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烟草NtRAX基因的克隆和序列分析

中国烟草科学 2012年第5期33卷 14-18页

作者：高晓明张泽坤王卫锋刘贯山李凤霞崔萌萌孙玉合农业部烟草生物学与加工重点实验室中国农业科学院烟草研究所青岛266101 青岛农业大学青岛266109

根据GenBank中拟南芥RAX基因序列,在烟草EST数据库中进行Blastp检索,获得与之同源性较高的蛋白质序列,选取同源性最高的蛋白质序列所对应的核酸序列,设计引物,获得中间片段,再运用中间片段设计引物,应用RACE方法获得其5′和3′末端cDNA... 详细信息

根据GenBank中拟南芥RAX基因序列,在烟草EST数据库中进行Blastp检索,获得与之同源性较高的蛋白质序列,选取同源性最高的蛋白质序列所对应的核酸序列,设计引物,获得中间片段,再运用中间片段设计引物,应用RACE方法获得其5′和3′末端cDNA序列,将获得的3段序列拼接,结合全长克隆测序验证,获得一个新的普通烟草基因,将其命名为NtRAX(NCBI登录号为JQ228591)。NtRAX的cDNA全长为1112 bp,5′端非编码区96 bp,3′端非编码区62 bp,编码区长度为954 bp,编码317个氨基酸,预测的分子量是35.42 KDa。对该基因进行序列分析和功能预测,得出该基因属于MYB基因家族,是具有转录激活活性的烟草腋芽分生组织形成的调控基因。

关键词：烟草腋芽基因 NtRAX

烟草不同胞质来源雄性不育系小孢子发育的细胞学观察

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中国烟草学报 2011年第4期17卷 37-42页

作者：李凤霞崔萌萌杨爱国王卫峰孙玉合中国农业科学院烟草研究所/中国农业科学院烟草遗传改良与生物技术重点开放实验室青岛266101

为比较可育系与不育系小孢子发育过程的异同,明确两种不育类型小孢子败育的时期、方式以及发生机理,为合理利用烟草CMS种质提供细胞学资料,对烟草两种同核异质不育系MS G-28、86-6的小孢子败育过程进行了细胞学比较观察,并用其保持系G-2... 详细信息

为比较可育系与不育系小孢子发育过程的异同,明确两种不育类型小孢子败育的时期、方式以及发生机理,为合理利用烟草CMS种质提供细胞学资料,对烟草两种同核异质不育系MS G-28、86-6的小孢子败育过程进行了细胞学比较观察,并用其保持系G-28作对照。结果发现:与保持系G-28的小孢子发育特点及发育过程相比,不育系MS G-28败育特点为绒毡层异常增生,绒毡层与小孢子粘连、小孢子粘连、解体等,败育阶段以小孢子母细胞时期、四分体以及单核小孢子时期为主;不育系86-6败育特点为无孢原细胞分化、无造孢细胞分化,绒毡层肥大、液泡化、延迟解体以及小孢子粘连、空壳小孢子等,败育阶段主要在造孢细胞分化之前、小孢子母细胞时期。G-28花粉外形饱满,圆形,生活力强;而两种不育系花粉外形不规则、空瘪,无生活力。得出结论:绒毡层异常是两种类型不育系败育的主要原因,但MS G-28败育高峰主要在小孢子发育的后期,而86-6败育高峰主要在小孢子发育的前期。

关键词：烟草小孢子发育细胞质雄性不育石蜡切片

烟草TILLING技术体系的建立及NtPhyB基因的筛选

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中国烟草科学 2014年第2期35卷 32-36页

作者：宗鹏李凤霞王倩刘贯山龚达平陈雅琼孙玉合中国农业科学院烟草研究所烟草行业基因资源利用重点实验室青岛266101 中国农业科学院研究生院北京100081

定向诱导基因组局部突变技术（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING）是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中，通过对正反向荧光引物使用量... 详细信息

定向诱导基因组局部突变技术（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING）是一种新近发展起来的高通量检测点突变的反向遗传学方法。本研究首次将TILLING技术用于EMS处理的烟草突变体筛选中，通过对正反向荧光引物使用量的摸索，确定了10μL PCR体系中IRDye-700标记的正向引物（1μM）适用量为0.32～0.64μL，IRDye-800标记的反向引物（1μM）适用量1.12～1.6μL；对异源双链CELⅠ酶切体系实验表明，10μL PCR产物中加入0.6μL CEL I酶，1.5μL 10× Buffer酶切效果最好。从而建立并优化了适用于普通烟草基因组研究的TILLING技术体系。在此基础上，以NtPhyB为目标基因，在1000份0.6% EMS诱变的M2突变体中进行筛选，共得到13个突变体，该基因突变频率约为1/94 kb。本试验建立的TILLING筛选体系能够快速、高效地筛选任意已知序列基因的突变体，对烟草功能基因组研究具有重要意义。

关键词：功能基因组学烟草化学诱变突变体

烟草NtbHLH112基因的克隆、鉴定及表达模式分析

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中国烟草科学 2020年第5期41卷 8-14页

作者：孙晋浩牛文利陈志华余祥文丁安明杨兴有孙玉合中国农业科学院烟草研究所烟草行业烟草基因资源利用重点实验室青岛266101 四川省烟草科学研究所成都610000

bHLH转录因子在植物响应逆境胁迫过程中起着极为重要的调控作用,克隆和验证烟草中bHLH相关基因可为烟草抗性育种提供理论依据。本研究从普通烟草品种K326中克隆出一个NtbHLH112基因,通过生物信息学方法分析了NtbHLH112功能结构域,利用... 详细信息

bHLH转录因子在植物响应逆境胁迫过程中起着极为重要的调控作用,克隆和验证烟草中bHLH相关基因可为烟草抗性育种提供理论依据。本研究从普通烟草品种K326中克隆出一个NtbHLH112基因,通过生物信息学方法分析了NtbHLH112功能结构域,利用亚细胞定位及转录激活试验进行了功能鉴定,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析了其在不同逆境胁迫下的表达模式。结果表明,NtbHLH112具有典型的bHLH结构域且进化较为保守,定位在细胞核,具有转录激活的活性。进化分析表明,NtbHLH112与番茄Slb HLH112和辣椒CabHLH112同源。表达模式分析表明,NtbHLH112基因具有组织表达特异性,在叶部表达量较高,并且受到盐、干旱、冷胁迫及ABA处理诱导。因此,NtbHLH112转录因子可能在烟草非生物胁迫应答过程中发挥重要作用。

关键词：烟草 NtbHLH112转录因子非生物胁迫

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烟草核心引物的筛选

烟草核心引物的筛选

烟草新胞质雄性不育系86-6的创造及其利用

中国烟草学会2013年学术年会

作者：张兴伟任民刘艳华王志德孙玉合农业部烟草生物学与加工重点实验室中国农业科学院烟草研究所

通过12份不同烟草种质类型,筛选均匀分布于烟草24条连锁群上的700对SSR标记,综合考虑PIC值、扩增带型统计的难易程度及引物的重复性,获得54对SSR核心引物,建立了核心引物数据库。本研究有利于规范引物筛选程序、提高引物筛选效率,对烟... 详细信息

通过12份不同烟草种质类型,筛选均匀分布于烟草24条连锁群上的700对SSR标记,综合考虑PIC值、扩增带型统计的难易程度及引物的重复性,获得54对SSR核心引物,建立了核心引物数据库。本研究有利于规范引物筛选程序、提高引物筛选效率,对烟草种质资源的遗传多样性分析、核心种质构建、指纹图谱构建以及种子真伪性和纯度的鉴定等都具有现实意义。

关键词：核心种质核心引物数据库 SSR

来源： cnki会议评论

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烟草新胞质雄性不育系86-6的创造及其利用

烟草GA代谢相关基因ga1和ga2的克隆和表达分析

中国科协首届学术年会

作者：孙玉合丁昌敏张历历卜锅章龚明良中国烟草遗传育种研究(北方)中心

普通烟草(N.tabacum 2n=48)栽培品种革新1号与野生粉蓝烟草(N.glauca 2n=24)叶肉原生质体(1:1)在PEG(6000),高Ca2+、高pH值溶液诱导下融合,培养分化获得再生植株,经形态学、细胞学和过氧化物同工酶鉴定,

关键词：

来源： cnki会议评论

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中国烟草科学 2014年第1期35卷 102-107页

作者：丁安明陈雅琼 Zahid Hussain 康乐张蕴睿崔萌萌王倩孙玉合中国农业科学院烟草研究所烟草行业烟草基因资源利用重点实验室青岛266100 中国农业科学院研究生院北京100081

为了解赤霉素(gibberellic acids,GA)在烟草生长发育中的作用,本研究利用同源克隆和RACE技术分离了3个烟草种GA代谢相关基因ga1和ga2的6条序列,对其进行了序列比对和进化分析;并利用荧光定量表达分析研究了其在林烟草和普通烟草中的表... 详细信息

为了解赤霉素(gibberellic acids,GA)在烟草生长发育中的作用,本研究利用同源克隆和RACE技术分离了3个烟草种GA代谢相关基因ga1和ga2的6条序列,对其进行了序列比对和进化分析;并利用荧光定量表达分析研究了其在林烟草和普通烟草中的表达谱。结果表明,相关基因在烟草属和茄科作物中保守性很高;普通烟草中克隆的ga1和ga2可能起源于绒毛状烟草。表达分析表明,ga1和ga2在林烟草生长发育早期和茎伸长期分别在叶和茎中的表达量显著高于其他组织。

关键词：烟草赤霉素荧光定量表达分析

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特香型烤烟新品系在恩施试种获得成功

中国烟草科学 1998年第3期19卷 14-17页

作者：李方强曹仕明张宜盛李建平解爱书卜锅章龚明良丁昌敏张历历孙玉合湖北省白肋烟研究所湖北省巴东县烟草专卖局中国农业科学院烟草研究所中国烟草总公司青州烟草研究所

特香型烤烟新品系是中国烟草总公司青州烟草研究所用体细胞杂交法，经多年选育而成。其最大的优点是香气质好，香气量足。１９９４～１９９６年在恩施市试种，经不同海拔高度种植表明，最适宜海拔高度６００～８００ｍ的缓坡地种植。经... 详细信息

特香型烤烟新品系是中国烟草总公司青州烟草研究所用体细胞杂交法，经多年选育而成。其最大的优点是香气质好，香气量足。１９９４～１９９６年在恩施市试种，经不同海拔高度种植表明，最适宜海拔高度６００～８００ｍ的缓坡地种植。经品种（系）比较试验，筛选出适宜恩施州种植的新品系—９２－８。该品系香气质好，香气量足，外观质量好，烟叶化学成分协调，施肥投入少，产量和产值比当地烤烟主栽品种Ｋ３２６略高，深受烟农欢迎。

关键词：特香型烤烟新品系试种结果分析

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烟草CONSTANS同源基因的克隆与分析

中国烟草科学 2013年第3期34卷 60-64页

作者：陆莹刘艳华任民牟建民张兴伟孙玉合王志德中国农业科学院烟草研究所青岛266101 中国农业科学院研究生院北京100081

日照长度影响植物的生长发育,在拟南芥中CONSTANS是植物光周期开花途径中的关键基因。利用同源序列法结合RACE技术从短日照烟草品种Kutsaga.Mammoth10中分离出了开花时间相关的CO（CONSTANS）同源基因,并命名为NtCO1（基因登录号JN02253... 详细信息

日照长度影响植物的生长发育,在拟南芥中CONSTANS是植物光周期开花途径中的关键基因。利用同源序列法结合RACE技术从短日照烟草品种Kutsaga.Mammoth10中分离出了开花时间相关的CO（CONSTANS）同源基因,并命名为NtCO1（基因登录号JN022535.1）。经序列分析,NtCO1全长1493 bp,具有完整的开放阅读框（ORF,81~1292 bp）,编码403个氨基酸;具有CO蛋白典型的结构域;氨基末端有两个B-box结构,羧基末端有CCT保守结构域。氨基酸同源性比对发现,NtCO1与茄科CO同源蛋白一致性最高,同马铃薯CO序列一致性达到86.5%;与拟南芥CO蛋白和水稻Hd1氨基酸序列一致性也分别达到50%和43.7%。基因表达分析表明,NtCO1在叶片中优势表达,茎中次之,根中最弱。

关键词： CONSTANS(CO)基因烟草克隆分析 NtCO1