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作者：孙海柏天津医科大学

学位级别：硕士

目的耐多药结核的实验室诊断目前采用的金标准是全自动分枝杆菌检测系统(BACTEC MGIT960)液体培养以及比例药敏法,准确率较高,但检测过程耗时较长,容易耽误患者最佳诊疗时间,从而延误病情,本文采用细菌学、免疫学、分子生物学的快速检... 详细信息

目的耐多药结核的实验室诊断目前采用的金标准是全自动分枝杆菌检测系统(BACTEC MGIT960)液体培养以及比例药敏法,准确率较高,但检测过程耗时较长,容易耽误患者最佳诊疗时间,从而延误病情,本文采用细菌学、免疫学、分子生物学的快速检测技术与金标准进行比较,筛选出及时、准确的实验室快速鉴定及药敏检测方法,为临床及早诊断提供参考依据。通过分析机体内T细胞及其相关细胞因子变化规律,评估体内的免疫功能的恢复情况从而推断诊疗的效果,同时也为耐多药结核的患者基因多态性的研究以及该病种进行基因免疫制剂治疗开拓了新的思路和方向。方法耐多药结核组是选自2016年3月至2017年3月在天津市结核病定点医院就诊的结核科确诊的73例耐多药结核患者且实验室诊断中MGIT960液体培养法均为阳性、药敏检测利福平以及异烟肼均为耐药,对照组为排除肺结核病组共计73例,第一部分同阶段进行结核分枝杆菌的鉴定采用PCR-线性探针杂交酶显色法(Polymerase chain reaction linear probe method)、痰涂片荧光染色法、结核感染T细胞检测-免疫斑点法(***-TB)、抗结核分枝杆菌抗体(Anti tuberculosis antibody TB-Ab)四种方法同时进行检测,并与金标准进行比较,筛选出特异性和灵敏性均较高的快速鉴定方法,同时采用PCR-线性探针杂交酶显色法(线性探针法)进行药敏检测与MGIT960比例药敏检测法的结果进行对比分析。第二部分:运用BD流式细胞仪动态检测T细胞变化情况,分析CD4+、CD8+、CD4+/CD8+与正常对照组进行比较分析;采用流式微球技术(Cytometric bead array CBA)检测不同组血清中IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、IL-17水平变化,同时依据治疗效果分为培养转阴组及培养未转阴组在治疗周期中的变化规律,各组间分别将检测结果进行统计学分析比较研究其变化规律。结果73例确诊耐多药结核病人以MGIT960培养及药敏检测结果做为金标准,采用四种快速检查方法进行检测及分析,所得结果:四种鉴定的快速实验室方法线性探针法、结核抗体、***、痰涂片的检测的灵敏度分别为82.19%,95%CI(77.7%,86.6%)、56.16%,95%CI(50.4%,61.9%)、43.84%,95%CI(38.1%,49.6%)、23.29%,95%CI(18.3%,28.2%),差异具有统计学意义,检测的特异性分别为95.89%,95%CI(93.6%,98.2%)、61.64%,95%CI(55.9%,67.3%)、60.27%,95%CI(54.5%,65.9%)、97.26%,95%CI(95.3%,99.2%),线性探针法与结核抗体以及与***存在差异有统计学意义,与结核涂片法无显著差异。对四种方法的操作时间进行比较分析得出的结果为:抗酸染色痰涂片需要2小时,线性探针技术需要2小时,结核分枝杆菌抗体检测需要3个小时,***-TB需要24小时,相比金标准均缩短了检测时限。所以在快速诊断方法中综合比较线性探针技术作为新近发展起来的检测项目无论从灵敏度和特异性都相比之下都较高,检测时限也相对较短,推荐线性探针法作为首选的快速鉴定方法。同时在结核菌耐药性检测中以MGIT960比例法药敏检测利福平耐药性为标准,线性探针法利福平耐药率为82.19%,对照组敏感率为100%,Kappa值为0.701,两种方法在检测利福平耐药性上具有较高的一致性,线性探针法异烟肼耐药率为83.56%,对照组敏感率为100%,Kappa值为0.722,两种方法在检测异烟肼耐药性上具有较高的一致性,因此线性探针法作为耐药性结核快速诊断的首选筛选方法,并进行临床推广。耐多药结核患者用药前T细胞亚群与正常对照组进行比较分析,总T细胞检测两组无统计学差异P>0.05,CD4T细胞较对照组P>0.05无统计学差异,CD8T细胞较对照组有所增高P0.05无统计学差异,初治患者:患者临床症状较重,免疫反应性较强所以随病情变化的IL-17及IFN-γ含量较高;复治组:记忆型T细胞释放大量细胞因子,以IL-2、IL-4变化为主含量较高。培养转阴组:IL-6、TNF-α、IL-17、IL-10、IFN-γ、IL-2各阶段呈现规律性变化,且逐渐恢复到正常水平,视为治疗有效,可持续原治疗方案,说明免疫系统逐渐恢复;培养未转阴组患者:用药前、用药后2个月、6个月7种细胞因子均无出现规律性变化,用药2月、6月较用药前呈现相反的变化趋势提示可能治疗未成功,机体内的结核菌仍未减少,免疫功能仍未彻底恢复。结论在快速诊断耐多药结核的

关键词：耐多药结核线性探针法 T细胞细胞因子快速诊断评估

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Xpert MTB/RIF在结核病诊断中的研究进展

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广东医学 2016年第12期37卷 1894-1899页

作者：刘佳庆张丽霞孙海柏吴敏天津市海河医院天津市呼吸疾病研究所国家中医药管理局中医药防治传染病重点研究室 300350

结核病（tuberculosis,TB）目前仍然是严重危及全球的公共卫生问题之一,2014年大约有960万新发病例和150万死亡病例,其中只有大约600万新发病例上报到世界卫生组织,余下大约360万新发病例漏诊或漏报,并且,约3.3%的新发病例和20%的接受... 详细信息

结核病（tuberculosis,TB）目前仍然是严重危及全球的公共卫生问题之一,2014年大约有960万新发病例和150万死亡病例,其中只有大约600万新发病例上报到世界卫生组织,余下大约360万新发病例漏诊或漏报,并且,约3.3%的新发病例和20%的接受过抗结核治疗的病例为耐多药结核（multi drug resistant tuberculosis,MDR-TB）,2014年约新发48万MDR—TB，大约19万死于MDR—TB。

关键词：结核病诊断 Xpert MTB/RIF tuberculosis 耐多药结核涂片镜检公共卫生结核性胸腔积液阴性样假阳性特异性

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脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展

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天津医药 2021年第11期49卷 1216-1222页

作者：郭明日朱彧孙海柏天津市海河医院天津大学海河医院检验科国家中医药管理局传染病重点研究室 300350

脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一,对大多数抗结核药物耐药,临床治疗难度大。脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异,临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物... 详细信息

脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一,对大多数抗结核药物耐药,临床治疗难度大。脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异,临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南(2020版),按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)分枝杆菌药敏试验标准(2018版)进行脓肿分枝杆菌药敏试验,建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。

关键词：非结核分枝杆菌微生物敏感性试验抗药性,细菌抗菌药脓肿分枝杆菌复合群

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血浆中1-3-β-D-葡聚糖对诊断肺结核合并真菌感染的意义

血浆中1-3-β-D-葡聚糖对诊断肺结核合并真菌感染的意义

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中华医学会结核病学分会2010年学术年会

作者：孙海柏天津市海河医院检验科

目的探讨肺结核合并真菌感染患者血浆1-3-β-D-葡聚糖检测的临床意义。方法选取我院结核科痰真菌培养阳性和阴性的病人各100例分别定量检测血浆中1-3-β-D-葡聚糖的含量。结果痰真菌培养阴性血浆1-3-β-D-葡聚糖含量为[7.23士5.62)pg/L... 详细信息

目的探讨肺结核合并真菌感染患者血浆1-3-β-D-葡聚糖检测的临床意义。方法选取我院结核科痰真菌培养阳性和阴性的病人各100例分别定量检测血浆中1-3-β-D-葡聚糖的含量。结果痰真菌培养阴性血浆1-3-β-D-葡聚糖含量为[7.23士5.62)pg/L;痰真菌培养阳性组为(245.335士240.25)pg/L,经t检验分析,痰真菌培养阳性和阴性组1-3-β-D-葡聚糖平均值差异非常显著。结论血浆1-3-β-D-葡聚糖检测可在拟诊肺结核并发真菌感染早期为临床医生提供机体是否感染真菌的可靠信息。

关键词： 1-3-β-D-葡聚糖肺结核真菌感染

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结核抗体滴度与痰结核菌培养的比较分析

结核抗体滴度与痰结核菌培养的比较分析

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中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：孙海柏天津市海河医院

目的探讨结核抗体在结核病患者中的诊断,疗效观察及治疗中的价值。方法通过对182例血清中结核抗体阳性患者与结核菌痰培养后的结果进行对比分析。结果抗体滴度在400- 700u/ml,700-900u/ml,900u/ml以上的病例痰结核菌培养阳性率分别是71.... 详细信息

目的探讨结核抗体在结核病患者中的诊断,疗效观察及治疗中的价值。方法通过对182例血清中结核抗体阳性患者与结核菌痰培养后的结果进行对比分析。结果抗体滴度在400- 700u/ml,700-900u/ml,900u/ml以上的病例痰结核菌培养阳性率分别是71.95%,85.25%,97.44%。结论结核病人结核抗体的滴度高低与痰结核菌培养阳性率高低具有相关性。

关键词：结核抗体检测痰培养结核病

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利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)快速诊断淋巴结核及其耐药性

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中国现代医学杂志 2017年第8期27卷 137-139页

作者：孙海柏张丽霞秦中华郭明日张东白虹天津市医科大学基础医学院天津300070 天津市海河医院天津300350

目的探讨Xpert MTB/RIF试验在诊断淋巴结核及其对利福平耐药的意义。方法选取156例疑似脓肿性淋巴结核患者的脓液分别进行960液体变色培养基培养、涂片镜检、传统比例法药敏试验以及Xpert MTB/RIF试验检测,分析Xpert MTB/RIF试验检测MT... 详细信息

目的探讨Xpert MTB/RIF试验在诊断淋巴结核及其对利福平耐药的意义。方法选取156例疑似脓肿性淋巴结核患者的脓液分别进行960液体变色培养基培养、涂片镜检、传统比例法药敏试验以及Xpert MTB/RIF试验检测,分析Xpert MTB/RIF试验检测MTB及其耐药性的敏感性和特异性。结果以液体变色培养基培养试验作为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测淋巴结核的敏感性和特异性分别为(95.42%,84.00%),Kappa值为0.77,两者一致性较好。以传统比例法药敏试验为金标准,Xpert MTB/RIF试验检测利福平耐药的敏感性和特异性分别为(70.0%,98.42%)两种方法检测结果比较差异无统计学意义。结论 Xpert MTB/RIF试验检测淋巴结核及其耐药性与传统的检测方法比较具有较高的敏感性和特异性,并且检测时间短、及时的优点。

关键词：淋巴结核利福平耐药敏感性特异性 Xpert MTB/RIF

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细胞因子检测在结核分枝杆菌感染中的研究进展

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国际检验医学杂志 2018年第4期39卷 465-468页

作者：孙海柏张丽霞天津市海河医院检验科天津300350

该文对细胞因子在结核分枝杆菌感染中的研究进展进行了综述。干扰素-γ在多种结核病的诊断中灵敏度和特异度均较高;周期性检测白细胞介素(IL)-2可以提示结核病患者疗效,且对耐多药肺结核患者进行IL-2及GM-CSF的联合免疫治疗可能得到较... 详细信息

该文对细胞因子在结核分枝杆菌感染中的研究进展进行了综述。干扰素-γ在多种结核病的诊断中灵敏度和特异度均较高;周期性检测白细胞介素(IL)-2可以提示结核病患者疗效,且对耐多药肺结核患者进行IL-2及GM-CSF的联合免疫治疗可能得到较好的效果;肿瘤坏死因子-α对肺外结核具有辅助诊断意义,且可以为结核病疗效的判断提供参考;IL-4在结核病中的检测意义还需进一步研究探讨;IL-17对潜伏性、活动性结核病的诊断特异度及灵敏度较高;IL-10在结核病患者体内的周期性变化对疗效评估具有一定意义,但无法预测结核分枝杆菌阳性患者预后;细胞因子多态性的检测须符合统计学要求的大样本量,相关影响因素必须相对一致才能得到相对较为精准的结果,为结核病的预测提供依据。对结核病患者体内细胞因子水平、相关受体水平、基因多态性等方面进行检测对结核预测、诊断、治疗、判断预后等具有重要的意义。

关键词：结核细胞因子进展

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Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960在结核病诊断中的应用

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山东医药 2016年第37期56卷 93-95页

作者：郭明日张丽霞周洪经李玉明孙海柏张立天津市海河医院天津300350 天津市呼吸疾病研究所国家中医药管理局中医药防治传染病重点研究室

目的探讨Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960在结核病诊断中的应用价值。方法选择180例受试者,其中肺结核98例、肺外结核35例及非结核病47例。所取受试者痰、支气管灌洗液、脑脊液等标本分别采用Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BAC... 详细信息

目的探讨Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960在结核病诊断中的应用价值。方法选择180例受试者,其中肺结核98例、肺外结核35例及非结核病47例。所取受试者痰、支气管灌洗液、脑脊液等标本分别采用Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960单独检测及联合检测,用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价各检测方法的诊断效能,采用Kappa检验分析Xpert MTB/RIF与BACTEC MGIT960对利福平耐药性检测的一致性。结果 T-SPOT·TB、T-SPOT·TB+MGIT960、Xpert MTB/RIF+MGIT960+T-SPOT·TB对肺结核与肺外结核检测的阳性率高于Xpert MTB/RIF、MGIT 960单独检测及二者联合检测(P均0.05),但均大于Xpert MTB/RIF、MGIT 960、Xpert MTB/RIF+MGIT960的AUC(P均<0.05)。Xpert MTB/RIF与BACTEC MGIT960对利福平耐药性检测具有较高的一致性(κ=0.735)。结论 T-SPOT·TB检测、T-SPOT·TB联合MGIT960检测、三者联合检测对结核病诊断有较高价值,三者联合检测的价值最高。

关键词：结核病结核分枝杆菌/利福平耐药基因检测结核感染T细胞斑点试验自动分枝杆菌培养及药敏检测系统

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利用TBAg/PHA斑点比值区分活动性与潜伏结核感染

利用TBAg/PHA斑点比值区分活动性与潜伏结核感染

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中华医学会结核病学分会2019年全国结核病学术大会

作者：孙海柏王潇刘佳庆刘利曹宏天津市海河医院

目的本研究的目的是确定结核病T细胞斑点试验(T-SPOT)检测中TBAg/PHA比值在活动性肺结核和潜伏肺结核感染诊断中的的意义。方法根据常规检测和T-SPOT检测,分别诊断出143例活动性肺结核(Active pulmonary truberculosis ATB)和124例潜伏...

目的本研究的目的是确定结核病T细胞斑点试验(T-SPOT)检测中TBAg/PHA比值在活动性肺结核和潜伏肺结核感染诊断中的的意义。方法根据常规检测和T-SPOT检测,分别诊断出143例活动性肺结核(Active pulmonary truberculosis ATB)和124例潜伏肺结核(Latent tuberculosis LTBI)患者的检测结果进行回顾性分析。结果活动性与潜伏性结核组***-TB检测结果中显示ESAT-6检测的斑点数存在差异,且有统计学意义,CFP-10斑点形成细胞P>0.05没有统计学意义,PHA斑点形成细胞两组比较P<0.001有统计学差异,TBAg/PHA比值两组间比较P<0.001,有统计学意义。

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太空飞行影响人参种子完成形态后熟后的代谢和转录差异研究

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中国中药杂志 2024年第18期 4913-4924页

作者：梁浩邵财孙海周季欣吕柏辰马福刚张亚玉中国农业科学院特产研究所成都大学食品与生物工程学院行天健药业集团有限公司

为探究太空飞行处理种子与地面种子在形态后熟完成后的代谢和转录差异，该研究以太空飞行处理和保存于地面的人参种子为材料，采用超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）技术和高通量转录组测序（RNA-seq）技术进行代谢组学和转录组学分... 详细信息

为探究太空飞行处理种子与地面种子在形态后熟完成后的代谢和转录差异，该研究以太空飞行处理和保存于地面的人参种子为材料，采用超高效液相色谱-质谱联用（UPLC-MS）技术和高通量转录组测序（RNA-seq）技术进行代谢组学和转录组学分析，筛选萜类差异代谢物、差异内源激素和差异表达基因。结果表明，通过代谢组学分析发现在实验组和对照组中共获得22个萜类差异代谢物，包括竹节参皂苷FK7（chikusetsusaponin FK7）、人参皂苷F2（ginsenoside F2）、人参皂苷K（ginseno-side K）、珠子参苷R1（majoroside R1）、人参皂苷Re5（ginsenoside Re5）、12-羟基松香酸（12-hydroxyabietic acid）等；通过转录组学分析在实验组和对照组中筛选了15个萜类代谢相关差异基因，包括FCase、AACT、PMK等，并基于MEP和MVA途径将这些基因整合到通路中，同时筛选出了种子萌发过程中的相关基因LEC2、PIPK、PUF、REC、QUD、PIR;在内源激素检测中，共获得17个差异激素代谢物，包括生长素（IAA）、细胞分裂素（CK）、茉莉酸（JA）、脱落酸（ABA）、赤霉素（GA）、水杨酸（SA）,其中CK在SP组中含量升高，GA和SA在SP组中含量下降，同时筛选得到CK、GA、SA相关的基因。该研究为进一步挖掘人参种子萜类代谢产物生物合成与种子萌发过程中的关键内源激素和酶基因奠定了基础，同时也为太空飞行诱变技术在人参中的应用研究提供了参考。

关键词：人参代谢组转录组萜类代谢内源激素

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