长最适温度为27～28℃,最适pH值为6;分生孢子萌发最适温度为30℃,最适pH值为7～8。营养特性研究表明,蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖和淀粉都比葡萄糖更有利于菌丝生长,其中蔗糖、果糖、乳糖效果较好;甘氨酸和硝态氮能促进菌丝生长,铵态氮抑制菌丝生长。

关键词：马铃薯早疫病茄链格孢形态特征生物学特性