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凋亡相关基因bcl-2、bad在乳腺癌中的表达及意义

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重庆医科大学学报 2009年第6期34卷 702-705页

作者：陈建生孙治君于冰重庆医科大学附属第二医院普外科重庆400016

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2、bad在乳腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系。方法:采用免疫组化方法检测10例正常乳腺组织、10例乳腺纤维瘤组织、40例青年乳腺癌组织、40例老年乳腺癌组织中bcl-2、bad基因的表达,并检测80例乳腺癌组织... 详细信息

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2、bad在乳腺癌组织中的表达及其与患者预后的关系。方法:采用免疫组化方法检测10例正常乳腺组织、10例乳腺纤维瘤组织、40例青年乳腺癌组织、40例老年乳腺癌组织中bcl-2、bad基因的表达,并检测80例乳腺癌组织中ER、PR的表达。结果:bcl-2表达随乳腺癌的组织学分级增加呈递减趋势(P0.05)。结论:bcl-2、bad可以作为预测乳腺癌预后的因子。检测乳腺癌组织中bcl-2基因表达水平,特别是联合检测bcl-2、bad以及ER、PR的表达水平,有助于个体化判断乳腺癌患者的预后,并指导治疗。

关键词：乳腺癌 bcl-2基因 bad基因细胞凋亡

BMP4-siRNA重组腺病毒的构建及鉴定

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基础医学与临床 2011年第8期31卷 922-927页

作者：郭丹黄佳祎孙治君重庆医科大学第二附属医院普外科重庆400016 重庆医科大学基础医学院重庆400016

目的构建靶向抑制骨形态发生蛋白BMP4基因RNA的siRNA腺病毒,为进一步研究其在乳腺癌骨转移中的作用打下基础。方法以PCR扩增获得BMP4全长片段,插入筛选质粒pSOS载体,同时设计6段靶向BMP4基因RNA的干扰片段,分别经酶切、连接及鉴定后获得... 详细信息

目的构建靶向抑制骨形态发生蛋白BMP4基因RNA的siRNA腺病毒,为进一步研究其在乳腺癌骨转移中的作用打下基础。方法以PCR扩增获得BMP4全长片段,插入筛选质粒pSOS载体,同时设计6段靶向BMP4基因RNA的干扰片段,分别经酶切、连接及鉴定后获得pSOS-sirBMP4。脂质体转染293细胞,根据荧光表达量筛选获得干扰效率较高的4个干扰片段,插入穿梭质粒pSES-HUS,经重组、HEK-293细胞包装获得BMP4-siRNA腺病毒。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,RT-PCR、Western blot检测其干扰效率。MTT法检测其对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果筛选获得4个干扰效率较高的片段,插入穿梭质粒,经重组、包装获得腺病毒pAd-sirBMP4。感染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,明显抑制BMP4的表达并促进MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建具有较高干扰效率的腺病毒pAd-sirBMP4,为进一步研究BMP4在乳腺癌中的作用打下基础。

关键词： BMP4 siRNA 腺病毒乳腺癌骨转移

骨形态发生蛋白在乳腺癌增殖、转移中作用的初步筛选

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重庆医学 2010年第7期39卷 807-809页

作者：郭丹黄佳祎印国兵孙治君重庆医科大学第二附属医院普外科 400010 重庆医科大学第一附属医院内分泌科 400016

目的筛选获得可能与乳腺癌骨转移密切相关的骨形态发生蛋白(BMPs),为后期进一步研究乳腺癌骨转移的机制奠定基础。方法收集10种不同的人乳腺癌细胞株,RT-PCR检测14种BMPs的表达。选择表达频率和水平较高的BMPs,以腺病毒为介导感染高转... 详细信息

目的筛选获得可能与乳腺癌骨转移密切相关的骨形态发生蛋白(BMPs),为后期进一步研究乳腺癌骨转移的机制奠定基础。方法收集10种不同的人乳腺癌细胞株,RT-PCR检测14种BMPs的表达。选择表达频率和水平较高的BMPs,以腺病毒为介导感染高转移性的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231。用细胞生长曲线、划痕修复实验及Transwell细胞侵袭实验等检测其增殖、运动和侵袭能力的改变。结果在10种不同的人乳腺癌细胞株中,BMPs普遍表达,其中BMP2、4、7、11表达频率和水平较高。以腺病毒BMP2、4、7、11感染高转移性的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,生长曲线结果显示BMP2组和BMP4组生长曲线向左上移位,而BMP7组和BMP11组向右下移位;划痕修复实验提示BMP2组和BMP4组划痕愈合提前,而BMP7组和BMP11组延迟;与空病毒组(105±7.0)相比,BMP2组(125±10.0)和BMP4组(130±12.5)穿膜细胞数增加,而BMP7组(82±5.0)和BMP11组(71±9.5)的穿膜细胞数显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BMPs与乳腺癌的发生和转移密切相关,尤其是BMP2、4、7、11值得进一步关注。

关键词：骨形态发生蛋白乳腺癌骨转移

乌斯他丁和环磷酰胺对乳腺癌细胞增殖和侵袭及MMP-9表达的影响

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中国生物制品学杂志 2009年第9期22卷 865-868,875页

作者：陈建生孙治君于涛重庆医科大学第二附属医院普外科重庆400016

目的观察乌斯他丁(UTI)和环磷酰胺(CTX)对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)增殖、侵袭及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为8... 详细信息

目的观察乌斯他丁(UTI)和环磷酰胺(CTX)对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和乳腺癌细胞MDA-MB-231(雌激素受体阴性)增殖、侵袭及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为8组:对照组、UTI高、中、低剂量组、CTX组、CTX+UTI高、中、低剂量组,分别用相应药物处理。采用MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR检测细胞MMP-9基因的表达;Boyden小室侵袭试验检测两种细胞的浸袭能力。结果UTI可明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞周期阻滞在G2/M期,并能使2株细胞中MMP-9基因的转录水平下降,细胞的增殖侵袭能力降低。CTX与UTI联合应用,其作用效果优于CTX单独使用。结论UTI能增强CTX诱导的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖抑制作用,二者具有协同效应。其机制可能与UTI降低细胞MMP-9基因的表达等有关。

关键词：乌斯他丁环磷酰胺乳腺癌细胞增殖侵袭基质金属蛋白酶

CXCR4在乳腺癌中的表达及乌斯他丁对其表达的影响

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中国生物制品学杂志 2009年第6期22卷 548-551页

作者：于涛孙治君陈建生重庆医科大学附属第二医院普外科重庆400016

目的探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性,以及乌斯他丁(UTI)对其表达的影响。方法采用流式细胞术和RT-PCR法检测22例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231中CXCR4在蛋白和mRNA水... 详细信息

目的探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性,以及乌斯他丁(UTI)对其表达的影响。方法采用流式细胞术和RT-PCR法检测22例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231中CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达情况,以及UTI对MDA-MB-231细胞CXCR4表达的影响。结果在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中,CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织,且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;UTI能下调CXCR4的表达,经UTI作用后,MDA-MB-231细胞的趋化活性降低。结论CXCR4在乳腺癌中高表达,在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平可减少或抑制其转移。

关键词： CXC趋化因子受体4 乳腺癌乌斯他丁

单-ADP-核糖基转移酶3过表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡及侵袭的影响

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中国生物制品学杂志 2014年第1期27卷 72-75页

作者：谭令王慧宋晓丹崔晓江孙治君重庆医科大学附属第二医院三腺外科重庆400010 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 美国加利福尼亚州洛杉矶塞德斯-辛奈医学中心塞缪尔-奥斯钦综合癌症研究所女性癌症研究中心外科系美国加利福尼亚州洛杉矶90048

目的探讨单-ADP-核糖基转移酶3(mono-ADP-ribosyltransferase 3,ART3)过表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡及侵袭的影响。方法在Lipofectamine 2000的介导下,将ART3基因重组真核表达质粒pCMV-ART3-myc-tag转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231,用G418进行稳定转染细胞株的筛选,同时设未转染组对照。Western blot法检测稳定转染细胞中ART3-myc-tag蛋白的表达,MTT法、流式细胞术和Transwell试验分别检测ART3对MDA-MB-231细胞增殖活力、凋亡及侵袭能力的影响。结果 ART3可在MDA-MB-231细胞中稳定过表达;ART3转染组细胞的增殖活力和侵袭能力均明显高于未转染组(P<0.05);ART3转染组细胞的凋亡率明显低于未转染组(P<0.05)。结论过表达ART3能促进乳腺癌细胞增殖、侵袭,并抑制其凋亡,本实验为进一步研究ART3基因在乳腺癌发生发展中的作用及其机制奠定了基础。

关键词：单-ADP-核糖基转移酶乳腺癌 MDA—MB-23 1细胞细胞增殖细胞凋亡侵袭

乌司他丁抑制人乳腺癌细胞的侵袭和转移及其分子机制

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重庆医学 2012年第29期41卷 3023-3025,3029页

作者：王宁崔晓江孙治君重庆医科大学附属第二医院三腺外科 400010 外科系女性癌症研究中心/塞缪尔-奥斯钦综合癌症研究所/塞德斯-辛奈医学中心美国加利福尼亚州洛杉矶90048

目的通过测定不同浓度的乌司他丁(UTI)对体外乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和MDA-MB-231(雌激素受体阴性)干预后细胞中乙酰肝素酶(Hpse)、1型透明质酸酶(HYAL1)及细胞黏附分子CD44v6蛋白的表达情况,探讨其对癌细胞侵袭、转移抑制的... 详细信息

目的通过测定不同浓度的乌司他丁(UTI)对体外乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)和MDA-MB-231(雌激素受体阴性)干预后细胞中乙酰肝素酶(Hpse)、1型透明质酸酶(HYAL1)及细胞黏附分子CD44v6蛋白的表达情况,探讨其对癌细胞侵袭、转移抑制的分子机制。方法将体外培养的MCF-7及MDA-MB-231细胞分别随机分为:(1)对照组;(2)UTI低剂量干预组;(3)中剂量干预组;(4)高剂量干预组;(5)UTI中剂量+泰索帝(TXT)组。蛋白质印迹法(Western blot)检测各组细胞Hpse、HYAL1和CD44v6蛋白的表达;Matrigel穿膜侵袭实验检测细胞侵袭能力;Transwell小室细胞跨膜实验测定细胞的迁移能力。结果癌细胞中Hpse、HYAL1和CD44v6蛋白的表达随UTI浓度增加而降低,UTI与TXT联合用药抑制作用更加显著(P<0.05);乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力显著下降,UTI与TXT联合处理抑制作用更加明显(P<0.05)。结论 UTI抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移可能与Hpse、HYAL1、CD44v6蛋白的表达降低有关。

关键词：乳腺肿瘤乙酰肝素酶透明质酸葡糖胺酶 CD44v6 乌司他丁

乌司他丁和泰索帝对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及其机制

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中国生物制品学杂志 2011年第2期24卷 203-207页

作者：高峰孙治君赵晓亮罗杰重庆医科大学附属第二医院乳腺甲状腺胰腺外科重庆400010

目的探讨乌司他丁(Ulinastatin for injection,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231(ER-)增殖、侵袭及血管内皮生长因子-C(Vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)、碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblastgrowth factor,bFGF)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)mRNA转录水平的影响。方法体外培养MDA-MB-231细胞,随机分为4组:对照组(只加RPMI1640培养液)、UTI组(终浓度800 U/ml)、TXT组(3.7μg/ml)、UTI+TXT组(800 U/ml UTI+3.7μg/ml TXT)。给药后24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖水平;24 h,采用Transwell侵袭小室法检测细胞侵袭能力,实时荧光定量PCR法检测细胞VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA的转录水平。结果 UTI、TXT及UTI+TXT呈时间依赖性抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P均0.05);对细胞增殖、侵袭及VEGF-C、bFGF、NGF基因mRNA转录的抑制作用UTI+TXT>TXT>UTI。结论 UTI和TXT均可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭,UTI可增强TXT的抑制作用,其机制可能与下调VEGF-C、bFGF、NGF mRNA的表达有关。

关键词：乌司他丁泰索帝乳腺肿瘤细胞增殖肿瘤侵润药理作用分子作用机制

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Th1/Th2在乳腺癌组织中的表达与意义

第四军医大学学报 2007年第20期28卷 1899-1901页

作者：沈洪彦孙治君于冰重庆医科大学附属第一医院外五科重庆400016

目的:探讨Th1类细胞因子IL-2,IFN-γ及Th2类细胞因子IL-4和IL-10在青年和老年乳腺癌组织中的表达模式.方法:采用免疫组化方法检测105例良恶性乳腺组织中IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10的表达,并比较其阳性表达率和程度的差异.结果:青年组与老... 详细信息

目的:探讨Th1类细胞因子IL-2,IFN-γ及Th2类细胞因子IL-4和IL-10在青年和老年乳腺癌组织中的表达模式.方法:采用免疫组化方法检测105例良恶性乳腺组织中IL-2,IFN-γ,IL-4,IL-10的表达,并比较其阳性表达率和程度的差异.结果:青年组与老年组乳腺癌组织中Th1类细胞因子IL-2,IFN-γ阳性表达率较乳腺纤维瘤组显著降低,Th2类细胞因子IL-4和IL-10阳性表达率较乳腺纤维瘤组升高,差异有统计学意义(P<0.01).IL-2的表达水平在青年组与老年组随乳腺癌临床分期的增加而降低(P<0.05),青年组IL-2的表达水平低于老年组,差异有统计学意义(P<0.01);在青年组和老年组中腋窝淋巴结阳性组IL-4的表达水平均明显高于淋巴结阴性组(P<0.01).结论:乳腺癌癌组织中呈现Th2型免疫反应优势状态,Th1/Th2平衡向Th2方向漂移.在青年乳腺癌组织中Th1/Th2的比值更低.这可能是肿瘤细胞发生免疫逃逸,从而导致肿瘤的发生或者转移的原因之一.IL-2和IL-4联合检测对评价患者机体免疫水平、判断预后具有重要意义.

关键词：乳腺肿瘤白细胞介素-2 干扰素Ⅱ型白细胞介素-4 白细胞介素-10